8-LES PRELEVEMENTS
8.1- Prélèvement sanguin
8.1.1- Pour la NFS et la CRP
Nous avons fait un prélèvement de sang sur les
vaisseaux périphériques, après désinfection du site
de ponction à l'aide d'une compresse imbibée d'alcool, le sang
veineux prélevé était mis dans un tube citraté et
acheminé au laboratoire. La NFS était faite à l'aide d'une
machine de marque MINDRAY BC 2800 et la CRP avec un réactif de CRP par
la technique d'agglutination avec 50 ul de sang du patient et 50 ul de
réactif qu'on mélange pendant deux minutes, s'il y a
agglutination, on dilue et on lit le résultat.
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METHODOLOGIE
8.1.2- Pour l'hémoculture
Principe : Après désinfection
du site de ponction qui était le pli inguinal où on
repérait le pouls fémoral, nous prélevons du sang veineux
qu'on mettait en culture dans des milieux spécifiques (aérobies
et anaérobies) appelés bouillons de culture.
8.1.2.1- Mode opératoire
Incubation et surveillance
L'incubation s'est fait en atmosphère aérobie
à + 37°C et en anaérobies. Les bouillons ont
été examinés tous les jours au moins deux fois pendant les
3 premiers jours à la recherche de signes de croissance microbienne. Une
culture stérile a montré en général un
dépôt d'hématies recouvert d'un bouillon transparent jaune
pale. La croissance a été attestée par un
dépôt floculeux au-dessus de la couche d'hématies, un
trouble uniforme ou situé juste sur la surface, une hémolyse, une
coagulation du bouillon, une production de gaz, la présence de grains
blancs à la surface ou à l'intérieur de la couche de sang.
Chaque fois qu'une croissance a été visible, le flacon
était ouvert en conditions aseptique, et à l'aide d'une anse
stérile ou d'une pipette pasteur, une petite quantité de bouillon
était prélevée pour faire un frottis coloré au gram
dans lequel on recherchait la présence des germes.
En cas d'une hémoculture positive
Le bouillon devenait trouble en 2-3 jours, on faisait un
examen à l'état frais puis une coloration de Gram. On repiquait
en ensemencement en stries le contenu d'une anse sur les milieux suivants :
CHAPMAN pour staphylocoques, Mac-Conkey, Kligler, Urée-indole
pour Bacilles Gram (-). On a ensemencé une galerie d'identification API
120E, recherché les antigènes solubles et
réaliser un antibiogramme.
Pour le Staphylococcus aureus, à la coloration de
gram, on a observé des Cocci gram positifs en pairs ou amas. On a
déterminé l'apparence des colonies sur le mannitol Salt agar
(Chapman), les colonies étaient en forme de points et jaunâtres
car elles fermentent le mannitol. On les a également
déterminé sur Cled, d'où le nom aureus ou OR. On a fait
ensuite le test à la coagulase, catalase positifs et pour la
sensibilité, on a utilisé le disque de Novobiocin.
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METHODOLOGIE
En cas d'une hémoculture
négative
Les bouillons non suspects étaient gardés
pendant 7 à 10 jours, repiqués systématiquement sur
gélose au sang. Si la culture était négative, les
bouillons étaient tous simplement détruis.
8.1.2.2- Interprétation des résultats
Hémoculture positive
Le diagnostic bactériologique était sûr en
présence de bactéries pathogènes spécifiques.
En présence de bactéries pathogènes
opportunistes, le diagnostic reposait sur leur isolement dans plusieurs ballons
successifs, si la culture était positive dans un seul ballon, le choix
devenait difficile entre une souillure et une bactériémie avec
présence de plusieurs germes dans un ballon.
Hémoculture négative
Dans ce cas les hypothèses évoquées
étaient les suivantes : Absence d'infection bactérienne du sang,
hémoculture faite tardivement dans l'évolution de la maladie,
malade sous antibiotique, quantité de sang prélevée
insuffisante, milieux ou conditions de culture inappropriées,
délai d'observation trop court.
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