Analyses medicales aux services du CHU de Sidi bel Abbes et a la polyclinique de Sidi Djillali

REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE

MINISTERE DE L'ENSEIGNEMENT SUPERIEUR

ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

UNIVERSITE DJILLALI LIABES

FACULTES DES SCIENCES

SIDI BEL ABBES

PRESENTE PAR : BEDDEK FATIMA

SPECIALITE : BIOLOGIE CELLULAIRE ET PHYSIOLOGIE OPTION : SANTE

Année Universitaire : 2007/2008

Je tiens tout particulièrement à remercier le personnel médical pour leur accueil chaleureux, ainsi que le directeur du C.H.U de SIDI BEL ABBES, le directeur de la Polyclinique de SIDI DJILLALI, de m'avoir accepté en tant que stagiaire au sein de leur établissement.

Je remercie également les techniciens, laborantins, biologistes, pour leur soutien technique, et pour le temps qu'ils m'ont consacré toute au long de cette période, sachant répondre à mes interrogations.

D'une façon plus générale, je remercie ma famille, et mes camarades du groupe pour leur collaboration et leur appuie le long de mon stage.

Je remercie de même, mes professeurs, pour leurs confiances et conseils concernant l'élaboration de ce rapport.

INTRODUCTION

PREMIERE PARTIE : SERVICE DE PATHOLOGIE

Chapitre 1: Présentation du Service de Pathologie 1

1. Zone de Travail 1

1.1 Secretariat . 1

1.2 Zone Paramedical 1

1.2.1 Salle de Prélèvement 1

1.2.2 Salle de Macroscopie 1

1.2.3 Salle d'histologie 2

1.2.4 Salle de Cytologie 2

1.2.5 Salle d'immunohistochimie et de Cytogénétique 2

2. Zone Médicale 2

2.1 Les Box 3

2.2 La salle de Conférence 3

3. L'organigramme du Service de Pathologie 3

Chapitre 2 : Présentation des zones techniques 4

1. Salle de prélèvement 4

2. Salle de Macroscopie 4

2.1 Matériels 5

2.2 Produits 5

2.3 Méthode 5

3. Salle d'histologie 7

3.1 Matériels 7

3.2 Produits 7

3.3 Méthodes 8

3.3.1. Enrobage 8

3.3.2. Découpage 9

3.3.3. Déparaffinage 9

3.3.4. Coloration 9

3.3.5. Montage 10

3.4 Les Echantillons Etudiés 11

4. Salle de Cytologie 12

4.1 Matériels 13

4.2 Produits 13

4.3 Méthode 13

4.4 Echantillon Etudié 15

5. Salle d'immunohistochimie 17

5.1 Matériels 17

5.2 Produits 17

5.3 Méthode 17

6. Présentation de la Zone Médicale 18

DEUXIEME PARTIE : LE LABORATOIRE CENTRAL

Chapitre 1 : Présentation du Laboratoire Central 19

1. Zone de Travail 19

1.1 Secrétariat 19

1.2 Structure d'accueil 20

1.3 Unité de Distribution 20

1.1.1. Unité de Bactériologie 20

1.1.2. Unité de Biochimie 20

Chapitre 2 : Présentation des Unités du laboratoire central 21

1. Unité de Bactériologie 21

1.1 Présentation des Zones de Travail 22

1.1.1. Premier Rayon 22

1.1.2. Deuxième Rayon 23

1.1.3. Troisième Rayon 26

1.1.4. Quatrième Rayon 35

1.2 L'antibiogramme 37

1.2.1. Technique 37

2. Unité de Biochimie 39

2.1. Présentation des Zones de Travail 39

2.1.1. Premier Rayon 39

2.1.2. Deuxième Rayon 39

2.1.3. Troisième Rayon 40

2.1.4. Quatrième Rayon 41

Chapitre 3 : Présentation du C.T.S 42

1. Zone de Travail 42

1.1 Secrétariat 42

1.2 Structure d'accueil 42

1.3 Structure Médicale 42

1.4 Unité de Prélèvement 43

1.5 Unité de Distribution 43

1.5.1. Unité de Sérologie 43

1.5.2. Unité d'hématologie 43

1.5.3. La Banque 43

1.5.4. Le Dépôt 43

2. Organigramme du Centre de Transfusion Sanguine 44

Chapitre 4 : Présentation des Unités du C.T.S 45

1. Unité de Transfusion Sanguine 45

1.1 Unité de Prélèvement 45

1.2 Condition du don du Sang 45

1.3 Matériels 46

1.4 Technique de Prélèvement 46

1.5 Recueil et Conservation du Sang 47

2. Unité de Sérologie 48

2.1 Test de détection de l'antigène de Surface du Virus de L'hépatite B 48

2.1.1. Intérêt diagnostique du Test 48

2.1.2. Réactifs 49

2.1.3. Principe 49

2.1.4. Méthode 50

3. Unité d'Hématologie 51

3.1 Formule de Numérotation Sanguine (FNS) 51

3.2 Principe 52

3.3 Matériel 52

3.4 Réactif 53

3.5 Technique 53

3.6 Résultats 53

TROISIEME PARTIE : SERVICE DE PHYSIOLOGIE

Chapitre 1 : Présentation du Service de physiologie 55

1. Zone de Travail 55

1.1 Secrétariat 55

1.2 Zone Médicale 55

1.2.1. Salle d'exploration de La Fonction Respiratoire (EFR) 55

1.2.2. Salle de L'électroencéphalogramme (EEG) 55

1.2.3. Salle de L'électromyogramme (EMG) 55

Chapitre 2 : Présentation des zones techniques 56

1. Salle d'exploration de la fonction respiratoire 56

1.2 Test d'exploration de la fonction respiratoire 56

1.3 Résultats 58

2. Salle de l'électroencéphalogramme 59

2.1 Principe 59

2.2 Technique 60

2.3 Résultats . 60

3. Salle de l'électromyogramme . 61

3.1 Intérêt 61

3.2 Technique 62

3.3 Résultats 63

QUATRIEME PARTIE : POLYCLINIQUE DE SIDI DJILLALI

Chapitre 1 : Présentation de La Polyclinique de Sidi Djillali 64

1. Zone de Travail 64

1.1 Secrétariat 64

1.2 Salle de Prélèvement 64

1.3 Le Laboratoire 64

1.4 Salle de Lecture 64

Chapitre 2 : Présentation de la zone technique . 65

Le laboratoire 65

1. la glycémie 65

1.1 Matériels 65

1.2 Réactifs . 65

1.3 Méthode 66

1.4 Résultats 66

2. La Vitesse de Sédimentation (VS) 67

2.1 Intérêt de la VS 67

2.2 Matériels 68

2.3 Méthode 68

3. Le Cholestérol 69

3.1 Produits . 69

3.2 Technique 69

4. L'urée 70

4.1 Principe . 70

4.2 Matériels 70

4.3 Réactifs .. 71

4.4 Méthode 71

5. Test de la Toxoplasmose 71

5.1 Matériels 72

5.2 Réactifs ..72

5.3 Méthode 72

6. La Rubéole 73

6.1 Le danger de la Rubéole pour la future mère 73

6.2 Matériels 73

6.3 Réactifs .. 73

6.4 Méthode 73

7. Groupage sanguin ABO- Rhésus D 74

7.1 Le système ABO 74

7.2 Le système RH 76

7.3 Matériels 76

7.4 Réactifs 76

7.5 Technique .. 76

7.6 Résultats 78

CONCLUSION

GLOSSAIRE

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES / REFERENCES SITOGRAPHIQUES ANNEXES

Afin de clôturer mes trois années d'études en biologie « système LMD », j'ai préparé un rapport de stage de fin d'étude en analyse médicale. Ce stage d'une durée d'un mois, s'est déroulé au niveau des différents services du Centre Hospitalo- Universitaire - C.H.U - ABDELKADER HASSANI de Sidi Bel Abbes ainsi qu'au niveau de la Polyclinique de SIDI DJILLALI.

Ce rapport présente le travail que j'ai effectué lors de mon stage au sein du C.H.U de SBA qui à débuté du 12 au 19 mai 2008 au sein du service de pathologie, puis du 30 juin au 12 juillet 2008 au sein du laboratoire central et du CTS, en passant par le service de physiologie le 13 et 14 juillet 2008. Et j'ai achevé ma tourné du 15 au 17 juillet 2008 au sein du Laboratoire de la Polyclinique de SIDI DJILLALI.

Le choix du stage s'est révélé très intéressant et très enrichissant pour mon expérience professionnelle. En effet, ma spécialité s'inscrit précisément dans le domaine de LA BIOLOGIE CELLULAIRE ET PHYSIOLOGIE.

Le but de ce rapport n'est pas de faire uniquement une présentation exhaustive de tous les aspects théoriques que j'ai pu apprendre ou approfondir, mais aussi, de manière synthétique et claire de faire un tour d'horizon des aspects pratiques et humains auxquels j'ai été confronté.

Je vous expose dans la première partie : le Service de Pathologie qui s'occupe essentiellement de l'histologie et de la cytologie, et dans la deuxième partie : Le Laboratoire Central et le CTS qui s'occupent des différentes analyses hématologiques et sérologiques, et dans la troisième partie : Le Service de Physiologie qui s'occupe de l'étude des fonctions vitales comme la respiration et le fonctionnement du système nerveux. Et pour finir je vous présente Le Laboratoire de la Polyclinique de Sidi Djillali.

CHAPITRE I PRESENTATION DU SERVICE DE PATHOLOGIE

Le Centre Hospitalo-Universitaire de Sidi Bel Abbes comporte plusieurs services, parmi eux le service de pathologie.

Ce service s'occupe de l'étude anatomopathologique des différents organes (vésicules biliaires, rein, utérus...) issues des malades vivants ou décédés.

La capacité de ce service à recevoir des pièces des blocs opératoires de différents services est supérieur à 3500 pièces/an (soit 10 - 12 pièce/ jour).

Ce service reçoit ainsi quotidiennement un nombre de 20 à 30 malades par jour pour la réalisation de frottis.

1. ZONE DE TRAVAIL

1.1. SECRETARIAT

Il comprend trois secrétaires, leur travail consiste à : la réception des patients, l'enregistrement des données nécessaires (nom, prénom, âge, type d'analyse, code du patient, la date) et la remise des résultats (le bulletin médical).

1.2. ZONE PARAMEDICALE

Elle comporte un médecin chef, une surveillante médicale et huit biologistes. 1.2.1. SALLE DE PRELEVEMENT

En présence d'un médecin et d'une surveillante médicale, cette salle assure le prélèvement de différents échantillons (Liquide pleural, liquide thyroïdien...)

Cependant, d'autres prélèvements sont ramenés quotidiennement des autres services (Néphrologie, Chirurgie interne...).

1.2.2. SALLE DE MACROSCOPIE (SALLE TECHNIQUE A)

C'est une salle spécialisée dans l'étude macroscopique des pièces, elle comprend deux médecins résidents et trois techniciens.

1.2.3. SALLE D'HISTOLOGIE (SALLE TECHNIQUE B)

L'histologie est la partie de l'anatomie qui étudie la formation, l'évolution et la composition des tissus des êtres vivants (Larousse, 1988).

Avec quatre techniciens, cette salle s'occupe de l'étude histologique des échantillons, dont les étapes sont : l'enrobage, la coupe, le déparaffinage suivie par la coloration.

1.2.4. SALLE DE CYTOLOGIE (SALLE TECHNIQUE C)

La cytologie est l'étude de la cellule vivante, de sa forme, sa structure, ses propriétés physiques, chimiques et physiologiques (Larousse, 1988).

Avec deux techniciennes, cette salle s'occupe essentiellement de l'examen microscopique des cellules.

La première des deux s'occupe de la coloration manuelle en utilisant `'

l'AUTOMATE DE COLORATION `' des échantillons issus de la salle d'histologie. La seconde s'occupe de la réalisation des frottis.

1.2.5. SALLE D'IMMUNOHISTOCHIMIE ET DE CYTOGENETIQUE

L'immunohistochimie est le processus de détection d'antigènes dans les tissus au moyen d'anticorps. Les anticorps peuvent être d'origine polyclonale ou monoclonale, les anticorps monoclonaux étant plus spécifiques par essence.

L'immunohistochimie est largement utilisée pour le diagnostic et/ou le suivi de cancers. Des marqueurs spécifiques sont connus pour diagnostiquer divers cancers.

La salle d'immunohistochimie est récente, et n'est pas fréquemment utilisée. Une technicienne s'occupe de l'étude immunohistochimique et dont les étapes sont (entre autres) : l'incubation, le déparaffinage, la réhydratation, le rinçage, le démasquage...etc.

Cependant, la salle de cytogénétique n'est pas encore équipée, et des spécialistes dans ce domaine sont en formation.

2. ZONE MEDICALE

Cette zone comprend : un médecin chef, trois maîtres assistants, et dix médecins résidents. 2.1. LES BOX

Il existe dix box, dont chacun, il y a deux microscopes optiques. Ce rayon est spécialisé dans la lecture microscopique des lames préparées.

SECTEUR
SANITAIRE

CENTRE DE
TRANSFUSION

SALLE DE
CONFERENCES

10 MEDECINS RESIDENTS

03 MAITRES ASSISTANTS
SPECIALISES

ZONE MEDICALE

LABORATOIRE
CENTRAL

10 BOX DE
LECTURE

MEDECIN CHEF

SURVEILLANTE MEDICALE

SECRETARIAT

DE PRELEVEMENT

SALLE

SERVICE DE
PATHOLOGIE

OPIE

SALLE DE MACROSC

SALLE D'HISTO

LOGIE

ZONE TECHNIQUE

CYTOLOGIE

SALLE DE

INCINERATEUR

'IMMUNOHISOCHIMIE

SALLE D

SALLE DE CYTOGENETIQUE

2.2. LA SALLE DE CONFERENCE

Cette salle est réservée spécifiquement pour les réunions et pour l'enseignement.

ECOLE
PARAMEDICALE

C.H.U

DSPS

2. L'ORGANIGRAMME DU SERVICE DE PATHOLOGIE

CHAPITRE 02

PRESENTATION DES ZONES TECHNIQUES

1. SALLE DE PRELEVEMENT

Cette salle s'occupe surtout de la réalisation des cytoponctions qui se pratiquent avec une aiguille très fine, sans anesthésie. Elle est quasiment indolore, elle consiste à piquer plusieurs fois dans un nodule. Ensuite, les échantillons prélevés passent en cytologie.

Cette technique est réalisée par un médecin maître assistant ou par un médecin résident. Tout le matériel utilisé (seringues, tubes...) doit être stérilisé.

2. SALLE DE MACROSCOPIE (SALLE TECHNIQUE A)

Dans cette salle s'effectue l'observation macroscopique des échantillons prélevés. Le tableau ci-dessous comporte les échantillons de 50 cas étudiés.

