Recherche de nouvelles souches fongiques productrices d' antibiotiques à partir du sol et des concrétions sédimentaires des grottes de Aà¯n Fezza.

2-1-4- Identification :

a- Identification préliminaire :

Les souches pures ont été caractérisées par, leurs aspects culturaux et morphologiques.

· Les caractéristiques culturaux : Ils ont été déterminés par le diamètre des colonies, la couleur, la forme et la sécrétion des pigments diffusible.

· Les caractéristiques morphologiques : Ils ont été déterminés par la technique de microculture; qui consiste à cultiver les moisissures sur des lames menées de petits carrés de PDA_a solidifié et les couvrir par des lamelles, ensuite les conditionner dans une chambre stérile et humide et les incuber à 25°C pendant 3 à 5 jours. Après l'incubation, on effectue les observations des lames grâce à un microscope de type Zeiss au grossissement × 10, × 40 et × 100.

b- Identification de l'espèce :

Afin d'identifier l'espèce de certaines souches importantes dans notre travail, on a utilisé deux techniques :

* Technique1 : C'est la technique de « Single Spore » décrit par Ramirez (1982).

Cette méthode est basée sur la relation entre l'a_w du milieu de culture et la température d'incubation. Elle consiste à l'inoculation des spores de cultures jeunes dans des tubes à hémolyse contenant une suspension à base de 0,2 % d'Agar et 0,05 ml de Tween 80. La culture, ensuite, se fait sur quatre milieux de cultures différents.

* CDA (Czapek Dextrose Agar)

*CYA (Czapek Yeast Agar)

*G25N ( 25% Glycérol Nitrate Agar)

* MEA (Malt Extract Agar)

Les ensemencements ont été effectués comme indiquée dans le schéma ci dessous :

CDA CYA CYA G25N MEA

25°C 4°C 37°C 25°C 25°C

Après 14 jours d'incubation, les caractéristiques culturaux du souche à identifier sur différents milieux ont été comparées aux guide de Ramirez (1982) afin d'apprécier l'espèce qu'elle appartienne.

* Technique 2 : Cette technique était utilisée pour certaines souches afin de donner plus d'information sur leurs caractéristiques culturaux suivant la composition du milieu de culture et le temps d'incubation. Pour la réaliser, on a utilisé deux méthodes :

- Culture en boite de Pétri : Elle consiste à l'inoculation des spores de cultures jeunes dans des tubes à hémolyse contenant une suspension à base de 0,2 % d'Agar et 0,05 ml de Tween 80. La culture, ensuite, se fait sur sept milieux de culture :

* AFPA (Aspergillus Flavus / Parasiticus Agar)

* ISP₂ (International Streptomyces Project)

* MEA (Malt Extract Agar)

* MYEA (Malt Yeast Extract Agar)

* YEA (Yeast Extract Agar)

* YESA (Yeast Extract Starch Agar): Ce milieu était préparé dans notre laboratoire à base de deux milieux de culture YEA et YSA. Il n'a aucune référence bibliographique, c'est le résultat de notre travail.

* YSA (Yeast Starch Agar).

Les ensemencements ont été effectués par un seul point. Après 14 jours d'incubation à 25°C, on a noté les caractéristiques culturaux sur chaque milieu de culture.

-Culture en récipient : L'étude des caractéristiques culturaux a été suivie sur le milieu YSA (250 ml du milieu dans un récipient de 2 litre) pendant 30 jours à température fixe 25°c.

- Identification de l'espèce : Elle était réalisée à l'aide du « Muséum National d'Histoire Naturelle. France ».