Analyses medicales aux services du CHU de Sidi bel Abbes et a la polyclinique de Sidi Djillali

3.1 PRODUITS

· Eau distillé

· Echantillon requis : sérum ou plasma recueilli sur héparine

· Réactif : R se compose de :

Tampon pipe, PH 6.7 50 mmol/L

Phénol 24 mmol/L

Cholate de sodium 05 mmol/L

Amino-4-antipyrine 0.5 mmol/L

Cholestérol estérase = 180 U/L Cholestérol oxydase = 200 U/L Peroxydase = 1000 U/L

· Réactif standard se compose de : Cholestérol bovin 2 g/L

3.2 TECHNIQUE

> L'échantillon requis est le sérum ou plasma recueilli sur héparine ou EDTA de patient à jeun ; > Dans la mesure du cholestérol, il y'a deux réactifs : le réactif R et le réactif Standard.

> Le réactif R peut être utilisé sur la plupart des automates, semi automate et en méthode manuelle.

Sa longueur d'onde est de 500 nm.

Température : 37°C

Zéro de l'appareil : blanc réactif

	BLANC	STANDARD		DOSAGE	Réactif R
300 uL	300 uL	300 uL		Eau distilée
3 uL	-	-		Standard
-	3 uL	-		Echantilon
-	-	3uL

> On mélange et on lit les absorbances (A) après 325 secondes d'incubation ; > Pour le calcule du taux de cholestérol, on suit la formule suivante : A dosage

A standard X n

4. L'UREE

L'urée est une substance azotée produite à partir des protéines alimentaires ou constitutives de l'organisme, l'urine contient en moyenne 18 a 22g d'urée.

Le taux d'urée dépend de la fonction rénale, des apports alimentaires en protéines, de l'état d'hydratation. L'augmentation de son taux dans le sang est généralement liée à une altération rénale.

- Les Valeurs normales d'urée

Homme : 3 à 7.5 mmol/l soit 0.18 à 0.45 g/l Femme : 2.5 à 7 mmol/l soit 0.15 à 0.42 g/l

4.1 PRINCIPE

L'urée est dosée en cinétique selon la réaction suivante :

Urée + H2O 2 NH3 + CO2

Les ions ammonium, en présence de salicylate et d'hypochlorite de sodium réagissent en formant un composé de couleur verte dont l'intensité est proportionnelle à la concentration en urée.

4.2 MATERIELS

· Tubes secs hépariné

· Centrifugeuse

· Spectrophotomètre

4.3 REACTIFS

· 1CC = 1 ml de réactif Urée R1 ;

· Sérum humain ;

· 1 CC de réactif de Glucose R2 ;

· 10 ul d'étalon standard ;

4.4 METHODE

> Le patient doit être à jeun avant de faire un prélèvement sanguin ;

> On prend trois tubes après centrifugation : le blanc, contient 1CC de réactif d'urée R1, 10 ul d'étalon+ 1CC de réactif urée R1 ;

> On prend 10 ul de sérum + 1CC de réactif + R1 ;

> Après un quart d'heure, on ajoute R2 dans les trois tubes b, e, s ;

> la couleur devient verte ;

> On ajuste le zéro du spectrophotomètre sur le blanc réactif ;

> Après un quart d'heure, on procède à la lecture par le spectrophotomètre ;

> Après la lecture des résultats par l'appareil, on termine par un rinçage à l'eau distillée.