Appendice
Préparation des réactifs pour la perfusion
1. Paraformaldehyde 4%
· preparation d'une solution de paraformaldehyde è
8% (pour préparer 1 L de solution)
80g de para
1L de PB 0,1
· protocole :
chauffer la quantité voulue de PB 0.1% à
70°C tout en agitant
peser le para sous hotte, puis verser dans le PB 0,1
préalablement chauffé.
laisser le mélange reposer jusqu'à ce qu'il
devient transparent
laisser refroidir
filtrer
dilution avant l'emplois (500mL de para à 8%
filtré + 500 mL de PB 0,1)
2. PBS
· 250 mL de PB 0,4
· 750 mL H2O distilée
· 9g de NaCl
Préparé la veille de la manipulation et
stocké à température ambiante 3. Sucrose 30%
· 150g de sucrose D
· 500 mL de PB 0,1
Préparation de réactifs pour immunohistochimie
1. PB 0,4
· 62,4g NaH2PO4 dans 1L d'H2O bi-distillée
· 356g Na2HPO4 dans 5L d'H2O bi-distillée
5L de Na2HPO4 + 0,9L de NaH2PO4 sont filtrés
2. PB 0,1
· 250 mL de PB 0,4 + 750 mL d'H2O distillé
3. PBS
· 1L de PB 0,1
· 9g d'NaCl
4. PBST
· 1L de PB 0,1
· 9g d'NaCl
· 3mL de triton 100
(conservation à 4°C)
5. NGST 1%
· 1mL NG (normal goat) dans 100mL de PBST
6. NGST 3%
· 3mL de NG dans 100 mL de PBST
7. Anticorps primaire
· Aliquots de 25 uL à 1\10 préalablement
préparés et congelés
· Dilution du AC I (anticorps primaire) à 1\7500
8. Anticorps secondaire (anti rabbit)
· l'AC II lyophilisé est dilué dans 1 mL
d'H2O distillée
· on dilue 4 gouttes de ACII dans 30mL de NGST 1%
9. VIP
· Dans 10 mL de PB 0,1 on mélange
3 gouttes de réactif 2
3 gouttes de réactif 3
3 gouttes d'H2O2
entre ces différents réactifs on ajoute 3 gouttes
du réactif 1
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