Activité insecticide de cinq huiles essentielles vis-à -vis de Sitophilus oryzae (Coleoptera ; Curculionidae) et Tribolium confusum (Coleoptera; Tenebrionidae )

2.2 . Méthodes expérimentales

2.2.1 Méthode d'extraction des végétaux

L'extraction des huiles essentielles a été réalisée par le laboratoire Extral-bio (Chiffa Wilaya de Blida) par la méthode d'hydrodistillation. La méthode d'extraction est la suivante:

100g la matière fraiche est pesée et mis dans un ballon de 2000 ml. La matière végétale est ensuite immergée d'eau distillée au deux tiers du ballon (soit 1200 à 1500 ml d'eau distillée), le ballon est ensuite déposé sur un chauffe ballon avec réglage. La durée de distillation est de 2 à 3 heures. L'huile essentielles (phase surnageant) est séparée de l'eau par décantation (différence de densités) et ensuite séchée sur sulfate de sodium anhydre (Na2 SO4) à 15% avec agitation

Après séchage, l'huile essentielle est conditionnée dans des flacons en verre en fumé, hermétiquement fermés pour éviter tout risque d'altération. Les flacons remplis d'huiles essentielles sont conservés à une température de 4°C jusqu'à l'utilisation dans l'expérimentation.

2.2.2 Mode opératoire

a ) Evaluation de la toxicité des huiles essentielles par contact

Quatre solutions de chacune des huiles essentielles (2.46, 4.92, 9.85, 19,7 ul/ml d'acétone) ont été préparées en diluant des quantités connues d'huile dans l'acétone. 1,3 ml de chaque solution a été répandu uniformément sur un disque de papier filtre avec un diamètre de 9 cm à l'aide d'un micro-pulvérisateur. Après évaporation complète du solvant de dilution, chaque disque traité ou témoin (solvant seul) a été minutieusement placé dans une boîte de Pétri de même dimension 9 cm de diamètre et 2 cm de hauteur. Quatre répétitions ont été effectuées pour chaque huile essentielle. Un lot de 20 insectes adultes âgés de 14 jours a été introduit dans chaque boîte de Pétri qui a été aussitôt fermée.

Le nombre d'insectes morts a été comptabilisé chaque 24 heures pendant 6 jours de traitement.

b ) Evaluation de la toxicité des huiles essentielles par inhalation

Une solution de chaque produit avec la dose D4=0.4 ul/cm² (qui est une quantité suffisante pour saturer une atmosphère de 44 cm³ de volume c'est-à-dire une concentration de 9.10^-3 ul/cm³)

Des papiers filtres de 3 cm de diamètre sont imbibés de chaque solution d'huiles essentielles. Puis chacun d'eux est placé dans un couvercle contenant 20 insectes âgé de 14 jours. 4 répétitions sont réalisées ainsi pour chaque solution d'huiles essentielles et pour le témoin.

La mortalité des insectes est déterminée chaque jour pendant 6 jours après le traitement.

c ) Evaluation de la toxicité des huiles essentielles par ingestion

· Sur les grains de blé tendre

Pour chaque essai une solution acétonique contenant des huiles essentielles avec les doses (3.2, 6.4, 12.8, 25.6 ul) mélangé convenablement avec 10 g de graines contenus dans une boîte en verre. Les essais ont été répétés 4 fois pour chaque dose. Toutes les boîtes ont été infestées par 20 insectes de S. oryzae âgés de 14 jours. Les comptages des insectes morts ont été réalisés quotidiennement pendant une période de 6 jours. Les mortalités enregistrées dans les lots de grains traités sont été exprimées en % de mortalité corrigée.

· Sur des graines reconstituées

Pour chaque essai, 10 g de la farine commerciale mélangé 25,6 ul de chaque huile essentielle et on a ajouté un volume de 7 à 10 ml d'eau, puis on a découpé la masse de la farine en petits cylindre de 1 cm de longueur et 0,5 de diamètre. Pour chaque produit quatre répétitions ont été effectuées. Les petits cylindres sont répartis dans des pots à vis de volume 44 cm³, puis on a introduit cinq couples de S oryzae dans chaque pot à vis.

12 jours après l'infestation, les couples sont retirés, le comptage des émergences se fait 20 jours après l'infestation durant 60 jours.

· Sur la farine commerciale

Pour chaque essai, 1,3 ml d'une solution acétonique contenant chacune des huiles essentielles à 2.46, 4.92, 9.85, 19,7 ul/ml d'acétone a été mélangée convenablement avec 10 g de la farine commerciale dans une boîte en verre. Les essais ont été répétés 4 fois pour chaque dose. Toutes les boîtes ont été infestées par 20 insectes de T.confusum âgés de 14 jours au plus. Les

comptages des insectes morts ont été réalisés chaque jour pendant une période de 6 jours. Les mortalités enregistrées ont été exprimées après la correction avec les résultats du témoin.