Tableau 1 : les échantillons étudiés dans la salle de macroscopie

NATURE DE LA PIECE	NOMBRE DE PIECES
Vésicule biliaire	5
La prostate	2
Goitre thyroïdien	3
Nodule d'un sein	4
Hystérectomie (utérus)	4
Appendicectomie	3
Pièce de grossesse arrêtée	2
Fosse cérébrale	1
Prélèvement ganglionnaire	3
Mastectomie (sein total)	3
Placenta	2
cholécystectomie	1
Produit de curetage	2
Cuir chevelu	1
Le rein	1
Corne de pupille	1
Biopsie exérèse	2
lipome	2
Polypectomie (polype du col)	1
Résection intestinal	2
Kyste pyloridale	2
Kyste ovarien	3

2.1 MATERIELS

· Appareil de déshydratation

· Les cassettes

· Les couteaux

· Les ciseaux

· Le bistouri

· Les pinces

· Le mètre a ruban

· Le panier

2.2. PRODUITS

· Acétone

· Alcool

· Paraffine

· Xylène

· Formol

2.3. METHODES

> La manipulation débute lors de la réception des échantillons.

> La technicienne met un échantillon (Hystérectomie) dans une quantité moyenne de Formol pour bien le fixer.

> Le médecin résident effectue une première lecture macroscopique de la pièce, et s'intéresse surtout à :

I L'aspect externe et interne de la pièce (Lisse, rigide, kystique...) ;

I Les dimensions (Longueur, largeur, diamètre) ;

I L'état de la pièce (Dur, hémorragique...) ;

> Pendant que le médecin effectue ces observations, une technicienne note sur une feuille tous ces commentaires.

> Dans l'étape de la dissection, il utilise soit un couteau, soit un bistouri pour le découpage, tout dépend du volume de la pièce. (Voir photo 01)

photo 01

> Puis, la technicienne met les petits échantillons découpés dans des cassettes codés (le code correspond à celui de la pièce, en utilisant l'alphabet pour montrer le nombre de prélèvements) puis les place dans le panier, leur nombre varie entre 20 et 40 cassettes.

> Les cassettes sont plongées dans l'appareil de déshydratation ou d'inclusion. Cet appareil est utilisé pour enlever l'eau qui subsiste dans les échantillons et le remplacer par de la

Paraffine, pour mieux les visualiser lors de l'étude microscopique. (Voir Photo 02)

Photo 02

> Cet appareil contient 12 bains (Tableau 2). Dans une température ambiante, chaque échantillon devra passer 1 heure dans chaque bain. L'opération prendra 12 h.

NB : Les pièces archivées doivent êtres incinérées dans l'incinérateur du C.H.U.

Tableau 2 : Contenu des bains de l'appareil de déshydratation

NUMERO DU BAIN		PRODUIT CONTENU	1
Formol		2
Alcool 75%		3
Alcool 95%		4
Alcool 100%		5
Acétone résidu ou évaporation=0.001%		6
Acétone résidu ou évaporation=0.001%		7
Acétone résidu ou évaporation=0.001%		8
Xylène		9
Xylène		10
Xylène		11
Paraffine		12
Paraffine

3. SALLE D'HISTOLOGIE (SALLE TECHNIQUE B)

Cette salle reçoit les cassettes qui contiennent les échantillons après déshydratation.

Ensuite, les échantillons sont enrobés dans la paraffine pour l'obtention de bloc, ces derniers passeront par le microtome qui donnera de fines coupes.

3.1 MATERIELS

· Moule

· Groupe Thermoélectrique (TGE)

· Microtome

· Bain Marie

· Lames et lamelles

· Etuve

3.2 PRODUITS

· Paraffine

· Xylène

· Papier Buvard

3.3 METHODE

3.3.1. ENROBAGE

L'enrobage est basé sur un appareil appelé « Groupe Thermoélectrique »ou (TGE). Il est constitué de trois parties :

· Première partie : elle est caractérisée par une température très élevée, elle contient de la paraffine sous forme liquide.

Au dessus on trouve de petits moules, et au dessous on trouve les cassettes plongées dans la paraffine.

· Deuxième partie : elle a aussi une température très élevée, et possède en plus un robinet de paraffine.

· Troisième partie : par contre, cette partie présente de très basses températures comprises entre - 9°C et - 10°C.

Les moules qui contiennent les cassettes sont obligatoirement mis au dessus pour refroidissement jusqu'à solidification.

LA TECHNIQUE D'ENROBAGE

> Cette technique consiste à plonger les cassettes dans un bain de paraffine liquide contenu dans la première partie du TGE.

> On prend une cassette, qu'on ouvre et dans la quelle on met les échantillons. Chaque échantillon est mis dans un moule qui a la même taille ;

> Chaque moule est posé au dessous du robinet de paraffine ;

> Puis, on met ce moule dans la troisième partie du TGE afin d'obtenir un bloc de moule solide.

3.3.2. DECOUPAGE

> On insère la cassette paraffinée sur le microtome ;

Le Microtome

> On tourne les deux bras de l'appareil en sens inverse, pour obtenir de fine couche de ce bloc paraffiné ;

> On choisit les couches les plus fines et les mois plissées qu'on met dans un Bain Marie et cela pour bien les fixer ;

> On prépare des lames, et on étale doucement les micros fragments dans celles-ci, toute en essuyant celles qui débordent avec du papier buvard.

> On codifie les lames.

3.3.3. DEPARAFFINAGE

On met les lames dans l'étuve à une température très élevée d'environ 250°C pour déparaffiner. Ensuite on les place dans un portoir émergé dans le xylène pendant 1 à 2 minutes.

3.3.4. COLORATION

La coloration des échantillons s'effectue manuellement en utilisant la coloration « Hématoxyline Eosine ». (Tableau 3)

Tableau 3 : Coloration « Hématoxyline Eosine »

NUMERO DU BAIN	PRODUITS	TEMPS
1	Toluène ou xylène	2 minutes
2	Alcool 100°	2 minutes
3	Alcool 95°	2 minutes
4	Alcool 75°	2 minutes
5	Eau	10 secondes
6	Hématoxyline Harris	5 minutes
7	Eau	10 secondes
8	Acide chlorhydrique	8 secondes
9	Carbonate de Lithium	10 secondes
10	Eau	10 secondes
11	Alcool 95°	1 minute
12	Eosine	10 secondes
13	Alcool 100°	2 minutes
14	Alcool 100°	2 minutes
15	Xylène ou toluène	2 minutes

NB : les lames ne doivent sortir du xylène que pour le montage.

3.3.5. MONTAGE

> On prend les lames, et on les nettoie avec des compresses stériles ;

> On fait couler 2 gouttes d'Eukitt (la colle) sur l'échantillon, qu'on immerge dans un bain de xylène ; > On incline la lamelle qu'on dépose sur la lame ;

> On met la lames dans l'étuve à 250°C pendant 20 minutes ;

> On fait sortir les lames de l'étuve, qu'on nettoie avec des compresses ;

> On dégage les bulles d'air par écrasement ; puis, on numérote les lames qu'on classe par ordre croissant dans un plateau puis on procède à la lecture.

3.4. LES ECHANTILLONS ETUDIES

1. L'UTERUS

Connu sous le nom de matrice, c'est un organe creux, musculaire destiné à contenir l'oeuf fécondé pendant son développement, et l'expulser quand il est arrivé à maturité. Autrement dit, c'est un organe dans

lequel se développe l'embryon , puis le foetus avec ses annexes (placenta, cordon ombilical et membranes) et qu'il les expulse à l'accouchement.

L'utérus est situé au centre de la cavité du petit pelvis, entre vessie en avant et rectum en arrière ; il a une forme d'un cône à sommet tronqué dirigé vers le bas et engagé plus moins dans le dôme vaginal.

L'hystérectomie consiste en l'ablation chirurgicale de l'utérus.

Elle comporte également en général l'ablation du col de l'utérus. Il s'agit alors d'une hystérectomie totale.

Selon les cas, il peut être nécessaire de réaliser l'ablation des ovaires et des trompes, l'intervention est dénommée dans ce cas hystérectomie avec annexectomie (ablation des annexes embryonnaires).

2. LA VÉSICULE BILIAIRE

C'est un organe qui se présente sous la forme d'un petit sac contenant de la bile. Ce petit sac oblong est situé sous le foie et relié au canal cholédoque (qui est le canal biliaire) par un autre canal : le canal cystique.

3. NODULE DU SEIN

L'adènofibrome (ou fibroadénome) est une tumeur bénigne atteignant la glande mammaire. Cette tumeur bénigne est la plus fréquente des tumeurs solides du sein, survient essentiellement chez les jeunes femmes, souvent avant 25 ans ; de consistance solide, ferme et bien limitée mesurant généralement entre 2 et 3 cm de diamètre ; elle peut être solitaire ou multiple.

L'adénofibrome peut être perçu par la femme elle même par la palpation des seins (perception d'une petite boule au niveau du sein, unique et indolore) mais l'examen clinique, l'exploration radiologique par la mammographie et l'échographie permettent de confirmer le diagnostic ; dans certains cas l'analyse d'un prélèvement par cytoponction est nécessaire pour s'assurer de la nature bénigne de la tumeur.

Le traitement de l'adénofibrome peut être :

Soit une abstention chirurgicale (pas d'opération) au cas où le nodule n'est pas gênant et de petit volume (inférieur à 3 cm), et que la femme est de moins de 30 ans ;

Soit une exérèse chirurgicale qui est la règle chez les femmes de plus de 30 ans ; elle consiste en l'ablation du nodule.

4. LE REIN

Le corps humain possède deux reins. Toutefois, un seul rein peut suffire à l'accomplissement des fonctions d'épuration et d'élimination.

Fixés sous les côtes, ils sont en liaison avec l'artère rénale, par laquelle arrive le sang à filtrer.

Le rein possède une fonction sécrétoire (filtration du sang au niveau des glomérules) puis excrétoire à partir du pyelon (triangle à base issue du hile rénal) origine de l'uretère. Le sang est épuré au niveau du néphron, dans lequel certains éléments sont réabsorbés (ions minéraux, glucose, eau, acides aminés) et retourneront à la circulation sanguine par la veine rénale.

Les déchets récupérés constituent une urine primitive qui sera déversée dans le bassinet, puis dans l'uretère attenant au rein dont elle est issue.

4. SALLE DE CYTOLOGIE (SALLE TECHNIQUE C)

Cette salle s'occupe essentiellement des frottis de différents échantillons (Liquide thyroïdien, liquide pleural,...) qui viennent de la salle de prélèvement. On utilise une coloration spécifique appelée « PAPANICOLAOU ».

4.1. MATERIELS

· Centrifugeuse

· Seringues

· Pipettes pasteur

· Tubes

· Appareil de coloration

· Lames et lamelles

4.2. PRODUITS

· Xylène

· Alcool

· Hématoxyline

4.3. METHODE

> On numérote les lames avant de commencer la manipulation ;

> On met le liquide prélevé dans la centrifugeuse à 3600 tours/minutes à une température de 20°C ; > A l'aide de pipette Pasteur, on aspire le culot, puis, on étale juste une goutte sur la lame ;

> On glisse une autre lame du même code pour obtenir deux frottis de cet échantillon ; > On laisse les lames séchées à l'air libre (voir Photo 03)

Photo 03

> On place les frottis dans le portoir et on procède à la coloration appelée « PAPANICOLAOU » (Tableau4)

> On peut procéder à une autre coloration qui diffère par ces réactifs appelée « MGG & MAYER » (Tableau5)

Tableau4 : Coloration « PAPANICOLAOU »

NUMERO DU RECIPIENT	PRODUITS		TEMPS	1
Alcool 80°	2 minutes		2
Eau courante	3 minutes		3
Hématoxyline Harris	5 minutes		4
Rinçage eau courante	3 minutes		5
Alcool 70 °	2 minutes		6
Alcool 95°	2 minutes		7
Solution orange « G »	5 minutes		8
Alcool 95°	1 minute		9
Colorant « EA50 »	5 minutes		10
Alcool 95°	1 minute		11
Alcool absolu	1 minute		12
xylène	3 minutes

TECHNIQUE DE COLORATION « PAPANICOLAOU »

Cette technique de coloration est beaucoup plus utilisée dans tous ce qui est liquide (liquide pleural, bronchique, urine...).

> Après coloration par l'appareil (Voir photo 04), on sèche les lames avec des compresses stériles, puis, on fait couler l'Eukitt ;

Photo 4

> On plonge la préparation dans un bain de xylène, ensuite on pose la lamelle au dessus ; > Après montage et séchage, on met le frottis dans l'étuve à 250°C pendant 20 minutes ; > On termine par classer les frottis dans un plateau par ordre croissant puis on procède à la lecture.

4.4. ECHANTILLON ETUDIE

La glande thyroïde est une glande endocrine (dont la sécrétion va dans le sang) située à l'avant du cou, à sa base. Elle est responsable de la sécrétion des hormones thyroïdiennes, triiodothyronine (T3) et thyroxine (T4), représentant respectivement 20 et 80 % de la sécrétion de la totalité des hormones thyroïdiennes. Le contrôle de la sécrétion des hormones thyroïdiennes se fait par la glande hypophyse.

TECHNIQUE DE COLARATION DE « MAYER »

Cette technique diffère de celle de « PAPANICOLAOU » par la nature des réactifs et par la méthode, mais le but de cette coloration reste le même. (Tableau 5)

> On commence par appliquer au frottis une quantité de « May Grunwald pure » pendant 3 minutes ; cette solution doit être diluée d'1/2 dans du tampon pendant 3 minutes ;

> Sans rincer, on met le frottis dans de « Giemsa » de préférence diluée au 1/10^ème dans le même tampon pendant 20 minutes ;

> On lave rapidement dans le tampon ;

> On sèche, et on procède à un bain de xylène pendant 5 minutes ; > Puis on procède au montage.

Tableau5 : Coloration de « MAYER »

Le N°	PRODUITS		TEMPS	1
Alcool 95°	10 minutes		2
Eau diluée	10 secondes		3
Hématéine de Mayer	10 minutes		4
Eau diluée	2 minutes		5
Eosine aqueuse	10 secondes		6
Eau	2 minutes		7
Alcool 100°	10 minutes		8
Alcool 100°	10 minutes		9
Xylène ou Toluène	3 minutes

5. SALLE D'IMMUNOHISTOCHIMIE

Cette salle est récente, et n'acquiert pas beaucoup d'expert mais, toute fois des techniques sont mises en place. Elle comprend 5 étapes : Déparaffinage, Démasquage antigénique, étape de l'anticorps primaire et secondaire, coloration avec l'hématoxyline de Mayer, Lecture.

