PROTOCOLE DE MESURE DE L'ACTIVITE DE LA CATALASE
I - Solutions : KH2PO4 50mM ,
NaH2PO4 50mM, H2O2 1/200, Triton x 100 Bb dilué dans H2Obd,
Ethanol 95%.
II - Homogénéisation des tissus pour
dosages
- Tampon de broyage : : KH2PO4 100mM , DTT 1mM, EDTA-Na2
2mM, pH7.4 - Préparation des homogénats tissulaires:
* Peser 20-30mg de tissus
* Broyer dans 1mL de tampon de broyage à 4°C.
* Aliquoter 200 uL d'homogénat pour le dosage des
protéines totaux. * Congeler.
* Centrifuger 5 min à 5500 rpm , 4°C.
* Prélever et aliquoter le surnageant en fraction de
200uL.
* Congeler les aliquots à - 20°C
III - Préparation des surnageants.
*Ajouter 2 uL d'éthanol 95% à 200uL de surnageant
*Incuber 30 min à 4°C.
* Ajouter 2uL de triton x 100 à 1%
* Incuber 10 min à 4°C
IV - Dosage spectrophotométrique de
l'activité de la catalase.
La mesure de l'absorbance est faite à 240 nm
Deux blancs sont préparés dans 2 cuves pour faire
l'autozéro du spectrophotomètre. L'échantillon est
mesuré contre le blanc.
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Solution
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Blanc
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Echantillon
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MR (uL)
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1200
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900
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Surnageant (uL)
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50
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50
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H2O2 à 1/200 uL)
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0
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300
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La réaction est déclenchée par l'ajout du
surnageant.
La constance de vitesse de disparition de H2O2 est
définie telle que : K= 2,3/?t x log 10 ( DOo/DOt) sec-1 (Aebi H,
1982),
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