IV.4 Etapes et techniques de production des
sérums
Le sérum sanguin est le liquide jaunâtre que
laisse peu à peu transsuder le caillot après la coagulation du
sang (400 g/l de sang). Le sérum sanguin à la même
composition que le plasma ; il en diffère cependant par l'absence de
fibrinogène [15]. L'obtention de sérum à
but thérapeutique passe par plusieurs étapes et peut se faire
chez l'Homme comme chez l'animal, en général le cheval.
Elle débute par l'étape d'immunisation et se
termine par l'étape de purification des immunoglobulines obtenues.
IV.4.1 Immunisations
C'est l'étape de l'administration des antigènes
spécifiques chez l'animal producteur de sérum. Le principe est
basé sur l'utilisation d'antigènes de faible poids
moléculaire qui pourront être couplés à une plus
grosse molécule (carrier en anglais), en général
l'albumine Ce couplage, améliore l'immunogénicité de ces
petits antigènes et permet d'obtenir des anticorps de forte
affinité contre l'antigène.
Dans certains cas, des adjuvants (adjuvant de Freund) sont
associés aux substances à administrer permettant
d'améliorer la réaction immunitaire à travers une
réaction inflammatoire et la protection de l'antigène.
D'autres techniques employant une dilution d'organes comme
antigène n'utilisent pas d'adjuvant.
Le protocole d'immunisation consiste à injecter
l'antigène à l'animal en plusieurs injections
séparées en moyenne d'un mois ; si nécessaire les
injections peuvent être pratiquées à des intervalles plus
grands (2-3 mois par exemple) sans que cela semble avoir une influence sur la
qualité des sérums obtenus [14].
Les injections se font par voie sous-cutanée ou
intramusculaire ou intraveineuse, par petits volumes (0,1-0,2 ml) en autant de
points qu'il est nécessaire : l'injection en plusieurs points
évite la formation d'un trop important tissu cicatriciel autour de la
substance injectée et favoriserait la réponse immunologique.
L'injection près des (ou dans les) zones riches en ganglions
lymphatiques (cou, pattes, rate) peut également favoriser la
réponse immunologique.
IV.4.2 Saignée et conservation des sérums
IV.4.2.1 Récolte du sang
Après la première injection, les anticorps
apparaissent lentement (10-30 jours). Leur concentration et leur avidité
sont généralement faibles. Par contre, après chaque
injection de rappel le taux d'anticorps augmente rapidement et atteint un
plateau au bout de 4-8 jours: ce plateau se maintient pendant plusieurs
semaines (souvent plus de 30 jours).
L'avidité de l'antisérum peut être bonne
dès la deuxième injection et atteint souvent un maximum à
la 3ème ou 4ème injection de rappel. La
concentration d'anticorps après la troisième injection de rappel
tend souvent à décroître, alors que l'affinité se
stabilise ou parfois même continue à croître
légèrement [14].
En pratique, on pourra donc faire une ou plusieurs
récoltes de sang à partir de 6-10 jours après chaque
injection de rappel et si nécessaire répéter ces
saignées tous les 4-5 jours en cas de besoin de grandes quantités
d'antisérum. Quelques dizaines de ml (jusqu'à 50 ml) seront
prélevés à l'oreille d'un lapin. Le lapin est un animal
très facile à manipuler : il suffit de l'installer dans une
boîte à sa taille pour qu'il reste immobile.
Chez le cheval, la récolte du sang peut être
réalisé par plasmaphérèse (fig. 8); ce qui permet
de recueillir le plasma (fig. 9) et de remettre les cellules sanguines à
l'animal
Figure 8 : Récolte de plasma par
plasmaphérèse (source : Dr Miled Kh., IP Tunis).
Figure 9 : Poche de plasma
récolté d'un cheval (source : Dr Miled Kh., IP Tunis).
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