5.1. MATERIELS

· Lames et lamelles

· Récipients

· Automate

· Bain Marie

· Micro onde

5.2. PRODUITS

· Xylène

· Alcool 100°

· Eau distillé

· Eau oxygéné

· PBS

· La Biotine

· Streptavidine

· Coloration « Hématoxyline de Mayer »
· Eau ammoniaqué

5.3. METHODE

> On met des lames célanisées à incubation pendant 24 heures à 40 °C ;

> On procède ensuite au déparaffinage ;

> On met 4 fois 5 minutes dans un bain de xylène ;

> Réhydratation 4 fois 5 mn dans un alcool 100° absolu ;

> On rince avec de l'eau distillé 2 fois 5 minutes ;

> On entame l'étape du démasquage antigénique : Dans cette étape le choix des solutions est

fait selon son PH :~ PH ~ 6 dans le Micro onde

PH = 9 dans le Bain Marie

> Le PH de la solution doit être concentré au 1/10^ème ;

> Le récipient de la solution du démasquage doit être mis dans le bain Marie pendant 5 minutes puis dans le Micro onde, puis on la refroidi pendant 20 minutes ;

> Utiliser l'Automate

> Blocage des peroxydases d'eau oxygéné à 10 volumes ; puis rinçage à l'eau distillée ;

> On laisse incuber pendant 10 minutes ; ensuite on rince avec deux bains : l'eau distillé en premier puis le PBS ;

> On entame l'étape de l'Anticorps primaire ;

> On essuie les lames dans une chambre humide puis on les mets dans une solution de lavage à 10 volumes ;

> On met quelques gouttes de l'anticorps primaire ;

> On laisse incuber 2 heures pour fixation, puis on procède au rinçage avec deux bains de PBS dilués au 1/10ème ;

> On ajoute l'Anticorps secondaire : la Biotine pendant 30 minutes, on rince au PBS, puis on ajoute la Streptavidine pendant 20 minutes ;

> On met quelques gouttes de Chromogènes qu'on laisse pendant 1 heure. Ensuite on rince à l'eau distillée ;

> On entame l'étape de la coloration avec « L'Hématoxyline de Mayer » pendant 5 minutes, on rince à l'eau ammoniaquée, puis à l'eau distillée ;

> Pour le montage, on utilise l'Eukitt ou le Pharamount aqueux ;

> L'étape de La Lecture s'effectue par les médecins.

6. PRESENTATION DE LA ZONE MEDICALE

Cette zone est spécifique pour la lecture des lames préparées à l'aide d'un microscope optique. Elle est effectuée par les médecins.

CHAPITRE 01
PRESENTATION DU LABORATOIRE CENTRAL

Le laboratoire central est un laboratoire polyvalent où s'effectuent les différentes analyses sérologiques (les selles, les urines...), et hématologiques des échantillons de malades hospitalisés ou non.

Parmi les services que j'ai eu l'occasion de voir, le service de bactériologie et de parasitologie où s'effectuent des analyses qui ont pour but d'identifier les agents responsables des infections : bactéries, parasites, champignons microscopiques, etc. Elles procèdent par prélever un échantillon et à rechercher l'élément pathogène soit par observation directe soit après mise en culture. L'identification du germe pathogène aidera à définir le meilleur traitement et l'antibiotique efficace.

Aussi le service de biochimie s'occupe essentiellement des analyses qui consistent à mesurer les quantités des constituants des liquides biologiques (sang, urine, etc.) vu que la plupart des maladies ont en effet des répercussions sur leurs compositions, et leur étude peut aider au diagnostic et au suivi de nombreuses maladies.

1. ZONE DE TRAVAIL

1.1. SECRETARIAT

Il comprend quatre secrétaires, leur travail consiste à la réception des patients, l'enregistrement des données nécessaires (nom, prénom, âge, type d'analyse, code du patient, la date) et à la remise des résultats (le bulletin médical).

1.2. STRUCTURE D'ACCUEIL

Cette structure a pour mission d'accueillir les personnes, et de les orienter dans les services adéquats. 1.3. UNITE DE DISTRIBUTION

1.3.1. SERVICE DE BACTERIOLOGIE

Le service de bactériologie comprend sept biologistes, leur travail consiste à l'élaboration des examens cytobactériologiques des urines (ECB des urines), ou des pus (ECB des pus), et une partie de parasitologie des selles, ainsi que d'autres analyses tels que le spermogramme et l'analyse des pertes.

Ce service comprend quatre rayons, chacun équipé de matériel spécifique à une technique. 1.3.2. SERVICE DE BIOCHIMIE

L'unité de biochimie comprend 4 techniciens qui s'occupent essentiellement de l'étude fonctionnelle des molécules biologiques humaines (protéines, lipides, glucides et acides nucléiques), ainsi que la chimie des urines, du foie, de l'acide urique...

Ce service comprend aussi quatre rayons, chacun réservé à une exploration spécifique.

CHAPITRE 02

PRESENTATION DES UNITES DU LABORATOIRE CENTRAL

1. UNITE DE BACTERIOLOGIE

Cette unité s'occupe des examens bactériologiques et parasitologiques des liquides humains tels que les urines et le sang. Elle comprend 4 rayons ; chacun d'eux effectue divers examens.

Les étapes utilisées dans l'étude bactériologique d'un produit pathologique (pus, urines, crachat, etc.) suivent généralement l'ordre cité ci-dessous :

Examen macroscopique : observation de l'échantillon prélevé, à son arrivée au laboratoire peut apporter des renseignements précieux. On note la couleur, le trouble parfois la viscosité ou l'odeur (bactéries anaérobies), etc.

L'étude macroscopique nous oriente dans l'étude microscopique.

Examen microscopique : suivant les produits examinés l'examen à l'état frais est indispensable ou facultatif.

La coloration de gram est presque toujours de règle.

Isolement : le choix des techniques d'isolement est fait en fonction des renseignements apportés par l'examen microscopique et surtout des recherches envisagées d'après les indications médicales.

Identification des bactéries isolées : cette étude est basée le plus souvent sur la mise en évidence des caractères morphologiques et de l'activité biochimiques de ces bactéries, étude complétée par des techniques particulières suivant les espèces en cause : réactions en présence de sérums expérimentaux (étude sérologique).

Antibiogramme : l'étude de la sensibilité ou de la résistance des bactéries isolées aux antibiotiques permet d'instaurer un traitement efficace.

1.1. Présentation des zones de Travail 1.1.1. PREMIER RAYON

C'est dans ce rayon où s'effectue « L'EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE DES URINES » connu ainsi sous le nom de « E.C.B.U».

1.1.1.1. MATERIELS

· Tubes

· Tubes secs

· Microscope optique

· Boite de Pétrie

· Incubateur

· Etuve

· Distributeur de disques

NB : En bactériologie, les incubateurs sont des boîtes rectangulaires qui sont en général maintenues entre 19° et 30 °C pour la culture des champignons et des bactéries non pathogènes, ou à la température du corps humain (37 °C) pour la culture des bactéries pathogènes. Les incubateurs bactériologiques sont pourvus de doubles parois dans lesquelles circule de l'eau chauffée à une température constante.

Un Incubateur

Outre le fait de maintenir les cellules à la température du corps et à une humidité optimale, ces incubateurs fournissent la quantité de dioxyde de carbone nécessaire à la croissance des cellules. (Encarta 2007).

1.1.1.2. METHODE

> Réception des tubes contenants l'urine gardé au frais ;

> Centrifugation des tubes qui contiennent les urines dans le quatrième rayon.

L'ECBU comporte un examen direct de l'urine au microscope (lecture microscopique) ? c'est l'étude cytologique ;

> Mise en culture, dans une gélose au sang (milieu favorable pour la croissance de tous les germes) afin de rechercher et d'identifier la présence de germes dans ces urines ;

> Incubation des tubes à l'étuve pendant 24 H, à 37°C ;

> Après incubation, on procède à deux techniques soit :

1' Un réisolement dans un milieu Chapman pour les staphylocoques ou BGA/BCP pour les bacilles Gram (-), puis une incubation pendant 24H à 37°C.

1' Une coloration de Gram dans le cas ou on n'est pas sûr de la nature du germe. Intérêt de l'examen

L'ECBU permet de rechercher une infection urinaire (cystite, pyélonéphrite) et d'identifier le(s) germe(s) en cause. Si un germe est trouvé, un antibiogramme peut alors être réalisé (voir ce terme ultérieurement) pour guider le médecin dans sa prescription d'antibiotique.

1.1.2. DEUXIEME RAYON

Il est spécialisé dans les domaines suivants : l'hémoculture et la parasitologie des selles et l'ECB des pus.

TECHNIQUE DE L'HEMOCULTURE

L'hémoculture est un examen sanguin essentiel en maladie infectieuse. Il consiste en un prélèvement de sang veineux, qui est ensuite mis en culture afin d'y rechercher des germes. Il est effectué si possible avant la mise en route d'une antibiothérapie. On réalise en général 3 prélèvements différents, à quelques heures d'intervalle, effectués si possible au moment d'un pic d'hyperthermie ou d'hypothermie ou lors de frissons qui signent une décharge bactériémique.

L'hémoculture consiste donc à mettre en culture un échantillon de sang, afin d'identifier un ou plusieurs germes. La présence de germes signe une bactériémie.

Une bactériémie accompagnée d'un syndrome infectieux est une septicémie, dont la forme la plus grave est le choc septique. L'hémoculture permet également de réaliser un antibiogramme sur le germe retrouvé, et oriente ainsi le médecin dans le choix du traitement antibiotique.

Le prélèvement de sang veineux se fait le plus souvent dans la veine située au pli du coude. Ce prélèvement doit être fait dans des conditions d'asepsie rigoureuses, au risque de fausser l'examen en contaminant le sang avec des germes parasites.

Le sang prélevé est introduit puis ensemencé dans des flacons spéciaux. Deux types de flacons sont ensemencés, un flacon aérobie et un flacon anaérobie (sans oxygène), permettant ainsi de détecter les germes aérobies et anaérobies.

Ces flacons sont ensuite mis dans une étuve à 37°C. On utilise un automate pour vérifier régulièrement leur aspect (recherche d'un trouble, de petites colonies sur le tapis de globules rouges au fond, etc.) et pour contrôler l'absence ou la présence de germes.

En général, on "repique" également ces flacons, c'est à dire qu'on en ensemence quelques gouttes sur des géloses nutritives riches, généralement 24 et /ou 48 h après le prélèvement. On garde les cultures en moyenne une quinzaine de jours. Si on utilise un automate, les flacons sont testés toutes les quelques minutes pour déceler des signes de présence bactérienne (acidification, diminution de l'oxygène...). En cas de détection de bactéries une alerte est donnée pour que les flacons soient rapidement pris en charge par un technicien.

Résultats de la Technique

Résultat normal ou négatif

Les différentes hémocultures sont stériles lorsqu'aucun germe n'est retrouvé.

Une hémoculture négative ne veut pas forcement dire qu'il n'existe pas d'infection, mais cela indique qu'à l'instant précis où le prélèvement a été pratiqué il n'y avait pas de germes

dans le sang ou alors que, le germe responsable de l'infection a des exigences de cultures très particulières et qu'il ne pousse pas dans les milieux de cultures usuels.

Le résultat est alors faussement négatif. Il faut noter que seules les bactéries et les champignons poussent dans les hémocultures et qu'un virus ne peut pas être isolé avec cette technique.

Une antibiothérapie préalable au prélèvement peut également donner un résultat faussement négatif. Résultat anormal ou positif

Les cultures ne sont pas stériles quand un germe est retrouvé. En cas de culture positive, il faut effectuer des repiquages pour identifier précisément le germe en cause.

Une fois isolé, il faut alors tester la sensibilité de ce germe à une batterie de différents antibiotiques, c'est ce que l'on appelle l'antibiogramme.

Généralement, on retrouve le germe seulement après quelques jours, mais parfois il pousse plus lentement, soit parce que le patient a reçu des antibiotiques antérieurement au prélèvement, soit parce qu'il s'agit de germes à croissance lente.

Devant des hémocultures positives, on se retrouve devant plusieurs cas de figures, toujours à interpréter en fonction de la clinique :

·:. Hémocultures positives avec un seul germe retrouvé : si c'est une bactérie pathogène spécifique, le résultat n'est significatif que si l'on retrouve le germe sur un ou plusieurs flacons.

· :. Hémocultures positives avec un seul germe retrouvé : si c'est une bactérie pathogène opportuniste, le résultat sera significatif si on le retrouve sur plusieurs flacons, mais on conclura à une contamination probable si on ne le retrouve que sur un flacon.

· :. Hémocultures positives avec isolement de plusieurs germes : terrain débilité (déficit immunitaire, cirrhose ...), foyer infectieux digestif ou cutané, contamination lors du prélèvement à cause d'une mauvaise technique (très fréquent).

Intérêt de l'examen

L'hémoculture permet de poser un diagnostic de septicémie, d'identifier le(s) germe(s) responsable(s) et de réaliser un antibiogramme (voir ce terme) pour orienter le médecin dans la prescription d'un traitement antibiotique efficace.

1.1.3. TROISIEME RAYON

Dans ce rayon, s'effectue la préparation des milieux de cultures (gélose au sang, BCP, BGA, CHAPMAN, Mac Conkey, Mueller Hinton.etc.).

LES MILIEUX DE CULTURES

Le bactériologiste utilise des milieux de culture pour isoler les bactéries du milieu qui les contient, les identifier, étudier leurs propriétés et, éventuellement les conserver.
Les milieux de culture utilisés peuvent être obtenus de différentes façons. Ils peuvent être:

- Achetés, conditionnés, prêts à l'emploi. Cette solution même si elle est onéreuse est valable que pour les laboratoires ayant une consommation limitée et régulière de milieux d'usage courant. Elle s'impose le plus souvent pour certains milieux dont la préparation est délicate et complexe.

- Préparés à partir des différents ingrédients entrant dans leur formule. La formule d'un milieu ressemble un peu à une recette de cuisine, chaque détail de son exécution doit être respecté.

- Préparés à partir de milieux secs déshydratés. Cette technique permet de concilier une préparation simple, rapide, pratiquement sans risque d'erreurs et un prix de revient relativement bas.

- Préparés, juste au moment de l'utilisation sous leur forme définitive. Certains milieux exigent, juste avant leur emploi, l'addition de substances périssables, d'autres, un conditionnement n'autorisant qu'un court délai de conservation, etc.

- Préparation classique d'un milieu

Avant d'entreprendre la préparation d'un milieu, le technicien se fera un devoir de se renseigner sur l'utilisation à laquelle il est destiné. Il est d'ailleurs souhaitable de pouvoir lui présenter un tube ou un flacon témoin provenant d'une précédente fabrication et l'aspect (ou les différents aspects) du milieu après un développement bactérien.

a) Lecture et interprétation de la formule de préparation

> Rassembler les différents constituants.

> Vérifier qu'aucun oubli n'a été commis et que la nature et la qualité des produits ont bien été respectées.

b) Pesée des différents constituants

> On pèse le plus souvent à 0,1 g près sauf pour certains corps chimiques qui entrent en très faible quantité dans la composition de milieux spéciaux et pour lesquels une précision de l'ordre de 0,0001 g peut être exigée.

c) Dissolution

> Suivant la quantité de milieu à préparer, prendre un grand bécher

> Mesurer la quantité d'eau nécessaire et, si la dissolution doit se faire à chaud, la porter à la température désirée.

> Ajouter les ingrédients dans l'ordre indiqué.

> Agiter jusqu'à dissolution complète des constituants.

d) Ajustement Du PH

Un milieu de culture est le plus souvent neutre ou très légèrement basique, exceptionnellement il peut être franchement alcalin ou acide. De toute façon, il est essentiel que la mesure de cette acidité, neutralité ou alcalinité soit effectuée correctement. Cette mesure correspond à la concentration en ions hydrogène du milieu autrement dit au pH. L'échelle des valeurs du pH s'étend de 1 (mesure extrême de l'acidité) à 14 (mesure extrême de l'alcalinité).

