Analyses medicales aux services du CHU de Sidi bel Abbes et a la polyclinique de Sidi Djillali

4.4. ECHANTILLON ETUDIE

La glande thyroïde est une glande endocrine (dont la sécrétion va dans le sang) située à l'avant du cou, à sa base. Elle est responsable de la sécrétion des hormones thyroïdiennes, triiodothyronine (T3) et thyroxine (T4), représentant respectivement 20 et 80 % de la sécrétion de la totalité des hormones thyroïdiennes. Le contrôle de la sécrétion des hormones thyroïdiennes se fait par la glande hypophyse.

TECHNIQUE DE COLARATION DE « MAYER »

Cette technique diffère de celle de « PAPANICOLAOU » par la nature des réactifs et par la méthode, mais le but de cette coloration reste le même. (Tableau 5)

> On commence par appliquer au frottis une quantité de « May Grunwald pure » pendant 3 minutes ; cette solution doit être diluée d'1/2 dans du tampon pendant 3 minutes ;

> Sans rincer, on met le frottis dans de « Giemsa » de préférence diluée au 1/10^ème dans le même tampon pendant 20 minutes ;

> On lave rapidement dans le tampon ;

> On sèche, et on procède à un bain de xylène pendant 5 minutes ; > Puis on procède au montage.

Tableau5 : Coloration de « MAYER »

Le N°	PRODUITS		TEMPS	1
Alcool 95°	10 minutes		2
Eau diluée	10 secondes		3
Hématéine de Mayer	10 minutes		4
Eau diluée	2 minutes		5
Eosine aqueuse	10 secondes		6
Eau	2 minutes		7
Alcool 100°	10 minutes		8
Alcool 100°	10 minutes		9
Xylène ou Toluène	3 minutes

5. SALLE D'IMMUNOHISTOCHIMIE

Cette salle est récente, et n'acquiert pas beaucoup d'expert mais, toute fois des techniques sont mises en place. Elle comprend 5 étapes : Déparaffinage, Démasquage antigénique, étape de l'anticorps primaire et secondaire, coloration avec l'hématoxyline de Mayer, Lecture.

5.1. MATERIELS

· Lames et lamelles

· Récipients

· Automate

· Bain Marie

· Micro onde

5.2. PRODUITS

· Xylène

· Alcool 100°

· Eau distillé

· Eau oxygéné

· PBS

· La Biotine

· Streptavidine

· Coloration « Hématoxyline de Mayer »
· Eau ammoniaqué

5.3. METHODE

> On met des lames célanisées à incubation pendant 24 heures à 40 °C ;

> On procède ensuite au déparaffinage ;

> On met 4 fois 5 minutes dans un bain de xylène ;

> Réhydratation 4 fois 5 mn dans un alcool 100° absolu ;

> On rince avec de l'eau distillé 2 fois 5 minutes ;

> On entame l'étape du démasquage antigénique : Dans cette étape le choix des solutions est

fait selon son PH :~ PH ~ 6 dans le Micro onde

PH = 9 dans le Bain Marie

> Le PH de la solution doit être concentré au 1/10^ème ;

> Le récipient de la solution du démasquage doit être mis dans le bain Marie pendant 5 minutes puis dans le Micro onde, puis on la refroidi pendant 20 minutes ;

> Utiliser l'Automate

> Blocage des peroxydases d'eau oxygéné à 10 volumes ; puis rinçage à l'eau distillée ;

> On laisse incuber pendant 10 minutes ; ensuite on rince avec deux bains : l'eau distillé en premier puis le PBS ;

> On entame l'étape de l'Anticorps primaire ;

> On essuie les lames dans une chambre humide puis on les mets dans une solution de lavage à 10 volumes ;

> On met quelques gouttes de l'anticorps primaire ;

> On laisse incuber 2 heures pour fixation, puis on procède au rinçage avec deux bains de PBS dilués au 1/10ème ;

> On ajoute l'Anticorps secondaire : la Biotine pendant 30 minutes, on rince au PBS, puis on ajoute la Streptavidine pendant 20 minutes ;

> On met quelques gouttes de Chromogènes qu'on laisse pendant 1 heure. Ensuite on rince à l'eau distillée ;

> On entame l'étape de la coloration avec « L'Hématoxyline de Mayer » pendant 5 minutes, on rince à l'eau ammoniaquée, puis à l'eau distillée ;

> Pour le montage, on utilise l'Eukitt ou le Pharamount aqueux ;

> L'étape de La Lecture s'effectue par les médecins.

6. PRESENTATION DE LA ZONE MEDICALE

Cette zone est spécifique pour la lecture des lames préparées à l'aide d'un microscope optique. Elle est effectuée par les médecins.

CHAPITRE 01
PRESENTATION DU LABORATOIRE CENTRAL

Le laboratoire central est un laboratoire polyvalent où s'effectuent les différentes analyses sérologiques (les selles, les urines...), et hématologiques des échantillons de malades hospitalisés ou non.

Parmi les services que j'ai eu l'occasion de voir, le service de bactériologie et de parasitologie où s'effectuent des analyses qui ont pour but d'identifier les agents responsables des infections : bactéries, parasites, champignons microscopiques, etc. Elles procèdent par prélever un échantillon et à rechercher l'élément pathogène soit par observation directe soit après mise en culture. L'identification du germe pathogène aidera à définir le meilleur traitement et l'antibiotique efficace.

Aussi le service de biochimie s'occupe essentiellement des analyses qui consistent à mesurer les quantités des constituants des liquides biologiques (sang, urine, etc.) vu que la plupart des maladies ont en effet des répercussions sur leurs compositions, et leur étude peut aider au diagnostic et au suivi de nombreuses maladies.