Memoire Online - Contribution à l'étude de l'Allo immunisation post- transfusionnelle chez les patients transfusés à Cotonou Bénin

I.1- Définition sur l'allo immunisation transfusionnelle ....................................3

I.2- Systèmes immunogènes et immunoglobulines...........................................3

I.2.1- Système immunogène ....................................................................3

I.2.2- Immunoglobulines.........................................................................5

I.3- Différentes types d'allo immunisations...................................................8

I.3.1- Allo immunisation transfusionnelle ....................................................8

I.3.1-1 : Causes de l'allo immunisation........................................................9

a- Immunogénicité de l'antigène du donneur.................................................9

b- Nombre et rythme des stimulations.......................................................10

c- Phénotype érythrocytaire du receveur.....................................................10

d- Sexe du receveur ............................................................................10

e- Etat immunitaire du receveur ..............................................................10

f- Déterminisme génétique de la réponse immunitaire....................................11

I.3.1-2 : Conséquences de l'allo immunisation transfusionnelle.........................12

a- Conséquences immédiates..................................................................12

b- Conséquences retardées.....................................................................14

I.3.1-3 : Prévention de l'allo immunisation transfusionnelle..............................14

a- Phénotypage des donneurs et receveurs...................................................14

b- Règles de la transfusion.....................................................................15

c- Test de compatibilité au laboratoire........................................................17

II.1- Cadre du travail ...........................................................................19

II.2- Matériel de travail........................................................................19

II.2.1- Matériel standard........................................................................19

II.2.1-1 : Equipement ..........................................................................19

II.2.1-2 : Petit matériel ........................................................................20

II.2.1-3 : Matériel consommable..............................................................20

II.2.2- Réactifs utilisés.........................................................................21

II.2.2-1 : Test de compatibilité en Coombs-Liss............................................21

II.2.2-2 : Recherche d'agglutinines irrégulières ............................................21

a- Réactifs cellulaires .........................................................................21

b- Matériel spécifique à la RAI ..............................................................22

II.3-Méthodologie...............................................................................22

II.3.1- Echantillonnage ........................................................................23

II.3.1-1 : Test de compatibilité au laboratoire...............................................23

II.3.1-2 : Recherche d'agglutinines irrégulières ............................................23

a- Sélection des polytransfusés du SMAS..................................................23

b- Sélection des enfants transfusés de la pédiatrie.........................................24

c- Prélèvement et conservation ..............................................................24

II.3.2- Technique ...............................................................................25

II.3.2-1 : Réalisation du test de compatibilité...............................................25

a- Principes.....................................................................................25

b- Mode opératoire.............................................................................25

II.3.2-2 : Recherche d'agglutinines irrégulières ............................................27

a- Principes du Micro Typing System (MTS).............................................27

b- Dépistage des agglutinines irrégulières..................................................28

c- Identification des anticorps dépistés......................................................28

d- Evaluation de la réaction...................................................................29

III.1- Test de compatibilité.....................................................................30

III.1.1- Caractéristiques de la population étudiée...........................................30

III.1.2- Etude de la positivité..................................................................31

III.1.3- Résultats du dépistage et de l'identification des anticorps impliqués dans les incompatibilités transfusionnelles ............................................................35

III.2- Résultats de la RAI effectuée chez les patients polytransfusés du SMAS et les enfants transfusés de la pédiatrie ..............................................................37

III.2.1- Caractéristiques de la population.....................................................37

III.2.2- Répartition de la positivité des réactions d'allo immunisation..................40

IV.1- Analyses des résultats des tests de compatibilité effectués ........................45

IV.1.1- Caractéristique de la population ....................................................45

IV.1.2- Etude des résultats des test de compatibilité effectués ...........................45

IV.2- Etude des résultats des travaux effectués chez les polytransfusés et les enfants de la pédiatrie....................................................................................47

IV.2.1- Caractéristiques de la population....................................................47

IV.2.2- Etude des résultats de dépistage d'allo anticorps .................................48

IV.3- Etude des résultats de l'identification des anticorps dépistés......................48

IV.4- Difficultés rencontrées...................................................................50

CONSLUSION ...................................................................................51

SUGGESTIONS................................................................................52

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES..................................................53

ANNEXES.......................................................................................59

LISTE DES SIGLES ET ABREVIATIONS

SDTS Atl-Lit : Service Départemental de Transfusion Sanguine Atlantique Littoral

RESUME

La transfusion sanguine au Bénin est réalisée uniquement dans un contexte de compatibilité ABO et Rh D. Dès lors, chaque transfusion faisait courir aux patients des risques d'immunisation contre les autres systèmes antigéniques érythrocytaires. D'où la nécessité d'évaluer la fréquence d'allo immunisation post-transfusionnelle antiérythrocytaire développée par les patients transfusés en identifiant les systèmes antigéniques impliqués.

Pour ce faire, nous avons compatibilisé en milieu Coombs-LISS 1134 poches de sang cédées dans les BDS du SDTS Atl/Lit et du CNHU-HKM et, réalisé la RAI également en milieu Coombs-LISS sur 210 sérums de patients transfusés dont 101 du SMAS, 97 des services de pédiatrie et 12 des tests de compatibilité positifs avec autotest négatif.