En bactériologie, on peut se contenter d'une évaluation approximative de la mesure du PH par colorimétrie :

> On ajoute au milieu une substance colorée dite « indicateur de pH » ; ces substances ont la

propriété de changer de teinte pour une certaine valeur du pH appelée : zone de virage.

> Les indicateurs de pH les plus utilisés en biologie sont ceux dont la zone de virage se situe

aux environs de la neutralité :

- Le bleu de bromothymol qui vire du jaune (acidité pH 6) au vert (neutralité) puis au bleu (alcalinité pH 7,8).

- Le rouge de phénol qui vire du jaune (acidité) à l'orangé (neutralité pH 7) puis au rouge carmin (alcalinité pH 8).

> Si le pH est inférieur au pH désiré (donc trop acide), on ajoute quelques gouttes de soude diluées (environ au 1/100), on mélange, on vérifie le nouveau pH, on recommence l'opération si nécessaire;

> Si le pH est supérieur au pH désiré (donc trop alcalin), on ajoute quelques gouttes d'acide chlorhydrique dilué (environ au 1/20), on mélange, on vérifie.

e) Filtration

> La filtration du milieu préparé n'est pas systématique, elle ne sera envisagée que si le milieu est trouble. Elle est effectuée sur de grands filtres plissés en papier à gros grains ou sur filtre millipore.

> Beaucoup de milieux se solidifient en refroidissant (milieux gélosés), leur filtration doit être effectuée dans des entonnoirs chauffants, ou dans une cuve de l'autoclave non fermé par exemple.

> On peut effectuer la filtration avant l'ajout de l'agar-agar et avant l'autoclavage, ce qui évite l'utilisation de matériel chauffant.

f) Répartition

Les milieux sont les plus souvent répartis avant leur stérilisation, cette répartition est effectuée, suivant l'équipement du laboratoire, à l'aide:

- D'un grand entonnoir en verre dont la tige est prolongée par un tuyau de caoutchouc terminé par un embout de verre. Une pince spéciale, dite pince de Mohr, placée au niveau du tuyau permet de régler le débit.

- D'un répartiteur automatique, sorte de pompe aspirante et refoulante qui, après réglage préalable, distribue à un rythme régulier le volume désiré.

g) Stérilisation La stérilisation est effectuée le plus souvent à l'autoclave à 115 - 120 °C pendant 20min.

h) Après la stérilisation

Certains milieux gélosés doivent être mis à refroidir en position inclinée de façon à obtenir une pente après solidification.

> Poser dans ce cas le haut du tube encore chaud sur une longue baguette de verre de gros
diamètre en veillant à ce que le milieu gélosé n'arrive pas à plus de 2 à 3 cm du bouchon.

> Les tubes de milieux de culture sont stockés en position verticale dans un endroit frais et obscur.

· Voici quelques milieux de cultures utilisés le plus souvent dans le laboratoire de bactériologie du C.H.U. de SBA :

· :. GELOSE CHAPMAN

Le milieu de Chapman est un milieu sélectif, surtout utilisé en microbiologie médicale, permettant la croissance des germes halophiles. Parmi ces germes figurent au premier rang les bactéries du genre Staphylococcus, mais aussi les Micrococcus, les Enterococcus, les Bacillus, et de rares bactéries à Gram négatif.

La composition d'un milieu Chapman, en grammes par litre d'eau distillée, est la suivante :

PRODUITS		QUANTITE	Peptones
11.0 g		Extrait de viande
1.0 g		Chlorure de sodium
75 g		mannitol
10.0 g		Rouge de phénol
0.025 g		agar
15 g		Eau distillée (qsp)
1000 ml

Rouge de phénol

- Principe du milieu Chapman

Ce milieu contient un inhibiteur : fortes concentrations en chlorure de sodium (75 g.L^-1), ce qui permet un isolement sélectif de Staphylococcus tolérant les fortes concentrations en NaCl.

On peut étudier la fermentation du mannitol par virage au jaune de l'indicateur coloré, le rouge de phénol, autour des colonies.

- Technique

L'ensemencement doit être massif, en stries serrées ou par inondation.

Ne pas sécher le milieu à l'étuve avant l'ensemencement : la dessiccation du milieu pourrait entraîner une augmentation de la concentration en NaCl et rendre le milieu trop inhibiteur.

- Lecture L'utilisation du mannitol se traduira par une acidification du milieu, provoquant le virage au jaune de l'indicateur de pH. (Les colonies staph+ sont entourées d'une auréole jaune).

L'utilisation du mannitol est un caractère discriminatif important dans le genre staphylococcus, staphylococcus aureus étant mannitol+.

Ne pas confondre entre la pigmentation des colonies et le virage de l'indicateur coloré, ainsi des colonies pigmentées en jaunes et mannitol+ : forte suspicion de staph aureus.

NB : Le milieu Chapman permet la sélection des staphylococcus et une orientation pour l'identification de l'espèce S. aureus. Mais il s'agit que d'un test de présomption et une confirmation par des tests plus spécifiques (Coagulase, ADNase...) reste obligatoire.

·:. MILIEU MAC CONKEY

Milieu sélectif pour l'isolement des bacilles Gram^- Salmonella et Shigella ainsi que des bactéries coliformes dans les eaux, les produits alimentaires, les produits pharmaceutiques et biologiques.

La composition d'un milieu Mac Conkey en g/L d'eau distillée avec un PH=7.1, est la suivante :

PRODUITS		QUANTITE	Peptones
20		Lactose
10		Sels Biliaires
1.5		Cristal Violet
0.001		Rouge Neutre
0.05		Chlorure De Sodium
5		Agar
15

Rouge neutre

- Principe du milieu Mac Conkey

Ce milieu contient deux inhibiteurs de la flore Gram+, les sels biliaires et le cristal violet et un critère de différenciation, le lactose dont l'utilisation est révélé par l'indicateur coloré du milieu, le rouge neutre. Il vire au rouge en milieu acide.

Si la bactérie ensemencée fermente le lactose, le milieu devient rouge, par virage du rouge neutre, du fait de l'acidification du milieu.

- Ensemencement

> L'isolement se fait par la méthode des cadrans. > Incuber 18 à 24 h à 37 °C.

- Lecture

Les Colonies rouges entourées d'un hâlo opaque de la même couleur du à la précipitation des sels biliaires: Lactose⁺ , et les Colonies jaunes ou incolores : Lactose^-

·:. GELOSE SS

La gélose SS est la gélose Salmonella-Shigella qui est le milieu sélectif permettant l'isolement d'entérobactéries pathogènes. Il est très utilisé pour la recherche de Salmonella dans les selles et les denrées alimentaires peu pour les Shigella car trop sélectif.

Aspect du milieu avant utilisation	Mode d'ensemencement		Sélectivité / composition	Caractères recherchés		Résultats
- Isolement par la méthode des cadrans. - Incuber 18 à 24 h à 37°C.		-Le milieu contient 3 inhibiteurs : sels biliaires, vert brillant, forte concentration en citrate de sodium	- Le milieu contient du lactose pouvant être fermenté.	- colonies rouges : lactose+ - colonies incolores : lactose- - colonies à

Mode d'ensemen- cement	Sélectivité / composition	Caractères recherchés		Résultats	Isolement 18 à 24 h à 37°C
- Non selectif - Dépourvu en électrolyte - Bromocrésol pourpre	Espèces n'appartenant pas aux entérobactéries Fermentation du lactose	- Colonies bleues : bactéries lactose - - Colonies jaunes : bactéries lactose +

		- Ceux-ci empêchent la			centre noir :
	pousser de toutes bactéries		H2S +
	Gram^+, et rendent difficile la croissance des bactéries Gram^- autres que Salmonella et
	Shigella.

·:. MILIEU BCP

C'est un milieu utilisé pour la détection et l'isolement des entérobacteriacées dans l'eau, les produits alimentaires, l'urine et les selles

Ce milieu facilite la différenciation des colonies par le caractère lactose. Il inhibe l'envahissement de la surface de la boite par des nappes de Proteus car il ne contient pas d'électrolytes. C'est un milieu non sélectif qui est utilisé pour l'isolement de nombreuses espèces n'appartenant pas aux entérobactéries.

C'est un milieu contenant une base nutritive ordinaire permettant la pousser des bactéries non exigeantes. Il contient un critère de différenciation : la fermentation du lactose révélée par le virage en milieu acide de l'indicateur coloré de pH, le bromocrésol pourpre.

Aspect du milieu avant
utilisation

Aspect du milieu après
utilisation

·:. GELOSE AU SANG

C'est un milieu d'isolement enrichi sur lequel les Streptocoques se développent bien. Il permet, la lecture du caractère hémolytique. C'est un milieu riche d'autant plus par la présence de sang.

Aspect du milieu avant utilisation

Aspect du milieu après utilisation

Mode d'ensemencement	Caractères recherchés		Résultats	Isolement
Hémolyse	- Hémolyse â : zone claire d'hémolyse totale de		18 à 24 h à 37°C
	diamètre 3-4 mm entourant les colonies.
	- Hémolyse á : zone floue et granuleuse, verdâtre de 1 à 2 mm de diamètre

1.1.4. QUATRIEME RAYON

Le dernier rayon s'occupe da la « Coloration de Gram »et de la stérilisation des tubes.

Coloration de Gram

La coloration de Gram est la méthode de coloration la plus utilisée en bactériologie médicale; elle permet de colorer les bactéries et de les distinguer à l'examen direct par leur aptitude à fixer le violet de gentiane (Gram +) ou la fuchsine (Gram -). L'intérêt de cette coloration est de donner une information rapide et médicalement importante.

La coloration de Gram est fondée sur l'action successive d'un colorant d'Aniline, le cristal violet, d'iode puis d'un mélange d'alcool et d'acétone. Dans un premier temps, le colorant pénètre dans la paroi et le cytoplasme. Dans un second temps, l'iode réagit avec le colorant et le rend insoluble. La perméabilité plus grande des bactéries à Gram négatif à l'alcool permet la décoloration. Les bactéries à Gram positif restent colorées en violet ou mauve. Une contre-coloration (par exemple en rose) permet de visualiser à nouveau, les corps cellulaires des bactéries à Gram négatif.

1.1.4.1. MATERIELS

· Lames

· Colorants (VLAF) V : Violet de Gentiane L: Lugol

A: Alcool + Acétone F: Fuchsine

1.1.4.2. METHODE

> Réaliser un frottis ou un étalement ;

> Fixer la préparation à la flamme, sécher soigneusement puis laisser refroidir la lame ; > Immerger les lames dans la solution de Cristal Violet pendant 1mm ;

> Lavage à l'eau en transvasant les lames ;

> Immerger les lames dans du Lugol en les agitant ;

> Laver à nouveau à l'eau ;

> Décolorer jusqu'à disparition de la couleur violette dans l'alcool en faisant couler goutte à goutte sur la lame inclinée ou en immergeant les lames pendant une dizaine de secondes dans le décolorant.

> Laver à l'eau.

> Contre colorer avec la solution de fuchsine diluée pendant 20 à 30 secondes.

> Laver à l'eau et sécher à l'air.

> Observer à l'objectif X100, en immersion avec de l'huile.

1.1.4.3. RESULTATS

Les bactéries gram + sont colorées en violet, les bactéries gram - sont colorées en rose, ceci étant du à une différence de composition de la paroi.

Lorsque l'on colore peu de lames, plutôt que d'immerger les préparations, on peu les recouvrir de colorants. Le décolorant doit être changé chaque jour.

1.2. L'ANTIBIOGRAMME

Un antibiogramme est une technique de laboratoire visant à tester la sensibilité d'une souche bactérienne vis-à-vis d'un ou plusieurs antibiotiques supposés ou connus.

Le principe consiste à placer la culture de bactéries en présence du ou des antibiotiques et à observer les conséquences sur le développement et la survie de celle-ci. On peut par exemple placer plusieurs pastilles imbibées d'antibiotiques sur une souche bactérienne déposée dans une boîte de Pétri. Il existe trois types d'interprétation selon le diamètre du cercle qui entoure le disque d'antibiotique : souche ou bactérie sensible, intermédiaire ou résistante.

1.2.1. TECHNIQUE

> On Prépare Des Suspensions (5 ml d'eau physiologique + une colonie) ;

> On inonde la suspension sur des géloses Mueller Hinton.

> On laisse sécher dans l'étuve pendant 45minutes ;

> On dispose les disques de l'antibiogramme sur les géloses préparés soit directement, soit avec un distributeur ;

> Incubation 24H à 37°C ; Résistant

> Lecture des zones des antibiogrammes Intermédiaire

Sensible

> La lecture des résultats commence par la mesure des diamètres des auréoles (zones d'inhibition de croissance de la souche microbienne). Pour chaque souche microbienne, la sensibilité ou la résistance à un antibiotique est différente.

Elle fait appel aux notions de concentration critique inférieure (c) et de concentration critique supérieure (C).

c : dose minimale d'antibiotique qu'un malade peut recevoir sans dangers et qui fait effet sur la souche bactérienne.

C : dose maximale d'antibiotique qu'un malade peut recevoir sans dangers et qui fait effet sur la souche bactérienne.

Pharmacocinétique : chez quelqu'un correctement traité par un antibiotique, la concentration d'antibiotique dans l'organisme est supposée osciller entre la concentration critique inférieure et supérieure.

Ces données sont disponibles sur des abaques.

Pour chaque couple bactérie-antibiotique, on détermine une concentration minima inhibitrice (ou concentration minimale inhibitrice, ou CMI). La CMI est la plus petite concentration d'antibiotique qui inhibe toute croissance visible. En comparant la CMI aux concentrations critiques, on détermine la sensibilité ou la résistance de la bactérie à l'antibiotique.

~ la bactérie est sensible à l'antibiotique quand la CMI est inférieure à la concentration

critique inférieure. Concrètement, ceci signifie qu'il suffit d'une faible concentration

d'antibiotique pour tuer les bactéries et que cette dose nécessaire est encore plus faible

que la plus faible des doses qu'on peut administrer chez l'homme. Donc en clair, si on

traite quelqu'un avec l'antibiotique, la concentration de celui-ci dans l'organisme sera

toujours suffisante pour tuer les bactéries.

· la bactérie est résistante à l'antibiotique quand la CMI est supérieure à la concentration critique supérieure. Concrètement, la dose nécessaire pour tuer les bactéries est bien trop élevée pour être supportée chez l'homme sans effets secondaires importants. Cet antibiotique ne peut pas être utilisé pour traiter une infection.

· la bactérie est intermédiaire à l'antibiotique quand la CMI est comprise entre les deux concentrations critiques. En pratique, ça correspond à une situation où la concentration est tantôt suffisante pour tuer les bactéries, tantôt insuffisante. Il faut considérer que la bactérie sera résistante in vivo et il ne faut pas utiliser cet antibiotique.

