Dosage des polyphénols de la tomate et étude de leur pouvoir anti oxydant

ANNEXES

Protocole Expérimentale :

Broyage

Séchage «  l'étuve 50-60 °C »

Matière Végétale

« Tomates  et pelures»

Extraction

Pesée

Analyses Physico-chimiques

Extraction des polyphénols à partir des fruits et pelures

Dosage de Lycopène

Extraits Phénoliques

Dosage des polyphénols totaux

Dosage des Flavonoides

Dosage des Antocyanes

Evaluation du pouvoir

Anti -oxydant

Annexes 1 :

Les courbes d'étalonnages :

Préparation d'acide Gallique :

2mg d'Acide Gallique + 1ml éthanol

C = (cxv)/m

C : Teneur en (mg d'acide gallique / g de matière sèche)

c : Concentration d'acide Gallique établie à partir de la courbe d'étalonnage (mg/ml)

v : Volume de l'extrait méthanolique

m : Poids de la matière sèche(g).

On dilue la solution standardisé d'acide Gallique de manière à avoir les Concentrations suivante : 2/1/0.5/0.25/0.12/0.06/0.03/0.01 mg/ml

On dilue 0.5ml de chacune de ces solutions dans 5ml d'ED.

Puis on ajoute 0.5ml de Réactif de Folin et on laisse reposer 3mn.

On ajoute ensuite 0.5ml de la solution saturée de Na₂CO₃ à 10%

La couleur bleu commence à apparaître. Après 1 heure du Temps on mesure la DO des ces solutions avec un spectrophotomètre UV à 750nm.

DO	0,158	0,33	0,452	0,622	0,85	1,0353	1,2
Concentration mg/ml	0,0156	0,0187	0,0312	0,0375	0,0625	0,1	0,125

Fig. Courbe d'étalonnage des polyphénols totaux

Courbe d'étalonnage des Catéchines

Concentration mg/ml	4,637	9,274	13,911	18,548	23,185	27,822	32,459	37,096
Absorbance nm	0,09	0,186	0,264	0,408	0,493	0,632	0,738	0,933

Fig. Courbe d'étalonnage des Flavonoïdes

Courbe d'étalonnage des sucres totaux

Absorbance nm	0	0,002	0,004	0,006	0,008	0,01
Concentration mg/ml	0	0,076	0,138	0,209	0,301	0,41

Fig. Courbe d'étalonnage des sucres totaux

Courbe d'étalonnage du lycopène

Concentrations mg/ml	0	0,0021	0,005	0,007	0,009
DO	0	0,556	1,349	1,998	2,5

Fig. Courbe d'étalonnage du lycopène

Courbe du pouvoir réducteur d'acide ascorbique

Concentrations mg/ml	0,01562	0,03125	0,06125	0,125	0,25	0,5
DO	0,409	0,865	1,456	2,113	2,575	2,889

Fig. Pouvoir réducteur d'acide ascorbique

Préparation des Solutions :

Préparation du Folin Ciocalteu :

Selon Djeridane et al, (2006), la solution du Folin- Ciocalteu doit être diluée à 1/10.

Donc, on place 1 ml du réactif concentré dans une fiole et on complète jusqu'à 10 ml avec l'eau distillée.

Préparation d'une solution de 250ml de NaOH 0.1 :

1. Calcul de la masse NaOH pour préparer 250 ml de 0.1N

n = (m_NaOH / M _NaOH) x Z _(eq) / V _(l)

donc :

m_NaOH = n x M _NaOH x V _(l) / Z _(eq)

2. La masse Molaire :

M = 23+16+1= 40 g/mole

Z = 1

Alors :

m _NaOH = 0.1 x 40 x 0.25/1 = 1 g

Préparation d'une solution de 0.1N HCl de 250 ml

1. On calcul la concentration de la solution commerciale ( solution mère) du HCl :

La masse volumique de la solution mère est donnée par la relation :

d= u_mère / u_eau

u_mère = d x u_eau = 1.18 x 1000 = 1180g/l

un litre de solution mère a une masse de 1180 g.comme le pourcentage massique en acide HCl est de 35% , on peut dire que :

1L de solution mère contient m = 1180 x ( 35 x 100) = 413 g d'HCl

2. La masse molaire d'HCl :

M (HCl) = 1+3505 = 36.5 g/mole

1L de solution mère contient n = m/M = 413 /63 = 11.31 mole d'acide

La concentration molaire volumique de la solution mère est donc :

C _mère = n/v = 11.31 /1 = 11.31 mole/l

3. Préparation d'une solution diluée (fille) :

n_fille = n _mère / C_fille x V _fille = C_mère x V _mère ? 0.1 x 0.25 =11.31 x V _{mère prélevé}

donc : V _{mère prélevé} = 0.0022 l = 2.2ml prélevé de la solution mère d'HCl pour préparer une solution de 0.1N de 250 ml

Préparation d'une solution tampon de phosphate (0.1 M)

Solution A: 0.1M

Na₂HPO₄ · 2H₂O 35.61 g

ou Na₂HPO₄ · 7H₂O 53.65 g

ou Na₂HPO₄ · 12H₂O 71.64 g

et on ajoute H₂O pour 1 L de solution

Solution B: 0.1 M

NaH₂PO₄ · H₂O 27.6 g

ou NaH₂PO₄ · 2H₂O 31.21

et on ajoute H₂O pour 1 L de solution

Préparer en mélangeant deux solutions comme est indiqué dans ce tableau et diluer à 100 ml avec H2O distillée

pH à 25 °C	Solution A	Solution B
6.4	13.25	36.75
6.6	18.75	31.25
6.8	24.5	25.5
7.0	30.5	19.5
7.2	36.0	14.0
7.4	40.5	9.5
7.6	43.5	6.5
7.8	43.75	4.25
8.0	47.35	2.65