Les résultats ont montré que 7,62% des sujets ont été immunisés vis-à-vis des antigènes Rh, Kell, Kidd, Lewis et MNSs et que des cessions de poches de sang incompatibles sont faites avec une fréquence de 2,65%.

Cette étude tout en confirmant l'immunisation post-transfusionnelle antiérythrocytaire chez ces patients a permis d'entrevoir d'autres stratégies transfusionnelles afin de réduire le risque immunologique.

Mots clés : Patients transfusés ; allo immunisation ; test de compatibilité ; RAI ; systèmes érythrocytaires

SUMMARY

Blood transfusion is done in Benin only under ABO and Rh D blood types compatibility. Therefore each blood transfusion puts patients at the risk of immunization against other erythrocyte antigenic systems. It then becomes necessary to assess the frequency of other anti-erythrocyte immunization developed by patients in the aftermath of a blood transfusion, by identifying antigenic systems involved.

For this purpose, we have accessed, in Coombs-LISS environment, 1134 blood bags gave at the blood banks of the Blood Transfusion Centers of Atl/Lit and CNHU-HKM, and have performed the unexpected antibodies searching, also in Coombs-LISS environment, on 210 serums for patients who have received blood transfusion to include 101 of SMAS, 97 of paediatrics and 12 of positive compatibility tests with negative self-testing.

Results show that 7.62% of the subjects have been immunized against Rh, Kell, Kidd, Lewis and MNSs antigens, and that such incompatible blood bags were given at a frequency of 2.65%.

This study while confirming the anti-erythrocyte immunization after blood transfusion on those patients, led to glimpse other blood transfusion ways to reduce immunological risks.

Keys words: Transfused patients; allo immunization; compatibility test; unexpected antibodies searching; erythrocyte systems.

INTRODUCTION

La transfusion sanguine ou hémothérapie a pris son essor à partir du XXè siècle par la découverte des groupes sanguins ABO par Karl Landsteiner et celle des autres systèmes de groupes sanguins et tissulaires par différents auteurs. Aujourd'hui, la transfusion sanguine est une discipline médicale particulière, carrefour de la quasi totalité des spécialités de la médecine moderne. En dépit des multiples travaux de recherche effectués ces cinquante dernières années, il n'est pas encore possible de fabriquer des produits de substitution identiques aux produits sanguins labiles utilisés aujourd'hui. C'est dire la difficulté de cette thématique.

Bien qu'étant une thérapie efficace, elle n'est utilisée qu'en dernier recours, car elle peut être dangereuse. Elle ne peut être efficace que si elle est utilisée en cas de nécessité.

L'objectif de la transfusion sanguine est d'assurer au malade, une thérapie de substitution compatible, efficace, avec un maximum de sécurité aux plans de l'immunisation du malade et de la transmission des maladies infectieuses. Mais ce maximum de sécurité souvent souhaité et recherché est-il toujours atteint du fait de la complexité des constituants du sang ?

Au Bénin, comme dans beaucoup de pays africains, la transfusion sanguine est réalisée uniquement dans un contexte de compatibilité ABO et Rh D sans rechercher la compatibilité dans les autres systèmes érythrocytaires tels que les systèmes Rh, Kell, Kidd, Duffy, Lewis et MNSs, dont les antigènes sont tout aussi immunogènes. Une telle pratique comporte des risques d'allo immunisation, lesquels risques peuvent engendrer des complications cliniques chez les polytransfusés et compromettre l'avenir obstétrical des sujets de sexe féminin.

Afin de contribuer à l'amélioration de la sécurité immunologique des transfusions au Bénin, nous avons choisi de travailler sur le thème : « CONTRIBUTION A L'ETUDE DE L'ALLO IMMUNISATION POST-TRANSFUSIONNELLE ANTI ERYTHROCYTAIRE CHEZ LES PATIENTS TRANSFUSES A COTONOU ».

v Déterminer les risques que l'on fait courir aux malades en pratiquant uniquement le contrôle ultime au lit du malade.

v Evaluer la fréquence de l'allo immunisation transfusionnelle chez les polytransfusés et les enfants de deux à dix ans bénéficiaires d'une hémothérapie.

v Proposer de nouvelles stratégies thérapeutiques en vue d'assurer chez les patients, une meilleure sécurité transfusionnelle sur le plan immunologique.

Dans la première partie de ce travail, nous ferons une synthèse de la littérature sur l'allo immunisation. Dans la deuxième partie, nous présenterons le cadre de travail, le matériel et la méthode de recherche utilisée. Puis suivront la présentation des résultats et leurs commentaires. Nous finirons par la conclusion et nos suggestions.