Antibiogramme d'une souche d'Escherichia coli,
isolée chez un patient (21ans)

> Après la lecture, la technicienne remplit une feuille des résultats ou elle précise le nom, l'examen demandé, la nature du prélèvement, le germe isolé, le cachet du laboratoire (voir annexe 1) et un bulletin d'analyse en microbiologie ou sont notés les examens demandes (voir annexe 2).

2. UNITE DE BIOCHIMIE

Cette unité s'occupe essentiellement des examens biochimiques tels que l'urée sanguine,

la Créatinémie, albuminurie, cholestérol, Triglycérides...etc. 2.1. Présentation des zones de travail

2.1.1. PREMIER RAYON

Ce rayon est utilisé pour les prélèvements sanguins des patients hospitalisés dans les

urgences. Le prélèvement de sang est généralement veineux (au pli du coude). Le tube de prélèvement peut éventuellement contenir un anticoagulant. On retrouve aussi dans cette salle une centrifugeuse.

2.1.2. DEUXIEME RAYON

Dans ce rayon, on effectue la chimie des urines, de l'acide urique en utilisant la technique du

dosage, et la mesure de la glycémie.

DOSAGE DE L'UREE :

Le taux d'urée dépend de la fonction rénale, des apports alimentaires en protéines, de l'état d'hydratation. L'augmentation de son taux dans le sang est généralement liée à une altération rénale.

· Valeurs Normales de l'urée

Homme : 3 à 7.5 mmol/l soit 0.18 à 0.45 g/l Femme : 2.5 à 7 mmol/l soit 0.15 à 0.42 g/l 2.1.3. TROISIEME RAYON

Ce rayon s'occupe de l'ionogramme. Cet est un examen qui analyse la concentration en électrolytes d'un liquide organique (sang, urines, liquide céphalo-rachidien). Ces électrolytes sont des sels, acides, bases, capables de se dissocier en solution pour former des ions. Ces ions sont de deux types :

· les cations (ions positifs attirés par la cathode) tels que :

o le sodium Na+,

o le potassium K+,

o le calcium Ca++,

o le magnésium Mg++.

· les anions (ions négatifs attirés par l'anode) tels que :

o le chlorure Cl-,

o les bicarbonates HCO3-, o les phosphates HPO4- -, o les sulfates SO4- -,

o les acides organiques o les protéines.

L'ionogramme est un examen biologique très courant et très utile pour dépister les troubles ioniques qui surviennent dans les maladies rénales, hormonales, les troubles de l'hydratation, les troubles gastrointestinaux (diarrhée, vomissements), les malnutritions, et dans toute perturbation de l'équilibre acidobasique de l'organisme.

Cet examen fait partie des éléments de surveillance d'un malade, sous traitement (diurétiques par exemple).

- Types d'ionogramme

Sanguins

ionogramme simple: Na+ ; K+ ; Cl-

ionogramme complet: simple + HCO3- ; protéines ionogramme étendu: complet + Ca2+ ; phosphates Urinaires

Na+ ; K+ ; CL- ; phosphore; albumine ; acétone ; glucose ; urée ; créatinine ; acide urique ; amylase

- Taux Normaux D'ions:

- Sodium (Na+): 142 mmol/l;

- Potassium (K+): 5 mmol/l;

- Calcium (Ca+ +): 2, 5 mmol/l;

- Magnésium (Mg+ +) : 1,5 mmol/l ;

- Chlore (Cl-) : 103 mmol/l ;

- Bicarbonates (HCO3-) : 27 mmol/l ;

- Phosphates (HPO4 - -) : 1 mmol/l.

2.1.4. QUATRIEME RAYON

Ce rayon contient en plus des autres un appareil très sophistiqué connu sous le nom de « Dade Behring », qui est capable de réaliser plusieurs tests à la fois tels que l'urée, l'acide urique, bilirubine, glycémie (TGO-TGP), cholestérol...etc.

CHAPITRE 03 PRESENTATION DU C.T.S

Le centre de transfusion sanguine est un laboratoire où s'effectuent les différentes analyses hématologiques et sérologiques des échantillons de malades ou des donneurs.

Il comporte, une structure d'accueil, une structure médicale, deux salles de prélèvements, une salle de collation, une unité d'hématologie qui s'occupe essentiellement de la formule de numérotation sanguine et une unité de sérologie qui s'occupe des examens plus précis tels que HBS, HIV,HCV.

Ce centre comporte aussi une banque qui s'occupe de la conservation des poches de sangs des donneurs pour les transférer aux blocs chirurgicaux des différents services du C.H.U.

3. ZONE DE TRAVAIL

1.1. SECRETARIAT

Il comprend quatre secrétaires, leur travail consiste à la réception des patients, l'enregistrement des données nécessaires (nom, prénom, âge, type d'analyse, code du patient, et la date) et la remise des résultats (le bulletin médical).

1.2. STRUCTURE D'ACCUEIL

La structure d'accueil a pour mission principale d'accueillir les patients et toutes personnes venues au centre.

1.3. STRUCTURE MEDICALE

Cette structure est réservée à l'examen médical des patients (tension artériels, poids, etc.) avant d'effectuer un éventuel prélèvement sanguin, elle comprend deux médecins.

1.4. UNITE DE PRELEVEMENT

L'unité de prélèvement est subdivisée en deux sous unités :

La première unité pour le prélèvement sanguin des malades et la deuxième unité pour le prélèvement sanguin des donneurs.

Les deux sous unités sont équipées de matériel adéquat.

1.5. UNITE DE DISTRIBUTION 1.5.1. UNITE DE SEROLOGIE

Elle comprend 04 techniciens, leur travail consiste à l'examen sérologique des échantillons (HBS, HIV, HCV...) ainsi que le groupage.

1.5.2. UNITE D'HEMATOLOGIE

Elle comporte 03 techniciens qui s'occupent des différents tests hématologiques plus précisément pour l'obtention de la formule de numérotation sanguine (FNS) des patients.

1.5.3. LA BANQUE

C'est une zone réservée a l'entré et sortie des poches de sang des donneurs, car ces poches doivent impérativement passer par l'examen sérologique et le groupage. Elle comprend 04 techniciens.

1.5.4. LE DÉPÔT

Le dépôt est le lieu de stockage de tous les produits et réactifs utilisés ou non sous la responsabilité du magasinier.

2. ORGANIGRAMME DE CENTRE DE TRANSFUSION SANGUINE

DSPS

ECOLE
PARAMEDICALE

C.H.U SECTEUR

SANITAIRE

CENTRE DE TRANSFUSION SANGUINE

MEDECIN CHEF

SURVEILLANT
MEDICALE

SECRETARIAT

DÉPÔT

STRUCTURE
MEDICALE

STRUCTURE
D'ACCUEIL

SALLE DE
COLLATION

UNITE DE
PRELEVEMENT

UNITE DE
SEROLOGIE

UNITE
D'HEMATOLOGIE

UNITE DE DISTRIBUTION

LA
BANQUE

CHAPITRE 04
PRESENTATION DES UNITES DU C.T.S

HEMATIE

1. UNITE DE TRANSFUSION SANGUINE (CTS) 1.1 UNITE DE PRELEVEMENT

Cette unité assure le prélèvement sanguin sur des patients hospitalisés ou non.

Le médecin est dans l'obligation d'avoir des informations pré don du patient à partir d'un entretien médicale et d'un examen clinique orienté plus précisément dans le but d'un dépistage de maladie transmissible par le sang, c'est une étape primordiale pour garantir une plus grande sécurité entre receveurdonneur.

1.2 CONDITION DU DON DE SANG

· Les prélèvements de sang sont effectués chez les sujets âgés de 18 à 65 ans ;

· La quantité de sang recueilli doit impérativement tenir compte du poids du donneur, il faut qu'il soit d'un poids supérieur à 50 Kg ;

· La fréquence des prélèvements de sang ne doit pas être supérieur à 5 fois par ans chez l'homme et 3 fois chez la femme ;

· L'intervalle entre deux prélèvements successifs est autorisé à la limite de 7 ml/Kg, sans que la quantité totale ne soit supérieure à 450 ml ;

· Chaque prélèvement de sang doit inévitablement passer par :

v' Un interrogatoire orienté pour la quête des maladies transmissible par le sang (VIH...) ; 1' Un examen clinique, comportant notamment une appréciation de l'état général

du corps et une prise de la tension artérielle qui doit être comprise entre 12 et 16 chez un sujet sain.

NB : Dans quels cas éviter le don de sang ?

o Toute intervention chirurgicale après 6 mois (plaie, appendice, curetage...etc.) ; o Femme enceinte ou qui accouche ou qui allaite ou en période de menstruation ; o Après une vaccination de 1 à 3 mois ;

o Toxicomanie, drogué, alcoolique ;

o Pâleur (Anémie) ;

o Homo sexualité ;

o Toute prise médicamenteuse (anti inflammatoire ex : Aspégique) ;

o En cas de forte fièvre ;

o Voyage à l'étranger.

1.3 MATERIELS

· Poche

· Agitateur

1.4 TECHNIQUE DE PRELEVEMENT

Incliner le bras ;

Tapoter la veine ;

Désinfecter la peau avec un tampon d'alcool ;

Placer le garrot au dessus ;

Faire serrer le poing de malade plusieurs fois ;

Repérer avec l'index gauche la veine à piquer ;

Désinfecter la peau une deuxième fois ;

Piquer et enfoncer l'aiguille de 1 à 1.5 cm dans la veine ;

Garder le garrot serré pour permettre l'écoulement du sang dans la poche ;

Une fois la poche rempli, ouvrir le garrot, retirer l'aiguille, et la placer dans l'embout ;

Placer un tampon d'alcool sur la piqûre.

1.5 RECUEIL ET CONSERVATION DU SANG

Le sang est prélevé dans des poches de 450 ml contenant du Citrate, sur chaque prélèvement, on doit pratiquer les analyses biologiques suivantes :

1' Détermination du groupe sanguin du donneur et son rhésus

1' La mesure du taux d'hémoglobine

1' Test sérologique (syphilis, HBS, HCV, HIV...)

Il faut noter sur chaque poche le nom du centre de prélèvement, le numéro de série, le groupage, la date du prélèvement, sans oublier de conserver les poches à basse température.

REMARQUE IMPORTANTE

Des accidents graves et parfois mortels peuvent subvenir lors ou après une transfusion sanguine et cela dans le cas d'une incompatibilité entre donneur et receveur.

Cette incompatibilité se manifeste chez le patient receveur par une agglutination intravasculaire de ces globules rouges, et la formation d'amas qui bloque la circulation sanguine pouvant provoquer des embolies.

Il est très important de connaitre les lois de transfusion et les groupes sanguins pour éviter toute erreur d'incompatibilité :

Anticorps	A	B	AB	O
Type d'anticorps	Anti-B	Anti-A	Néant	Anti-A et Anti-B
LOIS DE TRANSFUSION
Donneur		Receveur
	A	B	AB^1	O
A	oui	non	oui	non
B	non	oui	oui	non
AB	non	non	oui	non
O2	oui	oui	oui	oui
Oui : compatibilitéNon : incompatibilité1 Receveur universel ^2 Donneur universel

2. UNITE DE SEROLOGIE

La sérologie est la mise en évidence et éventuellement le dosage d'anticorps spécifiques. Elle est donc liée à l'étude des immunoglobulines du sérum sanguin ou d'autres liquides organiques. Elle est utilisée comme outil diagnostic ou comme outil de dépistage (SIDA, Hépatite,...) .

Les techniques en sérologie servent à diagnostiquer une maladie infectieuse ou à relever la présence d'un type particulier d'antigène comme ceux des groupes sanguins.

2.1 TEST DE DETECTION DE L'ANTIGENE DE SURFACE DU VIRUS DE L'HEPATITE B

L'hépatite B est une maladie grave du foie causée par le virus de l'hépatite B (VHB). Elle est extrêmement infectieuse et se transmet par rapports sexuels ou par contact direct avec du sang ou des liquides organiques infectés. Le VHB attaque directement le foie, provoquant une maladie grave, des lésions hépatiques et dans certains cas la mort. Il existe un vaccin sûr et efficace pour prévenir la maladie après sa détection.

Le test immunnoenzymatique pour la détection de l'antigène de surface du virus de l'hépatite B dans le sérum ou le plasma s'effectue à l'aide des ELISA Processors BEP II, III, 2000. Il a été mis au point pour l'analyse d'échantillons individuels. Les réactifs ne peuvent être utilisés qu'à des fins de diagnostic in vitro.

2.1.1. INTERET DIAGNOSTIQUE DU TEST

Une hépatite virale de type B est le plus souvent accompagnée de l'apparition de l'antigène de surface du virus de l'hépatite B dans le sérum. En règle générale, l'AgHBs peut être mis en évidence dans le sérum dès 2 à 3 semaines avant le début de la maladie, et atteint son point culminant au moment de l'apparition des symptômes caractéristiques (ictère, modification de concentration des enzymes spécifiques du foie). On observe ensuite généralement une lente élimination de l'antigène. Chez un certain nombre de sujets, et chez un pourcentage inconnu de personne ayant été infectées par le virus de façon subclinique, l'antigène peut rester mesurable dans le sérum pendant des années, voire à vie.

Dans la mesure où une transfusion de sang contenant le l'AgHBs a entrainé une hépatite B dans de nombreux cas, le principal intérêt de la mise en évidence de l'AgHBs réside dans le dépistage des dons de sang, afin de réduire la fréquence des hépatites B post-transfusionnelles. La détection de l'AgHBs est également utilisée pour le diagnostic des hépatites B aiguës et chroniques.

2.1.2. REACTIFS

· 2 plaques d'Enzygnost HBsAg 5.0 ;

· 2 x 6.5ml du conjugué 1 (Anti-HBs/Biotine) ;

· 2 x 15ml du conjugué 2 (stréptavidine/POD) ;

· 2 x 1.5ml de sérum de contrôle HBsAg positif ;

· 2 x 3 ml de sérum de contrôle HBsAg négatif. 2.1.3. PRINCIPE

Le test immunnoenzymatique pour la détection de l'antigène de surface du virus de l'hépatite B est basé sur une réaction en deux étapes :

> L'AgHBs contenu dans l'échantillon à tester réagit tout d'abord simultanément d'une part avec les anticorps anti-HBs polyclonaux fixés à la surface des cupules de la plaque de micrtitration ;

> D'autre part avec le Conjugué 1 (Anti-HBs/Biotine, coloré en Bleu) ;

Après élimination des éléments non liés, le conjugué 2 (stréptavidine/POD, coloré en jaune) réagit avec le conjugué 1.

Après élimination des éléments non liés, l'activité enzymatique du Conjugué 2 lié est mesurée (réaction colorée en bleu). La transformation enzymatique du chromogène est ensuite interrompue par l'addition de la Solution d'arrêt POD réaction colorée en jaune). L'intensité de la coloration est directement proportionnelle à la concentration antigénique de l'échantillon.

NB : Les échantillons à tester doivent être des sérums humains ou plasmas citratés, héprinés ou prélevés sur EDTA, obtenus selon les techniques standard des laboratoires. Les échantillons peuvent être conservés 3 jours maximum à +2/+8°C. Pour une conservation plus longue, les congeler.

