2-3- Réalisation du dosage de la
glycémie
La glycémie est le taux de glucose dans le sang. C'est
une constante biologique par excellence mais qui présente des variations
locales et temporelles. [22-23]
2-3-1- Prélèvement
L'échantillon de sang est prélevé dans
un tube sec puis décanté automatiquement après
centrifugation ou sur du fluorure de sodium. Le sérum ne doit pas
être hémolysé.
2-3-2- Réactifs
· Tampon phosphate pH 7,4
· Le phénol
· Amino-4-antipyrine
· Glucose oxydase
· Peroxydase
2-3-3- Principe du dosage
La détermination du glucose se fait suivant les
réactions suivantes :
Glucose oxydase
Glucose + O2 Acide gluconique + H2O2
Peroxydase
2H2O2 + Phénol + 4-AAP Quinonéimine + 4 H2O
4-AAP : Amino-4-Antipyrine
2-3-4 - Matériels
· Tubes à hémolyse
· Chronomètre
· Bain marie
· Micropipette de 1000 uL et de 50uL
2-3-5- Mode opératoire
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Blanc réactif uL
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Etalon uL
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Echantillon uL
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Réactif
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1000
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1000
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1000
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Etalon
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10
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Sérum
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-
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-
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10
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Incuber pendant au moins dix minutes au bain marie à
37°C puis faire la lecture au spectrophotomètre à 500 nm.
2-3-6- Interférences
Selon les recommandations de la SFBC divers substances sont
ajoutées en quantité croissante à un pool sérique
humain de titre normale ou pathologique.
Ces tests montrent que les triglycérides,
l'hémoglobine n'interfèrent pas aux concentrations testées
(triglycérides jusqu'à 10g/L et l'hémoglobine
jusqu'à 5g/L).
Les interférences les plus importantes sont celles de la
bilirubine et de l'acide ascorbique : une sous-estimation d'environ 10% se
produit pour des teneurs supérieures en bilirubine à 80 mg/L ou
supérieures en acide ascorbique à 70mg/L.
III- RESULTATS ET
DISCUSSION
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