I.1- Définition de l'allo immunisation transfusionnelle

L'allo immunisation transfusionnelle se définit comme la formation active in vivo d'anticorps irréguliers (de type IgM et/ou IgG plus rarement des IgA) chez un individu. Cette production d'anticorps immuns résulte de l'introduction volontaire ou accidentelle d'antigènes de groupes sanguins et tissulaires dans l'organisme d'individus de même espèce. L'allo immunisation anti-érythrocytaire post-transfusionnelle est donc la réponse immune développée par les individus transfusés avec des globules rouges portant des spécificités antigéniques différentes de celles retrouvées sur leurs hématies.

Cette définition exclut la réponse à l'environnement (hétéro immunisation) qui explique la formation des anticorps de groupes sanguins appelés « Anticorps naturels ».Lesquels résultent de la réponse aux antigènes glycoprotéïques des membranes des bactéries saprophytes intestinales

Elle ne s'observe chez l'homme que dans deux situations : les grossesses et les transfusions [32,46].

I.2- Systèmes immunogènes et Immunoglobulines

I.2.1- Systèmes immunogènes

Les antigènes sont des substances capables d'induire une réponse immune et de se lier spécifiquement à des composants de la réponse immunitaire : comme exemple, nous avons les récepteurs de la surface membranaire des lymphocytes et les anticorps. L'immunogénicité de l'antigène traduit sa capacité à induire une réponse immunitaire spécifique. Ainsi, tous les antigènes ne sont pas immunogènes. [13]

L'haptène ou épitope de faible poids moléculaire (PM) est assimilé au déterminant antigénique. Il est la structure contre laquelle est dirigée la réponse immunitaire. L'haptène n'est pas immunogénique par lui-même lorsque, isolé, on l'injecte à un animal.

Le porteur ou "carrier " encore appelé molécule porteuse, est de poids moléculaire élevé et confère à l'antigène son pouvoir immunogène.

Dans le règne animal, les antigènes sont des produits géniques de nature protéique, glucidique ou lipidique. En tant que tel, on les rencontre sur la membrane de toutes les cellules de l'organisme. Ceux observés sur les cellules sanguines (hématies, leucocytes, thrombocytes) sont des antigènes de groupes sanguins regroupés en une trentaine de groupes sanguins. [28,8,20,40]

Les systèmes de groupes sanguins les plus immunogènes en dehors de ABO sont les systèmes : Rh, Kell Duffy, Kidd et MNSs.

Ces systèmes ont en commun le fait que l'absence d'un antigène n'entraîne pas automatiquement la présence d'un anticorps naturel. Par contre, s'il y a introduction de cellules porteuses de l'antigène manquant (soit lors des transfusions, soit par passage d'hématies foetales dans la circulation maternelle), un anticorps peut apparaître.

Les antigènes des systèmes de groupes sanguins immunogènes sont responsables des phénomènes d'allo immunisation transfusionnelle ou foeto-maternelle. Les antigènes en cause sont par ordre décroissant d'immunogénicité l'antigène Rh D, l'antigène K, les antigènes c et E du système Rh, l'antigène Fy^a, l'antigène Jk^a et assez loin derrière eux, les antigènes S et s.

La structure biochimique de certains de ces antigènes est mieux connue de nos jours.

Les antigènes Rh font partie intégrante de la membrane des hématies, Il a pu être démontré que l'antigène D se trouve sur un polypeptide de 30 Kda

L'usage des anticorps monoclonaux humains anti-K (K1) préparés in vitro à partir de lymphocytes infestés par le virus d'Epstein Barr, a permis comme dans le cas du polypeptide Rh, de définir la structure biochimique qui porte l'antigène Kell (K1). Il s'agit d'une glycoprotéine de 93 Kda branchée sur le cytosquelette de la membrane et traversant cette dernière.

La structure biochimique des antigènes MNSs est très bien précise, ils sont portés par des glycoprotéines de la membrane des hématies, et il est d'ailleurs intéressant de constater que deux types de protéines contiennent ces antigènes : la glycophorine ou glycoprotéine á pour M et N et une autre glycoprotéine, la glycoprotéine â pour S et s. [36]

Figure n°1 : Représentation schématique de la structure des antigènes de groupes sanguins de la membrane érythrocytaire. [36]

I.2.2- Immunoglobulines

Les anticorps encore appelés immunoglobulines sont des glycoprotéines solubles dans les liquides biologiques et présentes sur la membrane des lymphocytes B comme récepteur pour l'antigène (B Cell Receptor).Dans ces liquides, les immunoglobulines peuvent exprimer leur fonction après combinaison avec l'antigène qui leur correspond. Les immunoglobulines secrétées sont le support de la fonction anticorps qui caractérise la réponse immunitaire spécifique humorale. Les immunoglobulines sont exclusivement synthétisées par les cellules lymphocytaires de la lignée B. [28]

Deux types de fonctions déterminent l'activité anticorps : la reconnaissance spécifique d'un déterminant antigénique (ou épitope) et l'activation des systèmes qui agissent sur les cellules qui expriment cet antigène à leur surface. Deux régions distinctes de la molécule que l'on peut séparer par certaines enzymes comme la papaïne ou la trypsine assurent séparément ces fonctions. Il existe donc une dualité fonctionnelle des anticorps.