2.1.4. METHODE

Réalisation Du Test Sur Le BEP® II :

> Déposer 100 pl de sérum de contrôle négatif dans les 3 premières cupules (A1 à C1) ;

> Ajouter 100 pl de sérum de contrôle positif dans les 2 cupules suivantes (D1 et E1) ;

> Ajouter 100 pl de chacun des échantillons non dilués dans les autres cupules (2) ;

> Enchaîner la distribution du Conjugué 1 immédiatement après celle des échantillons ;

> Distribuer dans chaque cupule 25 pl de Conjugué 1 (Anti-HBs/Biotine) ;

> Couvrir ensuite d'une feuille adhésive

> Immédiatement après la distribution du Conjugué placer la plaque dans l'incubateur ;

> Laisser incuber 60 #177; 2 min à +37 #177;1 °C ;

> Enchaîner immédiatement le processus de lavage, en retirant la feuille adhésive ;

> Aspirer le contenu de toutes les cupules ;

> Distribuer dans chacune des cupules environ 0.3 ml de Solution de lavage ;

> Répéter 4 fois l'opération, en respectant un temps de contact de 10 sec ;

> Dés la fin du lavage, distribuer immédiatement le Conjugué 2 afin d'éviter tout desséchement ;

> Distribuer 100 pl du Conjugué 2(Streptavidine/POD) dans chaque cupule ;

> Couvrir d'une nouvelle feuille adhésive, et placer immédiatement la plaque dans l'incubateur.

> Laisser incuber 30 #177; 2 min à 37 #177;1°C,

> Enchaîner immédiatement le processus de lavage, en retirant la feuille adhésive ;

> Aspirer le contenu de toutes les cupules ;

> Distribuer dans chacune des cupules environ 0.3 ml de Solution de lavage ;

> Répéter 4 fois l'opération, en respectant un temps de contact de 10 sec ;

> Dés la fin du lavage, distribuer immédiatement le Substrat afin d'éviter tout desséchement ;

> Distribuer dans chaque cupule 75 pl de la Solution d'emploi du Chromogène ;

> Couvrir la plaque d'une nouvelle feuille adhésive ;

> Laisser incuber le Substrat 30 #177; 2 min à +15/+25°C, à l'abri de la lumière ;

> Pour arrêter la réaction, retirer la feuille adhésive et ajouter dans chaque cupule 75 pl de Solution d'arrêt POD en respectant le même rythme qu'en 9 ;

> Pour faire une mesure photométrique dans l'heure qui suit à 450 nm, la longueur d'onde de référence doit être de 650 nm (éventuellement comprise entre 615 et 690 nm).

Si le photomètre nécessite un réglage sur zéro, utiliser la Solution d'arrêt POD en respectant les instructions données par le fabricant.

3. UNITE D'HEMATOLOGIE

L'hématologie est la science qui étudie le sang sous tous ces aspects, morphologiques, physiologiques, chimiques, génétique.

Elle une partie de la médecine qui traite des maladies du sang et des organes hématopoïétiques (Larousse 1988).

3.1 FORMULE DE NUMEROTATION SANGUINE (FNS)

La formule de numération sanguine (FNS) ou hémogramme permet de mesurer le nombre d'éléments de chacune des trois catégories de cellules sanguines que sont les globules rouges (hématies), les globules blancs (leucocytes) et les plaquettes.

La numération globulaire consiste à compter le nombre de globules de chaque catégorie, et la

formule leucocytaire à répartir les globules blancs en différentes classes en fonction de leurs caractéristiques.

La formule de numération fournit d'autres indications sur les constituants du sang tels que :

Les hématies ou globules rouges : (3.5 à 5.5 millions). Cet examen isolé oriente vers une anémie (pas assez de globules) ou une polyglobulie (trop de globules). Il permet aussi de voir s'il y a des formes anormales (schizocytes, hématies falciformes).

L'hémoglobine : (11 à 16g) une hémoglobine trop basse (inférieure à 10.5g) permet d'établir un diagnostic d'anémie.

L'hématocrite : (37 à 47%) elle donne la concentration en hémoglobine dans le sang, elle est abaissée dans les anémies, elle est augmentée en particulier chez les consommateurs d'EPO. Le VGM ou volume globulaire moyen (80 à 95). Il mesure la taille moyenne du globule rouge. Ce volume diminue dans les anémies chroniques par saignement ou manque de fer. Il augmente dans les anémies par carence en vitamine, par mauvaise absorption alimentaire du tube digestif. Il augmente aussi dans la consommation chronique de tabac ou d'alcool.

Les CCMH et TCMH respectivement "concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine" et "taux corpusculaire moyen en hémoglobine" n'ont pas d'intérêt diagnostic sinon que le CCMH bas confirme une hypochromie (manque de fer).

Les leucocytes ou globules blancs. (1000 à 3500)

Leur mesure sert à s'assurer comme les globules rouges, d'un nombre anormal de leucocytes, ou de formes anormales.

Trop de leucocytes peut correspondre à une inflammation ou à une maladie de type leucémie (beaucoup plus rare). Les formes anormales que l'on appelle des blastes font craindre une leucémie, mais toutes les leucémies ne sont pas graves. Les leucocytes sont classés en:

Polynucléaire neutrophiles : (2000 à 7500 chez l'adulte) leur élévation importante signe une infection type sinusite, appendicite etc. Mais ils augmentent aussi chez le tabagique, sous traitement corticoïde, ou dans certaines leucémies.

Polynucléaires éosinophiles : (inf. à 650) leur élévation signe des terrains allergiques, des terrains colitiques, des parasitoses (oxyures, vers solitaire)

Polynucléaires basophiles (inf. à 200) leur augmentation se rencontre dans certaines leucémies, dans les cirrhoses et les problèmes thyroïdiens.

Lymphocytes (1000 à 4000 chez l'adulte) Leur augmentation se constate dans beaucoup de maladies virales (coqueluche, oreillons, brucellose, grippe etc.) mais aussi dans les leucémies.

Monocytes (200 à 1000) leur nombre augmente dans certaines maladies comme la mononucléose, après une anémie et dans certaines leucémies.

3.2 PRINCIPE

Le sang est prélevé dans des conditions d'asepsie très stricte, ensuite il est recueilli dans un tube portant un anticoagulant comme l'héparine ou l'EDTA.

3.3 MATERIELS

· Auto analyseur

· Tube contenant l'EDTA 3.4 REACTIF

· Anti coagulant EDTA 3.5 TECHNIQUE

> On Prélève le sang qu'on met dans un tube contenant l'EDTA ;

> On Numérote les tubes puis on les classe dans le portoir ;

> On prend le tube et on l'agite un peu ;

> On ouvre ce dernier, et on le fait entrer dans l'auto analyseur;

> L'auto analyseur va nous donner plusieurs chiffres des éléments qui constituent le sang humain. 3.6 RESULTATS (sexe : Femme, âge : 57 ans)

n

GB 5.52 [10.3/ml]

n GB 4.94 [10.6/ml]

n HGB 1 [g/dl]

n HCT 43.3 [y]

n VGM 87.7 [F]

n TGMH 28.9 [pg]

n CCMH 30.0 [g/dl]

n PLQ 183 [10.3/ml ]

n

IDR - SD 42.6 [F1]

n IDR - CV 13. [Y]

n IDP 11.3 [F1] Constantes pour calculer GR, HBG, HCT

n VPM 10.0 [F1]

n P - RGC 25. 8 [%]

n PCT 0.24 [%]

n NEUT 3.01 [10.3/ml] 54.5 %

n LYMPH 1.99 [10.3/ml] 36.1 %

n MONO 0.24 [10.3/ml] 7.64 %

n EO 0.07 [1043/ml] 1.3 %

n BASO 0.03 [10.3/ml] 0.5 %

n RET 0.77 [%] 0.0380 [10.6/ml]

n

IRF 205 [%]

n LFR 97.5 [%]

n MFR 2.5 [%] Constantes pour calculer RET

n HFR 0.0 [%]

- Commentaires : négatifs

NB : Il existe deux genres de variation du nombre globulaire : le nombre globulaire physiologique et le nombre globulaire pathologique.

Physiologique : le nombre globulaire physiologique varie selon l'âge, le sexe, l'altitude...

Pathologique : le nombre globulaire pathologique varie selon la diminution ou l'élévation de l'hémoglobine (cas d'anémie microcytaire ou macrocytaire) ; et l'élévation du nombre de leucocytes ou globule blanc qui est appelée Hyperleucocytose ou une diminution des GB appelée Leucopénie.

VALEURS NORMALES DES GR, GB, PLQ

GR : -> Chez la femme : 4.500.000/mm³

-> Chez l'homme : 5 à 5.5millions/mm³

- Neutrophile 65%

- Lymphocyte 25 %

GB : 6000 - 10000/mm³ devisée en - Monocyte 6 %

- Neutrophile 3%

- Basophile 1 %

PLQ : 200.000 - 400.000/ mm³

PRESENTATION DU SERVICE DE PHYSIOLOGIE

Le service de physiologie s'occupe de l'étude des processus physiques et chimiques qui ont lieu dans les organismes vivants lors de l'accomplissement des fonctions vitales. La physiologie étudie des fonctions fondamentales telles que la respiration, la transmission des synapses et le fonctionnement du système nerveux qui se produisent au sein des cellules, des tissus, des organes et des divers systèmes organiques.

Ce service reçoit ainsi quotidiennement un nombre de 10 à 20 malades par jour sous avis médicale pour des contrôles ou des diagnostiques de certaines maladies respiratoires et neurologiques.

4. ZONE DE TRAVAIL

1 1.1. LA RECEPTION

2 Elle comprend deux réceptionnistes, leur travail consiste à la réception des patients.

1.2. ZONE MEDICALE

Cette zone comprend : deux médecins chefs, deux maîtres assistants, et 4 médecins résidents, elle est subdivisée en trois salles : EFR, EEG, EMG.

1.2.1. SALLE D'EXPLORATION DE LA FONCTION RESPIRATOIRE (EFR)

Cette salle comporte un médecin chef et une assistante qui s'occupe de tous les examens et exploration de la fonction respiratoire et c'est au médecin de donner ou non la confirmation d'un éventuel trouble ventilatoires pouvant être la cause de crises d'asthme.

1.2.2. SALLE DE L'ELECTROENCEPHALOGRAMME (EEG)

Cette salle comporte un électroencéphalogramme qui est un appareil d'enregistrement graphique de l'activité électrique du cerveau au moyen d'électrodes placées sur le crâne du patient. Il s'agit d'un examen indolore et sans danger.

1.2.3. SALLE DE L'ELECTROMYOGRAMME (EMG)

Cette salle comporte un électromyogramme qui est un examen qui permet d'enregistrer l'activité électrique spontanée d'un muscle ou d'un nerf. Le tracé que l'on obtient s'appelle électromyogramme Technique.

PRESENTATION DES ZONES TECHNIQUES

1. SALLE D'EXPLORATION DE LA FONCTION RESPIRATOIRE (EFR)

Les tests effectués dans la salle d'exploration de la fonction respiratoire ont pour but d'explorer la capacité des poumons lors d'une respiration.

Les tests suivent trois types d'examens : 1) test de ventilation forcée, 2) test de capacité vitale, 3) test des mouvements ventilatoires.

Avant que le médecin effectue ces tests, il commence par une petite consultation pour voir l'état de la maladie et son avancement, toujours suivi d'un questionnaire médicale, qui comporte :

Les coordonnés du patient (Nom, prénom, numéro, date de naissance, adresse, race, poids, longueur, hôpital...) ; L'histoire de la maladie, Voir si le patient est fumeur ou non (nombre de paquet de cigarettes/jours, nombre d'année) ; L'humidité ou non du lieu de résidence ; Probabilité d'être allergique à quelque chose ou à tel médicament ; La date du début du traitement...etc.

1.2 Les Tests d'exploration de la Fonction Respiratoire (EFR)

Les tests sont effectués pour voir la capacité des poumons et pour le diagnostic d'une affection thoracique ou extra thoracique pouvant retentir sur la fonction respiratoire. Diagnostic d'asthme. Ces tests ont pour but la quantification des troubles fonctionnels et évaluation de l'handicap.

L'EFR comportent toujours trois types d'examens : - Examen 1 :

Appelé test de ventilation forcée ou VF, utilisé pour voir la quantité d'air inspiré.

Dans un premier temps le médecin demande au patient d'aspirer puis d'expirer fortement en utilisant un SPIROMÈTRE qui permet de mesurer les volumes et les débits pulmonaires du patient.

La spirométrie de base mesure les volumes et les débits mobilisables à la bouche. La précision et la reproductibilité des mesures obtenues dépendent:

- De la coopération du sujet

- De sa motivation

- De sa compréhension

- Du pouvoir de persuasion du technicien

Un total de trois essais avec une reproductibilité à 5% des deux meilleurs est habituellement suffisant. L'inspection des courbes est indispensable avant de valider une mesure.

- Examen 2 :

Appelé test de capacité vitale qui mesure la capacité des poumons lors d'une expiration.

Dans un premier temps le médecin demande au patient d'inspirer à plusieurs reprises puis d'expirer doucement et lentement.

La capacité vitale ou VC est le volume d'aire mobilisée d'un effort d'inspiration et d'expiration complète et lente, à partir d'une inspiration et expiration totale.

La capacité vitale forcé ou FVC est le volume d'aire mobilisé durant une expiration forcée maximale suite à une inspiration normale.

- Examen 3 :

Appelé test des mouvements ventilatoires. Le médecin demande alors au patient dans un premier temps de respirer normalement puis d'inspirer et d'expirer fortement et rapidement en suivant la recommandation du MVV.

Le mouvement ventilatoire maximale ou MVV est le volume d'air mobilisé dans les poumons par des mouvements respiratoires et expiratoires forcés durant 12 secondes extrapolés à 1 minute.

1.3 RESULTATS

· Les résultats sont recueillis chez un premier patient âgés de 74 ans, fumeurs pendant prés de 30 ans, s'est abstenu de fumer il y'a maintenant 20 ans, atteint d'une maladie chronique de type glaucome (maladie oculaire due à une pression anormale à l'intérieur de l'oeil entraînant une baisse de la vue pouvant aller jusqu'à la cécité).

Les résultats de ce patient ont été positifs, parce qu'il prend de la Tangisine qui agit sur le SNC pour malade néoplasique ou en cas de douleur de l'oeil.

· Le deuxième patient est une jeune fille de 23 ans qui souffre depuis 4 ans de troubles respiratoires aigus, a pris avant de venir consulter sa dose de ventoline et de klenyle qui sont des bronchodilatateurs (ouvre les bronches et permet une bonne respiration et un soulagement en quelques minutes).

Les résultats de cette patiente ont été positifs, car l'effet de ces bronchodilatateurs a faussé les résultats et la patiente s'est trouvée obligée de revenir le lendemain sans avoir pris de ces mêmes médicaments et cela pour avoir le bon diagnostic.

