ANNEXE.4
Fiche technique de
Coloration au May Grünwald-Giemsa (MGG)
Indication : C'est la coloration
par excellence des FM en vue d'examens de cyto-hématologie et de
Parasitologie sanguine.
Matériel :
Lames
étalées (FM), cuves et colorants (May-Grünwald et Giemsa),
eau tamponnée, éprouvette
Mode opératoire :
· Recouvrir entièrement le frottis de la solution
de May-Grunwald et laisser agir 3 minutes.(Fixation du FM)
· Diluer en y ajoutant une égale quantité
d'eau (tamponnée) et laisser agir 2 minutes
· Rincer à l'eau du robinet (Coloration au MG)
· Recouvrir le FM d'une solution de Giemsa dilué
préparé extemporanément (1 vol. De Giemsa + 9 vol. d'eau
tamponnée) et laisser agir 15 à 20 minutes
· Rincer abondamment à l'eau du robinet,
égoutter et sécher à l'abri des poussières.
ANNEXE.5
Fiche technique de Coloration au Giemsa (OMS,
1994)
Indications : Le Giemsa est en
général utilisé dans la pratique pour la coloration des GE
des FM fixés préalablement en vue d'examens parasitologiques et
de cytohématologie.
Matériel : Lames à
colorer, Giemsa-R (solution mère), eau tamponnée,
éprouvette, pipettes compte-gouttes.
Mode opératoire :
§ Recouvrir les lames à colorer de Giemsa
(solution de travail) diluée
extemporanément
§ Laisser agir pendant 15 à 20 à
minutes
§ Rincer délicatement à l'eau
du robinet, égoutter et sécher à l'abri des
poussières.
§ Dans le cas de frottis pour recherche de
plasmodium, les noyaux leucocytaires sont violet foncé, la
chromatine du plasmodium est rouge foncé et son cytoplasme bleu
pâle.
Ø Préparation de Giemsa (solution de
travail)
Selon qu'on ait à faire au Giemsa Rapide ou au Giemsa
Lent, la solution mère sera diluée au 1/10e ou au
1/20e de préférence dans de l'eau
tamponnée (pH 7 - 7,2). Bien mélanger. A utiliser dans
la même journée. En pratique, pour une dilution au 1/10, prendra
2ml de Giemsa pour 18 ml d'eau tamponnée ; soit 20 ml de Giemsa
prêt à l'emploi. Ce qui correspond à la coloration de 5
lames.
ANNEXE.6
Fiche technique de préparation des
Réactifs et Colorants pour Diagnostic Microscopique du
Paludisme
1. May-Grünwald (MG) (OMS, 1994 ;
www.bioltrop.org)
a. Formule
§ Poudre de May-Grunwald : 5g
§ Méthanol : qsp 1000 ml
b. Préparation solution de
MG
§ Dans un flacon propre contenant des billes, introduire
la poudre et le méthanol.
§ Mélanger pour dissoudre toute la poudre.
Conserver le colorant à l'abri de la lumière, de la chaleur et
de l'humidité en le mélangeant régulièrement. Noter
la date de préparation : durée
conservation : 2 semaines au moins
2. Le Giemsa
C'est un mélange de poudre d'azur II -éosine
avec de petites quantités d'azur I et de bleu de méthylène
dissous dans un mélange de méthanol et de glycérol servant
à la fois de solvants et de conservateur. Sa dilution avec de l'eau
entraine une dissociation partielle de ces colorants responsables des
colorations basophiles et acidophiles des différents compartiments
cellulaires. D'où sa préparation extemporanée et son
instabilité après dilution à l'eau. Il existe 2 variantes
du Giemsa : le Giemsa rapide (responsable d'une coloration intense en peu
de temps) et le Giemsa lent qui colore moins rapidement.
a. Formule (solution
mère) (OMS, 1994; www.bioltrop.org)
· Colorant de Giemsa en poudre 0,75 g
· Méthanol (CH3OH) 65 ml
· Glycérine 35 ml
b. Préparation (solution mère)
(OMS, 1994)
· Commencer par verser le méthanol dans un flacon
contenant des billes de verre (ou des petits galets très propres) puis
ajouter la poudre et la laisser doucement se déposer au fond du flacon.
· Agiter ensuite pendant 3 minutes de manière
circulaire.
· Ajouter enfin le glycérol et mélanger de la
même manière. Remuer ensuite, toujours de cette manière 3
fois par jour, pendant 4 jours consécutifs.
· Filtrer. Noter la date de
fabrication.
Une solution mère se conserve environs trois mois
à l'abri de l'air (bien boucher), de la lumière (en flacon
opaque) et de l'humidité.
3. La technique de Wright. (BIOFORMA,
2001 ; OMS, 1994)
C'est une variante semblable au Giemsa utilisée au
Etats-Unis pour colorer les cellules.
a. Formule :
- Poudre de Wright : 0,3 g
- Glycérine : 3 ml
- Méthanol : 97ml
4. Préparation eau tamponnée (OMS,
1994)
§ Phosphate disodique (Na2HPO4, 2H2O) : 3,76 g
§ Phosphate monopotassique (KH2PO4) anhydre : 2,1g
§ Eau distillée : qsp. 1000 ml
NB. : Contrôler le pH à l'aide de
papiers indicateurs et il doit être compris entre 7,0 et 7,2
ANNEXE.7
Source : (Sayang , 2010)
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