La partie d'une immunoglobuline impliquée dans la reconnaissance des antigènes est appelée Fab (Fragment antigen binding) ; elle a pour caractéristique essentielle de présenter une grande diversité, adaptée à l'hétérogénéité des antigènes qu'elle reconnaît.

Par contre, la partie assurant l'activation des systèmes effecteurs a une structure plutôt conservée. Cette partie est appelée région Fc : Fragment cristallisable. (Voir figure N°2 pour la structure d'une immunoglobuline) [18;28;31].

Bien que possédant une structure de base commune, les immunoglobulines sont extrêmement hétérogènes. En effet, leurs caractéristiques physico-chimiques et leurs propriétés biologiques ont permis d'en distinguer cinq classes. Ce sont par ordre de concentration décroissante dans le sérum IgG (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) IgM, IgA (IgA1, IgA2) IgD et IgE. [2]

Les anticorps impliqués dans les immunisations transfusionnelles sont essentiellement les IgM et les IgG. Suivant leur mode d'apparition nous avons les anticorps naturels à dominance IgM et les anticorps immuns à dominance IgG. [36]

Tableau I : Tableau comparatif des principaux caractères biochimiques et sérologiques des anticorps IgG et IgM [51, 1,2]

CLASSE d'Ig	IgG	IgM
Caractéristiques structurales	Monomère (valence 2)	Pentamère (valence 10)
Caractéristiques structurales	1(2H gamma+2L)	5(2H-mu + 2L) + pièce de jonction
Sous-classes et variations	Nombreuses sous classes IgG (Ig1-2-3-4)	Néant
PM	90000	150000
Mode d'apparition	Anticorps « immuns »	Anticorps « naturels »
Affinité et spécificité	Forte	Faible
Demi vie en jours (stabilité)	5	21
Optimum thermique	37°C	(#177;grande amplitude) de 0°C à 20°C
Principales fonctions propres (hormis la formation de complexes Ag-Ac).	Précipitation neutralisation	agglutination
Pouvoir sérologique	Anticorps non agglutinants en eau physiologique	Anticorps agglutinants en eau physiologique
Agglutination en milieu albumineux	Oui	Oui
Enzymes protéolytiques	Favorables	Inefficaces
Capacité à activer le système du complément	+/++ (voie classique) variations selon sous-classes	+++ (voie classique)
Capacité à activer les cellules via le récepteur Fc	+/+++ (phagocytose)	-/+
Passage barrière placentaire	oui	non

I.3- Différents types d'allo immunisation

I.3.1- Allo immunisation transfusionnelle

Classiquement, l'allo immunisation transfusionnelle se manifeste par la synthèse d'anticorps dirigés contre les antigènes portés par les hématies, les leucocytes, les thrombocytes, et quelques fois, certains déterminants des immunoglobulines.

Ainsi, du fait du polymorphisme de ces antigènes, toute transfusion de sang est forcément incompatible, exceptée celle pratiquée entre deux (2) jumeaux monozygotes et celle faite en autotransfusion. [33]

I.3.1.1- Causes de l'allo immunisation

L'allo immunisation est globale : elle concerne aussi bien les antigènes HLA (Human Leucocyte Antigen) que les multiples autres antigènes de groupes sanguins érythrocytaires.

En effet, l'analyse des anticorps dans le sérum des polytransfusés démontre que les anticorps anti-HLA sont les plus fréquents et les premiers à apparaître.

L'apparition des anticorps immuns dépend de plusieurs facteurs dont l'immunogénicité de l'antigène du donneur, le nombre et le rythme des transfusions, le phénotype érythrocytaire du receveur, l'état immunitaire du receveur, le sexe du receveur, le déterminisme génétique de la réponse immunitaire.

Elle exprime la capacité d'un antigène à induire une réponse immunitaire. L'immunisation résulte donc de l'expressivité de l'antigène et du pouvoir antigénique. Ce pouvoir est donné par la formule suivante :

Il est admis que le risque d'immunisation croît proportionnellement au nombre et au rythme des stimulations. L'allo immunisation transfusionnelle est « tous azimuts » et s'étend à de nombreux systèmes de groupes sanguins. [34]

De toute évidence, l'allo immunisation ne peut se faire contre les antigènes communs au donneur et au receveur. Cependant, les receveurs de phénotype partiellement ou totalement silencieux, et ceux n'ayant pas d'antigènes publics représentent une situation particulièrement redoutable. L'allo immunisation peut alors « exploser » et aboutir à un blocage transfusionnel. [14 ; 16 ; 46]

Il a été constaté en France par SALMON, à propos de 2909 polytransfusés, que la femme s'immunise deux fois plus souvent que l'homme [32]. Cette constatation a été faite au Bénin par COMPAORE FELICITE dans son mémoire de fin de cycle [25]

Certaines maladies prédisposent le sujet receveur à l'allo immunisation par la transfusion. Nous citons les cirrhoses ; la maladie de HODGKIN ; les aplasies médullaires ; les leucémies lymphoïdes chroniques et aiguës ; la drépanocytose. [32]

L'immunisation ou non d'un sujet contre un antigène résulte du déterminisme génétique de la réponse immunitaire. En effet, il existe un gène de réponse immune (Ir) situé dans la région D du système HLA (HLA-D) pouvant coder pour des molécules de classe II. Ces molécules présentes sur les macrophages, les lymphocytes B et les lymphocytes T helper activés sont indispensables à la coopération cellulaire en vue de la synthèse d'anticorps. Le gène dominant Ir confère ainsi au sujet le caractère de répondeur (R) et son allèle récessif, le caractère de non répondeur (NR). [14 ;16 ;46]

L'allo immunisation ne s'installe pas immédiatement après une transfusion incompatible. En effet, un temps de latence est nécessaire à la stimulation du système immunitaire.