Les Troubles Ventilatoires Selon La Classification ATS

	Taux	Troubles obstructifs		Troubles restrictifs	FEV 1
70 -100 % 60 - 70 % 34 - 60 % Inf à 34 %	TO Moyen TO Modéré TO Sévère TO Très sévère			FVC
Sup à 70 % 60 - 70 % 34 - 50 % Inf à 34 %		TR Moyen TR Modéré TR Sévère TR Très sévère

Les Troubles Ventilatoires Selon La Classification Nhanes III

	Taux		Troubles obstructifs	FEV 1
Sup à 60 % 40 - 60 % Inf à 40 %	TO Moyen TO Modéré TO Sévère

2. SALLE DE L'ELECTROENCEPHALOGRAMME (EEG)

L'EEG consiste à enregistrer l'activité électrique des cellules nerveuses cérébrales à l'aide d'électrodes superficielles placées au contact du cuir chevelu. Les signaux sont recueillis à la surface du crâne sous forme de modifications de champs électriques et magnétiques. Ces signaux sont très faibles et doivent être amplifiés pour l'interprétation après avoir été recueillis puis analysés par informatique.

L'EEG se pratique pour établir le diagnostic et puis la surveillance de l'épilepsie, pour évaluer le retentissement de certaines tumeurs cérébrales et lors des traumatismes crâniens.

Casque munie d'électrodes

- Photos d'une salle d'EEG

2.1 PRINCIPE

Cet examen consiste à enregistrer l'activité électrique du cerveau sur un tracé. Il permet d'étudier et de différencier ses rythmes principaux (delta, thêta, alpha et bêta). Le plus souvent, l'examen est réalisé en état de veille. Plus rarement, il a lieu après privation de sommeil ou sur une durée de vingt-quatre heures...

On réalise cet examen le plus souvent pour détecter une maladie épileptique (affection souvent sousestimée) et en surveiller le traitement, mais aussi pour rechercher d'éventuels signes d'encéphalite.

L'EEG permet également d'étudier le sommeil dans certaines affections (syndrome d'apnée du sommeil...). Il est toutefois supplanté par le scanner et l'IRM pour diagnostiquer une tumeur cérébrale.

2.2 TECHNIQUE

Avant l'examen le médecin demande au patient uniquement de ne pas mettre de laque ni de gel sur les cheveux, et d'avoir les cheveux propres.

Il prescrira peut-être de ne pas prendre certains médicaments le jour de l'examen, ceci pour ne pas perturber les résultats.

L'EEG dure généralement un quart d'heure, mais il faut compter vingt minutes avec la préparation. S'il s'agit d'un électroencéphalogramme "de sommeil", il dure environ une heure.

Il suit habituellement les étapes suivantes :

> Le patient est couché sur la table d'examen dans un local peu éclairé ;

> Appliquer une pâte conductrice à des endroits précis et symétriques du cuir chevelu où sont placées des électrodes reliés à un appareil enregistreur ;

> L'enregistrement débute les yeux fermés ;

> Ouvrir les yeux à plusieurs reprises, pour étudier la bonne réactivité du cerveau ;

> Si l'état physique le permet, le médecin demande au patient de respirer vite et fort (épreuve d'hyperpnée) pendant une courte période (moins de trois minutes) ;

> Pour finir, le patient est soumit à une épreuve lumineuse : elle consiste à regarder les flashs lumineux intermittents d'un stroboscope (stimulation lumineuse intermittente ou SLI) ;

> Par ces différentes stimulations, l'objectif est de révéler des anomalies, en particulier épileptiques. 2.3. RESULTATS

Des informations peuvent être communiquées après l'examen par le médecin. Le compte rendu définitif est généralement disponible dans les heures ou les jours qui suivent , car l'interprétation du tracé est complexe et difficile.

3. SALLE DE L'ELECTROMYOGRAMME (EMG)

Un électromyogramme est l'examen qui permet d'étudier les nerfs et les muscles, fonctionnant à l'aide de courants électriques de très faible intensité ainsi que leur fonctionnement : on analyse ainsi la contraction musculaire et la conduction nerveuse (capacité des nerfs à conduire le courant nerveux).

L'électromyogramme évalue la sévérité d'une atteinte nerveuse, précise le type d'atteinte et son niveau, s'il s'agit d'une maladie localisée ou plus générale.

Il est indiqué lorsque l'on suspecte une maladie de la racine nerveuse, du nerf, de la jonction entre le nerf et le muscle, ou du muscle.

Electrodes de stimulation

Photos 1 d'une salle d'EMG

3.1 INTÉRÊT

L'intérêt de l'EMG est variable selon les parties du corps étudiées. Cet examen est particulièrement utile dans certaines pathologies comme les myalgies (douleurs musculaires), la myasthénie (fatigabilité musculaire extrême), ou certaines paralysies.

Cet examen va servir à différencier un trouble d'origine psychologique d'une atteinte du système nerveux central (cerveau et moelle épinière).

Lorsqu'il existe un syndrome neurogène, qui se caractérise par l'atteinte d'un nerf à la suite d'un traumatisme ou d'une inflammation, l'électromyogramme permet de localiser le ou les nerfs atteints et de préciser le mécanisme de cette pathologie.

Le nerf est constitué d'un axone entouré d'une gaine de myéline; grâce à cet examen, il est possible de différencier l'atteinte de ces deux tissus et d'en connaître l'origine. D'autre part, l'électromyogramme permet de suivre l'évolution de la maladie et de confirmer le diagnostic. Cependant, cet examen n'indique pas la cause des pathologies.

3.2 TECHNIQUE

Après un interrogatoire, durant lequel le patient explique au médecin les symptômes dont il se plaint, et lui indique les maladies dont il peut être atteint et pour lesquelles il prend des médicaments, un examen clinique complètera ces informations.

L'électromyogramme sera ensuite réalisé : il ne nécessite aucune anesthésie locale. Il faut distinguer deux types d'examen :

> L'examen de détection de l'activité musculaire : consiste à enregistrer l'activité électrique spontanée d'un muscle, tout d'abord au repos, puis lors d'un mouvement volontaire.

> On dépose une électrode de stimulation à la surface du muscle que l'on désire étudier. Celle-ci à la forme d'une aiguille que l'on enfonce à travers la peau jusqu'au muscle concerné. (Photos 2)

Electrodes de recueil

Photos 2 : l'EMG à l'aiguille

> L'électrode est reliée à un appareil qui va reproduire (sur un écran puis sur un papier déroulant) un dessin sous forme de graphique représentant une succession de petites ondes comportant des pointes. Chacune d'elles correspond à la contraction d'un muscle et plus précisément à la contraction d'une unité motrice qui correspond à un groupe de cellules musculaires (myofibrilles) commandées par une cellule nerveuse.

> L'examen de stimulation de l'activité musculaire procède différemment. Après avoir stimulé un nerf

en utilisant un courant électrique indolore mais bref, on voit apparaître une réaction musculaire. > Suivant les individus et la pathologie en cause, la vitesse de conduction de l'influx est différente. > Grâce à cet appareil, on peut ainsi mesurer la vitesse de conduction neuro-musculaire, et ainsi avoir

une idée de la maladie en cause. Autrement dit la mesure des vitesses de conduction nerveuse permet

d'apprécier la vitesse de conduction.

La vitesse de conduction =V (m/sec) = distanc du traj t d s n rfs t mps d la stimulation

> L'électromyogramme ne nécessite pas de préparation particulière et se déroule sur une durée allant de 20 à 40 minutes environ.

3.3 RESULTATS

Grâce aux renseignements obtenus par l'électromyogramme il est possible de distinguer les lésions des fibres constituant les nerfs de petits calibre et celles des nerfs de gros calibres. En effet les causes étant différentes il permet également de connaître le processus en cause et de savoir si celui-ci est aigu (survenu relativement rapidement) ou chronique (s'étalant dans le temps).

D'autre part l'électromyogramme autorise la surveillance et la récupération de la fonction de la conduction nerveuse.

CHAPITRE 01

PRESENTATION DE LA POLYCLINIQUE DE SIDI DJILLALI

La polyclinique de Sidi Djillali situé dans la wilaya de Sidi Bel Abbes est un établissement sanitaire qui a récemment ouvert ses portes. Il comporte ainsi plusieurs services et parmi ceux que j'ai visité : le laboratoire des analyses médicales.

Le laboratoire de cette polyclinique est récent, il est nouvellement équipé et a peu de personnel médical. 5. ZONE DE TRAVAIL

1.1. SECRETARIAT

Il comprend deux secrétaires, leur travail consiste à la réception des patients, l'enregistrement des données nécessaires (nom, prénom, âge, type d'analyse, code du patient, et la date) et à la remise des résultats (le bulletin médical).

1.2 SALLE DE PRELEVEMENT

En présence d'un médecin et d'une surveillante médicale, cette salle assure le prélèvement sanguin sur des patients non hospitalisé venus faire des analyses hématologiques et sérologique (groupage, urée, créatinine, cholestérol...).

1.3 LE LABORATOIRE

Le laboratoire est un local ou s'effectuent les diverses analyses médicales tels que le groupage, le rhésus, la mesure de la glycémie, l'urée, cholestérol, etc.

Le laboratoire fait aussi le test de détection la toxoplasmose et la rubéole chez la femme enceinte.

Il est doté de matériel adéquat des laboratoires du C.H.U. de Sidi Bel Abbes, comprend deux biologistes, et laborantin dans la salle de lecture.

1.4 SALLE DE LECTURE

Cette salle est réservée à la lecture des résultats par le spectrophotomètre, et pour le test de la toxo - rubéole.

CHAPITRE 02

PRESENTATION DE LA ZONE TECHNIQUE

LE LABORATOIRE

Le laboratoire est une salle où s'effectuent les différentes analyses médicales telles que la masure de la glycémie, la VS, le cholestérol, l'urée, et la détermination du groupage, ainsi que le dépistage de la ToxoRubéole chez la femme enceinte.

1. LA GLYCEMIE

La glycémie est le taux de glucose dans le sang.

La glycémie normale de l'être humain est de 1 g/L, lorsque le taux monte à 1.8 g/L, une partie du glucose passe dans l'urine (glycosurie). Un taux nettement excessif (2g et plus par litre) est une hyperglycémie, un taux insuffisant (0.8 g et moins par litre), est une hypoglycémie.

L'organisme se préserve de ces deux risques mortels par une fonction complexe, la glycorégulation, à laquelle prennent part, le foie, le pancréas, les reins, l'hypophyse, les capsules surrénales, etc. (Larousse, 1988).

1.1. MATERIELS

· Tubes secs oxalates

· Centrifugeuse

· Portoir

· Spectrophotomètre

1.2. REACTIFS

· 1CC = 1 ml de réactif Glycol ;

· Sérum humain ;

· 1 CC de réactif de Glucose ;

· 10 ul d'étalon standard ;

1.3. METHODE

> Le patient doit être à jeun avant de faire un prélèvement sanguin ;

> On prend trois tubes après centrifugation : le blanc, contient 1CC de réactif Glycol, deux étalons, et le sujet ;

> On prend le portoir qui contient des tubes blancs et on les remplit de 1CC de réactif de Glucose ;

> On ajoute 10 ul d'étalon standard + 1CC de réactif de glucose ;

> On prend les tubes des sujets, et on leur ajoute 10 ul de sérum + 1CC de réactif de glucose ;

> Après * ) heure, on procède a une lecture par le spectrophotomètre, les valeurs normales de la

glycémie étant de 0.60 à 1.10 g/L.

> Après la lecture des résultats par l'appareil, on termine par un rinçage à l'eau distillé.

Spectrophotomètre

1.4. RESULTATS

v' On peut lire les résultats automatiquement et directement à partir du spectrophotomètre, avec le blanc dont la longueur d'onde est de 505 nm ;

v' La concentration de l'étalon est de 1 g ;

1' La lecture des sujets est affichée automatiquement à chaque fois qu'on met un tube dans un long tuyau très fin qui absorbe le contenu du tube du sujet.

v' Les résultats des sujets sont classés dans le tableau ci-dessous :

Numéro du sujet	Glycémie		Interprétation	1168
0.90	Glycémie normale		1169
1.20	Hyperglycémie		1170
1.20	Hyperglycémie		1171
1.10	Glycémie normale		1172
1.30	Hyperglycémie		1173
1.10	Glycémie normale		1174
0.70	Glycémie normale		1175
0.70	Glycémie normale		1176
0.50	Hypoglycémie

2. LA VITESSE DE SEDIMENTATION (VS)

Appelée en abrégé VS, il s'agit de la vitesse avec laquelle les globules rouges d'un échantillon de sang, contenu dans un tube étroit, se sédimentent, c'est-à-

dire s'agglomèrent au fond du tube. Cet examen est facile

à réaliser, mais donne des informat

ions imprécises.

On l'utilise cependant beaucoup dans le suivi de certaines maladies inflammatoires, les rhumatismes par exemple.

La vitesse de sédimentation est élevée dans la plupart des maladies infectieuses et inflammatoires, en raison de l

'augmentation dans le sang des protéines de la réaction inflammatoire comme le fibrinogène ou les

alpha 2-

globulines. Ces molécules vont précipiter la chute des globules au fond du tube.

2.1. INTÉRÊT DE LA VS

La vitesse de sédimentation est le tem

ps nécessaire aux éléments cellulaires sanguins (globules blancs, -à-

globules rouges et plaquettes) pour sédimenter c'est dire tomber librement au bas d'une colonne de sang

t exprimée en hauteur de

incapable de coaguler (grâce à l'anticoagulant utilisé pour le prélèvement). Elle es

cellules sédimentées mesurées au bout d'1 heure et de 2 heures.

La VS est un élément d'orientation diagnostique, non spécifique mais simple à réaliser, concernant le nombre de globules rouges et leur volume, le taux de certaines protéines, la viscosité du sang. Résultats normaux de la VS :

Chez l'homme à la première heure : inférieure à 20 mm ;

Chez la femme en période menstruelle à la première heure : inférieure à 40 mm ;

-

Chez l'enfant et chez les personnes de plus de soixante dix ans à la première heure : inférieure à 30 mm.

2.2. MATERIELS

· Pipette pasteur

· Appareil de sédimentation

· Anticoagulant EDTA

2.3. METHODE

> On prend 300 mm de sang, et on les prend avec la pipet

te pasteur jusqu'au tube qui existent dans

l'appareil de sédimentation ;

>

On fait deux lectures à 1 heure d'intervalle entre les deux manipulations avant et après sédimentation des éléments du sang (voir photo 1/photo 2).

Photo 1 : Résultat avant sédimentation Photo 2 : Résultat après 1h

3. LE CHOLESTEROL

Le cholestérol est à la fois apporté par l'alimentation et synthétisé par le corps humain, principalement dans les cellules hépatiques et intestinales. Il entre dans la composition des membranes des organites et des cellules animales. Le cholestérol est également par un précurseur métabolique des acides biliaires, de la vitamine D et des hormones stéroïdiennes. Le cholestérol, molécule insoluble, circule associé à des lipoprotéines (HDL, LDL et VLDL).

