Résultats
Les premières expériences consistaient à
perfuser un tubule d'abord avec du Ringer ne contenant aucun inhibiteur ni
hormone ( Témoin ) puis le liquide de perfusion est
remplacé par du Ringer dans lequel on ajoute du barium ( 10 mM ). Dans
le troisième perfusât il y a du barium (10 mM ) et on ajoute
également de l'arginine vasopressine ( AVP )7 dans le
Ringer-bain ( 10-9 M ). Selon les connaissances actuelles sur les
transporteurs membranaires dans la branche large ascendante on s'attend
à voir une baisse de flux transépithèlial de chlore
lorsqu'on passe de premier perfusât au deuxième. Ceci s'explique
par le fait que les canaux sélectifs au potassium sont inhibés
par la barium. Comme la concentration de potassium dans le perfusât est
initialement basse, et comme il n'y a pas de rétrodiffusion de
K+ à travers la membrane luminale, l'échangeur
Na+/K+ (NH4+)/2Cl- est
inhibé par manque de substrat. Ces résultats sont
cohérents avec les connaissances actuelles sur les transporteurs
membranaires. Cependant, lorsqu'on perfuse le même tubule avec du Ringer
au quel on a ajouté du Barium, en le plongeant dans un bain auquel on a
ajouté de l'AVP on observe que le transport du chlore augmente.
7 La composition exacte des Ringers différents; en
document annexe
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Figure 9. Les résultats montrant
l'évolution du transport du chlore en
présence du barium
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L'AVP est une hormone pour laquelle il a été
démontré qu'elle stimule l'absorption de NaCl dans la branche
large ascendante. Or comme le liquide de perfusion contient du barium le
transport de chlore devrait rester inhibé malgré l'action d'AVP.
Si l'échangeur Na+/K+/2Cl- est le seul
transporteur de chlore ce transport serait interrompu tant que les canaux
à potassium restent inhibés par le barium. Le
rétablissement du transport transépithèlial a conduit
à supposer l'existence d'un autre système de transport de chlore
sur la membrane luminale de la branche large ascendante. D'autres
recherches8 ont démontré l'existence d'une
protéine sur la membrane luminale et basolatérale des cellules
épithéliales de la branche large ascendante dont le rôle
serait le transport de chlore et de bicarbonate. Si l'activité de cet
échangeur est suffisamment importante, elle suffirait à expliquer
la reprise du transport du chlore, car c'est l'échangeur
Cl-/HCO3- qui serait stimulé par l'AVP, les canaux
K+ restant inhibés par barium. Il reste, cependant, à
démontrer que l'échangeur Cl-/HCO3- joue
réellement un rôle dans la branche large ascendante. Afin de
démontrer ceci, un deuxième protocole à été
mis au point.
Le segment du tubule est perfusé avec trois
perfusâts différents. Le premier contient du barium, le
deuxième et le troisième du barium et du
4,4'-diisothiocyanatestilbène-2,2'-disulfonate ( DIDS ). Lorsqu'on
perfuse avec le troisième perfusât on ajoute de l'AVP dans le
bain. Le DIDS est un inhibiteur de tous les transporteurs d'anions. Il inhibe,
ainsi, l'échangeur Cl-/HCO3-; ceci a
été démontré sur d'autres segments. Cet
échangeur est déjà connu; le premier avait
été observé dans les érythrocytes. La
présence du barium doit maintenir les canaux K+,
et par conséquent les transporteurs Na+/K+/2Cl-, inhibés;
donc si un transport de chlore est perceptible, il est forcement dû
à d'autres mécanismes de transport que l'échangeur
Na+/K+/2Cl-. Lorsqu'on ajoute du DIDS on note que le transport de chlore est
quasiment nul ( ou certainement considérablement réduit ) ce qui
nous permet de conclure que c'est bien le Cl-/HCO3- qui
est responsable de ce transport. Lorsqu'on ajoute de l'AVP on n'observe aucune
augmentation du transport de chlore ce qui veut dire ou que tous les
transporteurs de chlore ont été inhibés, l'un par le
barium, l'autre par DIDS.
8 Il s'agit de résultats de l'équipe de R.A.
Podevin qui ont démontré l'existence de ce transporteur sur les
deux membranes de la branche large ascendante. L'expérience de P.
Houillier vise à démontrer que cette protéine joue un
rôle non négligeable dans les transports
transépithèliaux dans la branche large ascendante
70
60
50
40
30
20
10
0
Ba++ Ba+ DIDS Ba+DIDS
AVP
-10
5
4
3
2
1
0
-1
Le flux transmembranaire Potentiel
transépithelial
Ba++ Ba+ DIDS Ba+DIDS
AVP
Figure 10. Les résultats montrant
l'évolution du transport du chlore et du potentiel
transépithèlial en présence du barium, du barium + dids et
du barium+dids+avp
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