Les allo anticorps deviennent détectables dans le sérum entre le huitième (8^ième) et le quinzième (14^ième) jours après la transfusion incompatible.

I.3.1.2- Conséquences de l'allo immunisation transfusionnelle

La mise en présence d'un antigène et de l'anticorps correspondant aboutit immédiatement à la fixation du premier sur le second, et cette combinaison amène des modifications à la surface de la membrane érythrocytaire qui porte l'antigène. Ceci peut entraîner des conséquences plus ou moins graves chez le patient transfusé. [33 ;36]

Tous les degrés de gravité peuvent être observés, depuis l'accident hémolytique immédiat, compliqué d'insuffisance rénale jusqu'à la transfusion sans bénéfice. [16 ; 27, 46]

Elle est la conséquence de la fixation de l'anticorps sur le globule rouge et de l'activation du complément. Elle concerne les anticorps de nature IgM, IgG1, IgG3.La fixation de l'anticorps entraîne dans un premier temps l'activation séquentielle du complément jusqu'au C_3, puis dans un second temps est mis en jeu le complexe d'attaque membranaire (C5b-6,7,8,9). Elle correspond essentiellement à une hémolyse intra vasculaire dont les principales conséquences cliniques sont :

* Des perturbations vasomotrices allant de l'hypertension à l'hypotension voire au collapsus cardiovasculaire.

* Des troubles de la coagulation essentiellement de type coagulation intra vasculaire localisée ou disséminée pouvant entraîner un état hémorragique.

*Des troubles de la fonction rénale, à type d'insuffisance rénale, entraînant une oligurie, voire une anurie. Cette insuffisance peut être transitoire ou définitive.

* Des troubles respiratoires : bien que non classiquement documentés, ils peuvent aller jusqu'au syndrome de détresse respiratoire aiguë.

La gravité de ces manifestations cliniques associées peut aboutir au décès du patient. [26 ; 5 ; 33 ; 16]

En dehors des formes graves citées ci-dessus, nous avons les formes mineures qui constituent des signes d'alarme pour les transfusions ultérieures et se manifestent par un syndrome de frissons hyperthermie, un ictère du lendemain

Elle est induite par la fixation de l'anticorps sur l'hématie sans activation (ou activation limitée) du complément. Les IgG, fixées sur les antigènes de groupes sanguins présents sur la membrane des hématies, interagissent avec les récepteurs de leur fragment Fc présents sur les cellules du système des phagocytes mononucléés au niveau de la rate, entraînant ainsi la phagocytose des hématies et leur lyse. On observe alors un ictère post transfusionnel : le malade a cliniquement bien toléré sa transfusion mais, le lendemain, il apparaît un subictère ou un ictère franc avec parfois un retentissement rénal. L'ictère peut être retardé et n'apparaît qu'au cinquième ou sixième jour. [5 ; 33]

La lyse frustre et précoce des hématies transfusées ne s'accompagne d'aucune symptomatologie clinique immédiate ou retardée. La non amélioration du taux d'hémoglobine après la transfusion confirme souvent l'échec transfusionnel. [33]

Une allo immunisation transfusionnelle peut se révéler des années après une transfusion immunisante et compromettre l'avenir transfusionnel et surtout obstétrical chez la femme.

En effet, lors d'une nouvelle transfusion, l'immunisation antérieure peut soit provoquer un danger hémolytique direct (si les anticorps sont présents à un titre suffisant), soit plus souvent provoquer une hémolyse retardée (si les anticorps sont présents à un titre faible ou même non décelable sérologiquement lors de la nouvelle transfusion).

Chez la femme ayant été transfusée même une seule fois, il y a lieu de s'inquiéter pour sa descendance, l'apparition de la Maladie Hémolytique Néo Natale (MHNN). [2]

I.3.1.3- Prévention de l'allo immunisation transfusionnelle

La prévention de l'allo immunisation transfusionnelle passe par le phénotypage des receveurs et des donneurs, le respect des règles de compatibilité, le test de compatibilité au laboratoire, la rationalisation de l'utilisation des produits sanguins.

