A. Préparation et stérilisation de la
verrerie
Les ballons, les boîtes de Pétri, les erlenmeyers,
les tubes à essai, les pipettes et les piluliers bien propres et secs
ont été bouchés à l'ouate et emballés chacun
dans un papier journal.
En se servant d'un perforateur, des disques de 5 mm de
diamètre ont été découpés sur un papier
filtre. Une fois découpés, les disques ont été mis
dans une boîte de Pétri.
L'ensemble de tout ce matériel a été
stérilisé au four Pasteur à 160 C pendant 60 minutes.
B. Techniques d'asepsie
Toutes les opérations en microbiologie se font en
évitant toute contamination éventuelle par d'autres organismes
que ceux qui sont utilisés, c'est-à-dire de façon
aseptique.
- Les opérations se font autour d'une flamme qui
éloigne les micro-organismes de l'air.
- Les boîtes de Pétri sont entrouvertes juste le
temps nécessaire à la manipulation. Il est
conseillé d'éviter de toucher les bords du
couvercle et de la boîte même : la boîte de
Pétri est prise par le pouce et l'index.
- Les fils et les anses servant aux repiquages et aux
ensemencements sont rougis avant d'effectuer les prélèvements et
les repiquages. Après cette opération, les fils et les anses sont
à nouveau rougis pour tuer tous les organismes restants.
- Les tubes à essai bouchés au coton sont tenus
inclinés dans la main gauche et ouverts à la main droite qui
tient par ailleurs l'instrument d'ensemencement. Le petit doigt replié
sert à saisir et sortir (en tournant) la mèche du coton obturant
le tube. Le pouce et l'index à tenir l'instrument d'ensemencement.
Aussitôt ouvert, l'orifice du tube est porté quelques secondes
dans la flamme.
Après l'ensemencement, l'orifice du tube est à
nouveau flambé avant d'être bouché. Pendant tout ce temps,
l'ouate ne devra être souillée par aucun contact (la main, la
table, etc.) (VAN PEE et coll., S.D.).
2.2.4.2. Préculture
Le bouillon peptone a servi de milieu pour les
précultures. 3 tubes a essai ont été ensemencés
chacun de souche bactérienne différentes. Après une
incubation de 24 heures à l'étuve, les bactéries ont
été conservées au réfrigérateur à
#177; 6°C, ce qui a permis de les garder en latence en attendant leur
utilisation.
2.2.4.3. Culture sur milieu solide
Un seul milieu de culture solide a été
utilisé à savoir : la gélose nutritive qui a
été coulée dans des boîtes de Pétri.
Des précultures réalisées comme
décrit au paragraphe 2.2.4.2., quelques millilitres ont
été pipetés et coulés sur les milieux
solidifiés dans les boîtes afin de former un tapis microbien.
À cette étape, il a été
procédé au dépôt soigneux des disques à la
surface du tapis. Après 48 heures à l'étuve les zones
d'inhibition ont été lues.
Aussi, afin de se rendre compte de l'effet bactéricide
ou bactériostatique des extraits aqueux et organique, il a
été procédé au repiquage de la zone d'inhibition,
à l'aide d'une anse de platine dans du bouillon peptone.
Le tout a été incubé à 37°C et
les observations se sont accomplies 24 heures et 48 heures
après.
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