3.1 PRODUITS

· Eau distillé

· Echantillon requis : sérum ou plasma recueilli sur héparine

· Réactif : R se compose de :

Tampon pipe, PH 6.7 50 mmol/L

Phénol 24 mmol/L

Cholate de sodium 05 mmol/L

Amino-4-antipyrine 0.5 mmol/L

Cholestérol estérase = 180 U/L Cholestérol oxydase = 200 U/L Peroxydase = 1000 U/L

· Réactif standard se compose de : Cholestérol bovin 2 g/L

3.2 TECHNIQUE

> L'échantillon requis est le sérum ou plasma recueilli sur héparine ou EDTA de patient à jeun ; > Dans la mesure du cholestérol, il y'a deux réactifs : le réactif R et le réactif Standard.

> Le réactif R peut être utilisé sur la plupart des automates, semi automate et en méthode manuelle.

Sa longueur d'onde est de 500 nm.

Température : 37°C

Zéro de l'appareil : blanc réactif

	BLANC	STANDARD		DOSAGE	Réactif R
300 uL	300 uL	300 uL		Eau distilée
3 uL	-	-		Standard
-	3 uL	-		Echantilon
-	-	3uL

> On mélange et on lit les absorbances (A) après 325 secondes d'incubation ; > Pour le calcule du taux de cholestérol, on suit la formule suivante : A dosage

A standard X n

4. L'UREE

L'urée est une substance azotée produite à partir des protéines alimentaires ou constitutives de l'organisme, l'urine contient en moyenne 18 a 22g d'urée.

Le taux d'urée dépend de la fonction rénale, des apports alimentaires en protéines, de l'état d'hydratation. L'augmentation de son taux dans le sang est généralement liée à une altération rénale.

- Les Valeurs normales d'urée

Homme : 3 à 7.5 mmol/l soit 0.18 à 0.45 g/l Femme : 2.5 à 7 mmol/l soit 0.15 à 0.42 g/l

4.1 PRINCIPE

L'urée est dosée en cinétique selon la réaction suivante :

Urée + H2O 2 NH3 + CO2

Les ions ammonium, en présence de salicylate et d'hypochlorite de sodium réagissent en formant un composé de couleur verte dont l'intensité est proportionnelle à la concentration en urée.

4.2 MATERIELS

· Tubes secs hépariné

· Centrifugeuse

· Spectrophotomètre

4.3 REACTIFS

· 1CC = 1 ml de réactif Urée R1 ;

· Sérum humain ;

· 1 CC de réactif de Glucose R2 ;

· 10 ul d'étalon standard ;

4.4 METHODE

> Le patient doit être à jeun avant de faire un prélèvement sanguin ;

> On prend trois tubes après centrifugation : le blanc, contient 1CC de réactif d'urée R1, 10 ul d'étalon+ 1CC de réactif urée R1 ;

> On prend 10 ul de sérum + 1CC de réactif + R1 ;

> Après un quart d'heure, on ajoute R2 dans les trois tubes b, e, s ;

> la couleur devient verte ;

> On ajuste le zéro du spectrophotomètre sur le blanc réactif ;

> Après un quart d'heure, on procède à la lecture par le spectrophotomètre ;

> Après la lecture des résultats par l'appareil, on termine par un rinçage à l'eau distillée.

5. TEST DE LA TOXOPLASMOSE

La toxoplasmose est une maladie très fréquente et habituellement bénigne pour tous sauf pour la femme enceinte, elle est due à un parasite, le "toxoplasma gondii".

La maladie acquise dans l'enfance confère une immunité et une protection définitives. Les traitements sont possibles pour la mère et pour l'enfant mais pas de vaccin à ce jour.

Il est important de prévenir la femme enceinte des principaux moyens de contamination pour les humains qui sont le chat, la viande et la terre...

Il faut savoir que le toxoplasme traverse d'autant plus facilement le placenta vers le foetus car des lésions induites sont d'autant moins intenses que la grossesse est avancée.

Les manifestations maternelles de la toxoplasmose sont surtout un syndrome grippal avec fièvre et asthénie et de nombreux ganglions (une symptomatologie souvent discrète). Dans 80 % des cas, la toxoplasmose maternelle n'est pas apparente.

5.1 MATERIELS

· Centrifugeuse

· Pipette pasteur

· Un agitateur

· Plaque de lecture

5.2 REACTIFS

· Réactif 1 de toxoplasmose (dilution 50/150 ul de réactif)

· Réactif 2 (1 goutte de dilution+ 1 goutte de réactif)

5.3 METHODE

> On à 450 ul de sérum humain + réactif toxoplasmose ;

> On prend une goutte de sérum + 1 goutte de réactif 2, et on les mélanges avec un agitateur spéciale ;

> On repose les deux gouttes sur une plaque en latex de lecture (voir photos 1) ;

Photos 1 : plaque de lecture
du test de la Toxoplasmose

> Après 8 minutes on procède a une lecture macroscopique de la plaque ;

> Si on remarque une agglutination, le test est positif, si il n'ya pas d'agglutination le test s'avère négatif. 6. LA RUBEOLE

La rubéole est une maladie virale difficile à reconnaître et qui de plus passe souvent inaperçue, car ses symptômes sont peu nombreux. Elle dure environ une semaine. Elle est bénigne chez l'enfant mais dangereuse chez la future mère et son bébé. L'incubation de la rubéole est de 15 jours avant l'arrivée des premiers symptômes. La contagion à une durée d'environ 8 jours suivant l'arrivée des boutons.

6.1 LE DANGER DE LA RUBEOLE POUR LA FUTURE MERE

Le danger, si danger il y a, ne vient pas des complications mais du risque de contamination pour une future maman et donc pour son foetus. Il s'agirait alors d'une rubéole congénitale.

Si la mère contracte l'infection pendant les 3 premiers mois de sa grossesse, le foetus pourrait alors développer des malformations graves, qu'elles soient neurologiques (déficience mentale), cardiaques, oculaires (cécité) ou auditives (surdité). On propose alors une interruption thérapeutique en début de grossesse, et savoir si la mère a déjà eu la rubéole.

6.2 MATERIELS

· Centrifugeuse

· Pipette pasteur

· Un agitateur

· Plaque de lecture

6.3 REACTIFS

· Réactif 1 de la rubéole (dilution 50/150 ul de réactif)

· Réactif 2 (1 goutte de dilution+ 1 goutte de réactif)

6.4 METHODE

· On à 450 ul de sérum + 150 ul de réactif de rubéole (dilution 50/150 ul de réactif) ;

· On prend 50 ul + réactif 2 (1 goutte de dilution+ 1 goutte de réactif) ;

· On met les deux gouttes sur la plaque de lecture (voir photos 2)

Photos 2 : plaque de lecture
du test de la Rubéole

7. GROUPAGE SANGUIN ABO - RHESUS D

La détermination du groupe sanguin consiste à rechercher la présence ou l'absence des antigènes A et B présents sur les globules rouges et les anticorps correspondants aux antigènes absents dans le sérum. La détermination du groupe dans le système Rhésus permet de distinguer les sujets dits Rhésus D positif des sujets Rhésus négatif.

Les systèmes ABO et Rhésus sont les plus importants à déterminer dans le cadre de transfusions sanguines afin de respecter les règles de compatibilité. En effet, l'injection de produit sanguin d'un donneur non compatible avec le groupe sanguin du receveur peut entraîner des accidents transfusionnels dramatiques. C'est pourquoi la détermination du groupe sanguin est si importante et nécessite au moins 2 déterminations avant la délivrance d'une carte.

7.1 LE SYSTEME ABO

Dans le système "ABO", les antigènes présents sur les globules rouges s'appellent des agglutinogènes. Chaque humain est caractérisé par la présence ou l'absence d'agglutinogènes sur ses globules rouges. Il y a deux agglutinogènes qui peuvent être présents ou absents sur nos globules rouges, l'agglutinogène A et l'agglutinogène B et leur présence détermine le type de groupe sanguin. Ainsi, selon que le globule rouge porte:

l'agglutinogène " A" on est du groupe sanguin "A " l'agglutinogène "B " on est du groupe sanguin "B" les agglutinogènes "A" et "B" on est du groupe sanguin "AB" aucun agglutinogène on est du groupe sanguin "O"

De plus, chaque individu possède dans son plasma des protéines de type globuline appelées agglutinines.

Ces agglutinines sont des protéines qui ont une complémentarité chimique spécifique aux

A spécifiques à l'agglutinogène

agglutinogènes. Aussi, nous pouvons retrouver des agglutinines

agglutinines B

spécifiques à l'agglutinogène B. Une agglutinine possède plusieurs sites complémentaires à l'agglutinogène de telle sorte que lorsque des agglutinines se retrouvent en présence de leurs agglutinogènes spécifiques, il se forme des amas de globules rouges attachés les uns aux autres. On appelle ce phénomè l'agglutination des globules rouges.

Lors d'une transfusion sanguine, il faut éviter à tout prix de faire agglutiner le sang du donneur. C'est pourquoi il faut toujours tenir compte des agglutinogènes du donneur par rapport aux agglutinines du receveur.

7.2 LE SYSTEME RH

Le système "RH

" est formé d'un groupe d'antigènes portés aussi à la surface des globules rouges. On dit

de quelqu'un qu'il est:

"RH+" s'il possède l'antigène " RH" sur ses globules rouges

Normalement, il n'y pas d'anticorps anti-Rh dans le sang sauf dans le cas d'une mère "

enfant "RH+ " ou dans le cas d'un individu "RH-" qui a reçu une transfusion de sang "

éviter de donner du sang porteur de l'antigène Rh à un individu qui ne l'a pas car l'organisme de ce dernier réagira en fabriquant des anticorps anti-Rh. Ces anticorps ne causent pas de dommages immédiatement, mais lors d'un deuxième contac

t avec l'antigène Rh, ils provoqueront une agglutination des globules rouges pouvant ainsi causer des dommages importants.

7.3 MATERIELS

· Plaque blanche

· Tubes secs citraté ou EDTA

· Pipette pasteur

7.4 REACTIFS

· Sérum anti A

· Sérum anti B

· Sérum anti AB

· Sérum anti D

7.5 TECHNIQUE

> On prend 6 tubes contenant le sang à analyser ;

> On dépose sur une plaque blanche, côte à côte, une goutte de sérum qui contient des agglutinines A (anti A) et une goutte de sérum qui contient des agglutinines B( anti B) ;

> On ajoute ensuite à chacune de ces gouttes une goutte de sang de l'échantillon à tester (voir photo 3) ;

Photo 3 : Test de détermination du système ABO avant agglutination

> On brasse légèrement la goutte et on attend quelques secondes ;

> On peut déjà remarquer si les globules rouges qui contiennent des agglutinogènes, formeront une réaction d'agglutination avec les agglutinines correspondantes et nous pourrons voir des agrégats de globules rouges sur la plaque. (voir photo 4)

Photo 4 : Test de détermination du système

ABO après agglutination

7.6 RESULTATS

o Les résultats sont résumés dans le tableau ci-dessous :

Numéro de l'échantillon	GROUPE SANGUIN
1	A+
2	AB+
3	B+
4	O+
5	A+
6	B+

- On aura alors :

o Un sang du groupe A qui présentera un agrégat avec les anti A et rien avec les anti B. o Un sang du groupe B qui présentera un agrégat avec les anti B et rien avec les anti A.

o Un sang du groupe AB qui présentera un agrégat avec les anti A et un agrégat avec les anti B.

o Un sang du groupe O qui ne présentera aucun agrégat avec les anti A de même qu'avec les anti B

Pendant la période passé aux services du C.H.U de SIDI BEL ABBES et au Laboratoire de La Polyclinique de SIDI DJILLALI, je me suis familiarisé avec un environnement technique et un ensemble de méthode d'analyse médical qui s'est avéré être très lucrative pour mon expérience professionnelle aussi bien en ce qui concerne le domaine technique que l'aspect humain. En plus, visiter de tous ces services m'a permis d'avoir une vision détaillé sur cette discipline en termes d'organisation, de gestion, pratique...

Le fait de travailler en équipe et utiliser des procédés et des méthodes existantes m'a permis de m'intégrer dans un groupe de travail et de voir en quoi consistait le travail d'un biologiste au sain d'un établissement sanitaire.

Adénofibrome : tumeur bénigne atteignant la glande mammaire.

Anatomopathologie : spécialité médicale technique, humaine et vétérinaire, qui se consacre à l'étude des lésions macroscopiques et microscopiques des tissus pathologiques prélevés sur un sujet vivant ou décédé.

Aigüe : se dit d'une douleur vive

Biopsie : enlever la totalité d'une lésion avec des berges en tissu sain, afin de faire simultanément le diagnostic anatomo-pathologique et le traitement radicale.

Bile : fluide jaune-verdâtre, basique (pH compris entre 7,6 et 8,6) qui favorise la digestion, plus spécifiquement celle des graisses.

Curetage : opération qui consiste à gratter la paroi d'une cavité, généralement pour éliminer des tissus anormaux ou pour un examen des tissus.

Conoïde : a la forme d'un cône.

EDTA : sigle de l'acide éthylène-diamine-tétra acétique. La formule chimique de cet acide diaminotétracarboxylique est _C10H16N2O8 de masse molaire 292,24264 g mol^-1.

Frottis : étalement, sur une lame de verre, d'un liquide ou de cellules prélevées par grattage, pour permettre leur examen au microscope après coloration appropriée

Hystérectomie : ablation chirurgicale de l'utérus qui est un organe musculaire situé dans le petit bassin, cet organe peut être à l'origine de nombreuses pathologies gynécologiques. Certaine d'entre elles sont traitées par l'hystérectomie

Hypophyse : Glande de petite taille située à la base du cerveau, dans une chambre osseuse à sa taille, appelée la selle turcique.

Lipome : Tumeur bénigne du tissu gras ou adipeux qui se présente comme une tuméfaction souple ou molle située sous la peau.

Monoclonale : en génétique, dérivé d'un seul et même clone cellulaire.

Néphrologie : spécialité médicale visant à prévenir, diagnostiquer et soigner les maladies des reins.

Paraffine : substance solide, blanche, tirée des schistes bitumineux chim : nom génétique des carbures d'hydrogène saturés de formule CnH2n+2.

Pleural : qui appartient à la plèvre.

Pupille : orifice de 3 ou 4 mm, situé au centre de l'iris et qui permet, suivant la contraction ou la dilatation de son diamètre de quantifier la lumière pénétrant dans l'oeil.

Rectum : la portion terminale du gros intestin (côlon), juste avant que celui-ci ne débouche à l'extérieur par l'anus.

Septicémie : désigne une infection grave de l'organisme se caractérisant par la présence dans le sang de germes pathogènes (susceptibles de provoquer une maladie).

TGO : Transaminases : ASAT = Aspartate Amino

TGP : Transaminases : ALAT = Alanine Amino Transférase

Uretère : long conduit bilatéral (il en existe 2) transportant l'urine excrétée par les reins vers la vessie où l'urine s'accumule en attendant d'être expulsée vers l'extérieur par l'urètre.

.

LAROUSSE TROIS VOLUMES EN COULEURS ; 1988, LAROUSSE, éd. 1990, France, p.59, 721, 370.

MARSAN, 2001, lésion bénignes-les fibroadénomes, In/Diebold J ; cytopathologie mammaire par ponction, éd. ELSEVIER. Paris, P.91.

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