Chez la femme ou la petite fille, le groupage Rh complet et Kell devrait permettre de sélectionner les donneurs. Cela éviterait les futures allo immunisations aux antigènes c, E et Kell. [35]

Le phénotypage plus étendu dans les systèmes de groupes sanguins érythrocytaires, Rh complet, Kell, Duffy, Kidd, Lewis et MNSs sera effectué chez des malades susceptibles de polytransfusion atteints d'hémopathies malignes, de thalassémies, de drépanocytose.... qui sont appelés à recevoir des transfusions répétées. Ceci permettra d'éviter les premières stimulations par des antigènes fortement immunogènes et peut d'autant retarder le début de l'allo immunisation et la formation ultérieure de ces mélanges complexes d'anticorps multiples qui rendent difficile la sélection des donneurs compatibles. [32]

En général, en transfusion de globules rouges (GR) ce sont les antigènes apportés par les GR des donneurs qui peuvent entrer en conflit avec les anticorps présents ou générés par les receveurs. [26 ; 7]

Phénotype Rh du patient	Fréquence dans la population béninoise	Concentré de globules rouges à transfuser
D+C+E-c+e+ (R1r)	13 ,27%	Tout CGR phénotypé sauf E⁺
D+C+E-c-e+ (R₁R₁)	1,28 %	Tout CGR phénotypé sauf E⁺et c⁺
D-C-E-c+e+ (rr)	8,93 %	Tout CGR phénotypé sauf D⁺,C⁺ etE⁺
D+C+E+c+e+ (R₁R₂)	1,28 %	Tout CGR phénotypé
D+C-E+c+e+ (R₂r)	13,27 %	Tout CGR phénotypé sauf C⁺
D+C-E-c-e+ (R₀r)	56.12%	Tout CGR phénotypé sauf C⁺ et E⁺
D+C-E-c+e- (R₂R₂)	0.77%	Tout CGR phénotypé sauf C⁺ et e⁺
D-C+E-c+e+ (r'r)	4.85%	Tout CGR phénotypé sauf D⁺ et E⁺
D-C-E+c+e+ (r "r)	0.26%	Tout CGR phénotypé sauf D⁺ et C⁺

Encore appelé cross match, le test de compatibilité au laboratoire, est un examen immuno-hématologique qui sert à vérifier la compatibilité immunologique entre le sérum du malade et les globules à transfuser.

Son délai maximal de validité est de 72 heures. Il regroupe les tests en milieu salin, en milieu enzymatique et en milieu Coombs-LISS. [42]

Il permet de mettre en évidence d'éventuels anticorps froids IgM agglutinants actifs entre 4° et 22°C. Les anticorps naturels réguliers (anti A et anti B) ; irréguliers (anti Le, anti P1), dirigés contre les hématies du donneur. [42 ; 2 ; 3]

Les enzymes protéolytiques (papaïne, broméline) coupent les glycoprotéines à leur base, diminuant de ce fait la charge électrique et permettent plus facilement l'accès de l'antigène à l'anticorps. Leur utilisation est nécessaire pour mettre en évidence les anticorps non agglutinants.

Ce test permet ainsi de mettre en évidence les anticorps irréguliers tels que les anti Rh, les anti Kell, quelques anti Lewis, certains anti S, les auto anticorps chauds et jamais les anti Duffy. [18, 23, 42]

Ce test permet de rechercher d'éventuels allo anticorps IgG du receveur dirigés contre les antigènes des GR à transfuser.

Sa réalisation nécessite les réactifs tels que le sérum de Coombs polyvalent et la solution de LISS.

Le sérum de Coombs polyvalent permet la visualisation des hématies sensibilisées par des anticorps, mettant ainsi en évidence les allo anticorps ou auto anticorps chauds.

La solution de LISS (Low ionic strengh solution) diminue la force ionique du milieu et augmente le potentiel ZETA.

Elle diminue la vitesse de la réaction d'agglutination. Cependant la fixation de l'anticorps sur l'antigène est activée et le temps raccourci de 60 minutes à 10 minutes. [1, 2, 33]

Se référer à l'annexe 3, 4,5 pour les techniques de réalisation des différents tests cités ci-dessus.

II.1- Cadre du travail

- A l'Hôpital de la Mère et de l'Enfant Lagune (HOMEL) dans le service la pédiatrie

- Au Centre National Hospitalier et Universitaire Hubert Koutoukou MAGA (CNHU-HKM) dans les services de la Banque de Sang, de la pédiatrie, et des Maladies du Sang

- A la Banque de sang du Service Départementale de la Transfusion Sanguine (SDTS) Atlantique/littoral.

II.2- Matériel de travail

II.2.1- Matériels standards

II.2.1.1-Equipement

II.2.1.2 -Petits matériels

II.2.1.3- Matériels consommables

II.2.2- Réactifs utilisés

II.2.2.1- Test de compatibilité en Coombs-Liss

II.2.2.2- Recherche d'Agglutinines Irrégulières

II.3- Méthodologie

Nos manipulations se sont déroulées conjointement à la Banque de Sang (BDS) du CNHU-HKM et à la Banque de Sang du SDTS Atl/Lit. Ainsi, nous nous relayons sur ces différents lieux de travail de façon alternative.

II.3.1- Echantillonnage

Notre étude sur l'allo immunisation post transfusionnelle a été réalisée chez tout malade candidat à une transfusion et chez les transfusés connus de la période allant du 24 Octobre 2005 au 02 Juin 2006.

