Clonage et expression de la protéine CFP10 de Mycobactérium Tuberculosis dans Pichia Pastoris

ANNEXES

Tampons et milieux de culture

?Les tampons

- PBS (Phosphate buffered saline): 1.4M NaCL, 27Mm KCL, 101Mm Na₂HPO₄ (pH7.3).

- TE: Tris EDTA: 10Mm Tris HCL (pH8), 1Mm EDTA (pH8).

- TBE 5X (Tris Borate EDTA) : 0.045Mm Tris Borate, 0.001M EDTA.

- TAE 1X (Tris Acetate EDTA) : 0.04M Tris Acetate, 0.001M EDTA.

- Un tampon d'échantillon : 50%glycérol, 10Mm EDTA et du bleu de bromophénol à 1%.

?Les milieux de culture

- LBLS (Luria Bertani Low Solt Medium) : 1% Bactotryptone, 0.5% Extrait de levure, 0.5% Nacl, le milieu est stérilisé par autoclavage 20 min à 121°C a une pression de 1.5 Bar.

- LBLS Agar : LBLS + 20g/l Agar.

- BMGY (Buffered complex medium containing glycerol): 1% extrait de levure, 2% peptone, 100Mm phosphate de potassium pH6, 1.34% Yeast Nitrogen Base (YNB) et 1% glycerol, 4×10^-5% biotin.

- BMMY (Buffred Methanol-complex Medium (de même composition que le BMGY mais on remplace le glycérol par par 1% ou 2% de méthanol).

- YPD (Yeast extract Peptone Dextrose Medium) : 1% extrait de levure, 2% peptone, 2% Dextrose.

- YPDS Agar : YPD + 18.2% Sorbitol 1M, 0.2% Agar