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Hépatite virale B: intérêt de l'utilisation des échantillons de sang séché dans l'extraction de l'ADN viral

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par Séraphin Twarigimana
Université Marien Ngouabi faculté des sciences de la santé - doctorat en médecine 2008
  

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SOMMAIRE

INTRODUCTION..........................................................................1

I. GENERALITES..........................................................................4

1. Généralités sur l'infection à VHB.................................................. 5

2. Génotypes du VHB....................................................................32

II. MATERIELS ET METHODES.......................................................40

1. Cadre de l'étude.......................................................................41

2. Types et Période de l'étude...........................................................43

3. Méthodes...............................................................................43

III. RESULTATS.............................................................................50

1. Fréquences..............................................................................51

2. Paramètres épidémiologiques........................................................51

3. Paramètres biologiques...............................................................53

4. PCR du VHB...........................................................................58

IV. DISCUSSION............................................................................62

1. Analyse de la Méthodologie..........................................................63

2. Fréquences..............................................................................64

3. Structure de la population..............................................................65

4. PCR DU VHB..............................................................................66

C0NCLUSION ET PERSPECTIVES........................................................70

RESUME.......................................................................................72

ABSTRACT...................................................................................74

REFERENCES................................................................................76

ANNEXES............................................................................................................................81

INTRODUCTION

Les hépatites virales sont des infections systémiques atteignant préférentiellement le foie et entrainant des altérations hépatocytaires, des lésions inflammatoires et une élévation des transaminases sériques. Outre l'Epstein Barr Virus, le cytomégalovirus et certains arbovirus qui n'atteignent que secondairement ou occasionnellement le foie, six virus répondent à cette définition : le Virus de l'Hépatite A (VHA), Virus de l'Hépatite B (VHB), Virus de l'Hépatite C (VHC), Virus de l'Hépatite Delta (VHD), Virus de l'Hépatite E (VHE) et le TTV (Transfusion Transmitted Virus) [1].

Parmi ces virus hépatotropes, seuls le VHB, le VHC et le VHD associé au VHB peuvent entrainer une hépatite virale chronique, pouvant se compliquer de cirrhose et de Carcinome Hépatocellulaire (CHC).

Dans le monde, 2 milliards de personnes sont infectées par le VHB [2] et environ 360 millions de personnes sont porteuses chroniques. Selon un rapport de l'Organisation Mondiale de la Santé (OMS) paru en 2000 environ 520 000 décès chaque année seraient dus à une hépatite à VHB [2]. Il s'agit d'un problème mondial de santé publique. Au Congo, la prévalence de l'hépatite B est différente selon les études. Elle varie entre 6,5 et 15% [3, 4, 5].

Dans les pays en voie de développement, notamment le Congo où les structures de biologie moléculaire sont rares, seule la sérologie est utilisée, notamment la recherche de l'Ag HBs qui permet de détecter le virus mais sans préjuger de sa réplication. La détection de l'ADN viral par la réaction de polymérisation en chaine (PCR) représente un important progrès technique, permettant de mettre en évidence la présence de l'acide nucléique viral dans le sérum des sujets infectés par le virus de l'hépatite B, même lorsque celui- ci est en très faible quantité.

Certains auteurs ont signalé que l'aptitude à détecter l'ADN du VHB dans le sérum a une valeur pronostique en ce qui concerne l'évolution des infections aiguës et chroniques dues au VHB [6, 7]. La méthodologie peut permettre la détection de l'ADN du VHB après clairance de l'AgHBs [8] ou la détection du VHB en l'absence de marqueur sérologique [9]. Cependant, on n'a pas encore établi de relation entre les marqueurs sérologiques et les taux d'ADN du VHB.

L'efficacité du traitement antiviral utilisé pour les patients porteurs du VHB peut aussi être évaluée grâce aux marqueurs sérologiques ou par une mesure de la fonction enzymatique du foie. Néanmoins, le dosage quantitatif de l'ADN viral du VHB dans le sérum ou le plasma est considéré comme la mesure la plus directe et la plus fiable de la réplication virale [10]. On a montré qu'une chute rapide et persistante des taux d'ADN du VHB chez des patients recevant un traitement à base d'interféron alpha, de lamivudine ou de Ganciclovir® est un facteur prédictif d'évolution favorable sous traitement [11].

La surveillance des taux d'ADN du VHB permet de prédire le développement d'une résistance à la lamivudine. Par conséquent, un test quantitatif offrant un dosage de l'ADN du VHB est un outil utile que l'on peut utiliser en association avec d'autres marqueurs sérologiques lors de la prise en charge d'une infection par le VHB.

Le cout élevé de l'acheminement des échantillons vers les pays qui disposent des structures de biologie moléculaire, est l'un des facteurs qui limitent le diagnostic virologique et par conséquent le suivi des malades ayant une hépatite chronique B au Congo.

Le but de cette présente étude est d'évaluer l'utilisation des échantillons de sang séché sur les papiers buvards en vue d'une élution de l'ADN viral, afin de réaliser l'amplification des acides nucléiques du Virus de l'Hépatite B.

Ainsi, les objectifs ont été de:

Ø Evaluer les avantages de l'utilisation des échantillons de plasma et de sang total séchés sur papier buvard ;

Ø Mettre au point l'acheminement de prélèvements biologiques de patients pour rechercher l'ADN viral par PCR.

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