II.3.1.1- Test de compatibilité.

Notre étude a porté sur 189 Poches de sang cédées à la BDS du CNHU-HKM et 945 Poches de sang cédées à la Banque de Sang du SDTS Atl/Lit soit un total de 1134 poches de sang cédées. Soit 1134 tests de compatibilité réalisés avec 916 sérums de patients candidats à une transfusion.

II.3.1.2- RAI.

Cette étude a porté sur 101 sérums de polytransfusés prélevés au cours des consultations médicales au SMAS (CNHU-HKM) ; 97 sérums des enfants transfusés âgés de 2 à 10 ans des services de pédiatrie du CNHU-HKM, de l'HOMEL, de l'Hôpital Saint Luc, de Centre de santé de Mènontin et du Centre de santé Béthesda et 12 sérums révélés positifs au test de compatibilité.

Sur la base du registre de transfusion disponible au SMAS, nous avons identifié des polytransfusés que nous prélevons lors de leur consultation médicale dans ledit service.

Sont prélevés, tous les malades ayant bénéficié d'au moins deux transfusions différentes.

Depuis la banque de sang, les demandes de sang en provenance des services de pédiatrie des hôpitaux ci-dessus cités sont ciblées. Les enfants bénéficiaires de ces transfusions et âgés de 2 à 10 ans sont suivis et font l'objet d'un prélèvement 8 à 10 jours voir 15 jours après la transfusion.

NB : Il est à noter que les enfants sont prélevés systématiquement lors de leur sortie de l'hôpital même si le délai de 8 à 15 jours n'est pas atteint.

Des prélèvements de sang veineux sont effectués chez les malades précédemment identifiés dans leur service respectif. Le prélèvement est fait sur tubes secs de 5ml dûment étiquetés (voir annexe 1 pour protocole de prélèvement de sang veineux). Ils sont centrifugés puis les sérums mis en aliquotes de 1,5 ml pour être congelés à - 20°C.

Les sérums révélés positifs au test de compatibilité sont aussi aliquotés et conservés dans les conditions décrites ci-dessus.

NB : Avant tout prélèvement, une fiche de renseignements concernant le patient est remplie (voir annexe 11 pour la fiche).

II.3.2- Technique.

Dans le cadre de nos travaux de recherche, nous avons utilisé la technique en milieu Coombs-LISS.

II.3.2.1- Réalisation du test de compatibilité (TC).

Nous compatibilisons parallèlement au travail des techniciens de la Banque de sang, tous les sérums des receveurs âgés de 2 ans au moins.

Ce test permet de rechercher d'éventuels allo anticorps IgG présents dans le sérum du receveur dirigés contre les antigènes des GR à transfuser.

- Numéroter les échantillons et les bulletins de demande de sang qui les accompagnent.

- Incuber à 37°C les échantillons (si nécessaire) dans un bain-marie pendant cinq à dix minutes pour accélérer la coagulation.

- Centrifuger à 3.000 tours /minutes les échantillons de sang pendant une à trois minutes.

- Distribuer les réactifs dans les tubes. (Voir annexe 3 pour le TC en milieu Coombs-LISS)

NB : Nombre de tubes à disposer = nombre de poches à céder + 1 tube (pour auto-test).

Lorsque le TC se révèle positif nous réalisons le test de Coombs Direct sur les poches de sang et sur les hématies des receveurs.

*Agiter légèrement le tube de manière à décoller le culot d'hématies à l'aide du surnageant.

II.3.2.2 - Recherche d'agglutinines irrégulières (RAI).

Pour cette étude, nous avons procédé au dépistage et à l'identification des anticorps dépistés.

La technique utilisée est celle du Micro Typing System qui est très simple et de réalisation très aisée.

La technique du MTS appliquée à la RAI est une micro méthode qui permet de réaliser avec de faibles quantités de réactifs et d'échantillons les tests immuno-hématologiques. La réaction Ag-Ac se développe dans un gel spécial sur lequel on dépose les hématies tests et l'échantillon de sérum. Elle se produit effectivement pendant une centrifugation de dix minutes à 900TPM et consiste en des réactions d'agglutination.

Cette recherche préliminaire d'agglutinines irrégulières permet de détecter la présence d'allo ou d'auto anticorps dans le plasma ou le sérum mais ne permet pas de déterminer la spécificité de l'anticorps trouvé. Le panel de dépistage utilisé pour notre étude est composé des hématies-tests prêts à l'emploi, ID-DiaCell I-II-III.

Les sérums révélés positifs au dépistage sont testés pour l'identification du ou des anticorps présents.

Elle permet d'identifier les anticorps dépistés à l'aide des hématies-tests, ID-DiaPanel prêtes à l'emploi. Elle consiste à faire réagir sur les hématies-tests d'identification ID-DiaPanel, le sérum dans lequel des anticorps ont été dépistés.

Dans le cadre du présent travail, le panel d'identification est composé de 11 hématies.

-Une réaction est positive lorsque les hématies agglutinées forment une ligne rouge à la surface du gel ou sont dispersées dans le gel.

