III-4-3-5- Caractérisation des
stéroïdes et triterpènes (10, 13)
Ces composés ne sont recherchés que dans les
extraits n-hexanique, méthanolique et sur les fractions A et B issues du
partage liquide-liquide de l'extrait n-hexanique avec de l'éthanol.
La méthode employée est celle de
LIBERMANN-BURCHARD.
Une fraction de l'extrait à étudier est dissoute
dans un mélange d'anhydride acétique et de chloroforme (1/1). Une
fraction de la solution obtenue (1 à 2 ml) est transférée
dans un tube à essai; puis à l'aide d'une pipette on
dépose délicatement sur la paroi du tube environ 2 ml d'acide
sulfurique (H2SO4) concentré.
La réaction est positive lorsqu'il apparaît
à l'interface des deux phases un anneau rouge-brun ou violet.
Ce protocole peut directement s'appliquer à l'extrait
n-hexanique. Mais pour ce qui concerne l'extrait méthanolique il doit
d'abord subir une hydrolyse acide.
* Hydrolyse acide de l'extrait
méthanolique (33)
Une fraction de l'extrait méthanolique est redissout
dans environ 25 ml de méthanol. A la solution obtenue on ajoute 15 ml
d'acide chlorhydrique (HCl) 10% et l'ensemble est porté à
chauffer au reflux à environ 70° C pendant 30 mn.
Durant l'hydrolyse, la solution devient opalescente à
cause de la précipitation des aglycones obtenus par la coupure des
hétérosides.
Après refroidissement la solution est extraite trois
fois avec du n-hexane dans une ampoule à décanter (10 à 12
ml) 3 fois soit au total 30 à 36 ml d'extrait n-hexanique (bis).
Ce dernier est déshydraté avec du sulfate de
sodium anhydre (Na2SO4).
Une partie de cet extrait n-hexanique (bis), après
évaporation à sec servira pour le test de LIBERMANN-BURCHARD.
Le reste de cet extrait n-hexanique (bis) servira aussi
à caractériser les flavonoïdes, les coumarines et les
anthracénosides.
III-4-3-6- Caractérisation des pigments
anthocyaniques (10, 33)
Ils sont recherchés dans l'extrait alcoolique
hydrolysé obtenu ci-haut.
Si la solution aqueuse acide obtenue après hydrolyse de
l'extrait alcoolique est rouge et vire au violet à pH neutre, au vert
à pH basique, c'est que les anthocyanes sont présents.
N.B.: Pour faire varier le pH nous
avons utilisé une solution de soude caustique (NaOH) 10%, et à
l'aide du papier pH nous avons suivi la variation du pH.
III-4-3-7- Caractérisation des flavonoïdes
(23)
Ils sont recherchés sur les extraits n-hexanique et
n-hexanique (bis).
La méthode employée est celle de SHIBATA ou
réaction à la cyanidine.
Quelques mg de l'extrait à étudier est dissout
dans du méthanol 50°. On y ajoute un fragment de tournure de
magnésium puis quelques gouttes d'acide chlorhydrique (HCl)
concentré.
Il se produit une réaction exothermique mousseuse. A la
fin d'une réaction positive il apparaît:
- une coloration rouge indiquant la présence des
flavonols aglycones ou
- une coloration orange indiquant la présence des
flavonones aglycones.
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