-Une réaction négative se traduit par la sédimentation complète des hématies au fond du tube.

Figure n°12 : Présentation des différentes sortes de réactions en gel [23]

III.1- Tests de compatibilité.

Notre étude a porté sur 1134 poches de sang cédées à la BDS du CNHU-HKM et à la BDS du SDTS Atl-Lit. Soit 1134 tests de compatibilité réalisés avec 916 sérums de patients.

III.1.1- Caractéristiques de la population étudiée

Sexe Tranche d'âge (ans)	Masculin	Féminin	Total
	N %	N %	N %
[2 -11] [12-21] [22-31] [32-41] [42-51] [52-61] [62, ? [	24 2,62 47 5,13 116 12,66 94 10,26 30 3,28 29 3,17 8 0,87	51 5,57 95 10,37 232 25,33 113 12,33 18 1,96 38 4,15 21 2,29	75 8,19 142 15,5 348 37,99 207 22,59 48 5,24 67 7,32 29 3,16
Total	348 38	568 62	916 100

	N	%
TC (+) avec AT (-)	24	2,12
TC (+) avec AT (+)	6	0,53
TC (-) avec AT (+)	5	0,44
TC (-) avec AT (-)	1099	96,91
Total	1134	100

2 ,65% des tests de compatibilité sont positifs contre 96,91% de négatifs. Le nombre de TC (+) avec AT (-) est d'environ 2% ; ce qui correspond à 16 sérums de receveurs. C'est cette série de résultat qui retiendra notre attention pour le reste de l'étude.

Tableau VI : Répartition des tests de compatibilité positifs selon la fréquence des transfusions.

Hôpitaux Nombre de TS	CNHU-HKM		HOMEL		Autres centres		Total
			N		%		N		%		N	%	N	%
01 TS		0		0,00		0		0,00		0	0,00	0	0,00
02 TS		1		6,25		0		0,00		0	0,00	1	6,25
Supérieur à 02 TS		5		31,25		2		12,50		2	12,50	9	56,25
Bulletins ne portant aucune information		3		18,75		0		0,00		3	18,75	6	37,50
Total		9		56,25		2		12,50		5	31.25	16	100,00

Figure n°15 : Répartition des tests de compatibilité positifs selon la fréquence des transfusions.

La positivité des tests de compatibilité est plus fréquente chez les patients qui ont reçu plus de deux transfusions (56%). La prévalence des tests de compatibilité positifs est de 37,5% pour les bulletins ne portant aucune information concernant le nombre de transfusion.

Nombre de cas Sexe	Nombre de cas (-)	Nombre de cas (+)	Total
	N %	N %	N %
Masculin Féminin	344 37,55 556 60,70	4 0,44 12 1,31	348 37,99 568 62,01
Total	900 98,25	16 1,75	916 100

1,75% des patients ont réagi au test de compatibilité dont 0,44% sont des hommes et 1,31% des femmes. Ceci traduit une prédominance de la positivité des femmes par rapport à celle des hommes.

Tableau VIII: Répartition des malades dont les tests de compatibilité sont positifs avec autotest négatif selon le sexe et l'âge.

sexe	Hommes		Femmes		Total
Tranches d'âge (ans)	N	%	N	%	N	%
[02-11] [12-21] [22-31] [32-41] [42-51] [52-61] [62,?[	0 0 1 2 0 0 1	0,00 0,00 6,25 12,50 0,00 0,00 6,25	2 1 6 2 0 0 1	12,50 6,25 37,5 12,50 0,00 0,00 6,25	2 1 7 4 0 0 2	12,50 6,25 43,75 25,00 0,00 0,00 12,50
Total	4	25	12	75	16	100,00

68,75% des TC (+) avec AT (-) surviennent chez les sujets âgés de 22 à 41 ans. Cette positivité est élevée dans la tranche d'âge de 32-41 ans chez les sujets de sexe masculin et dans la tranche d'âge de 22-31 ans chez les sujets de sexe féminin.

Tableau IX : Résultats des tests de coombs direct effectués sur les GR des receveurs ayant un AT (+).

	Positifs		Négatifs		Total
		N		%		N	%	N	%
Receveurs		02		18.18		09	81.82	11	100

III.1.3- Résultats du dépistage et de l'identification des anticorps impliqués dans les incompatibilités transfusionnelles.

Parmi les 16 sérums sur lesquels le test de compatibilité est positif avec auto-test négatif, seuls 12 ont fait l'objet de la RAI.

	N	%
Sérums ayant réagi avec les hématies-tests ID-DiaCell I-II-III	08	66,67
Sérums ayant présenté des réactions négatives avec les hématies-tests ID-DiaCell I-II-III	04	33,33
Total	12	100

8 sérums des receveurs ont réagi avec les hématies-tests ID-DiaCell I-II-III sur les 12 sérums testés.

Tableau XI : Résultats généraux des travaux d'identification des anticorps irréguliers.

	N	%
Sérums ayant réagi avec quelques hématies du panel	06	75
Sérums ayant présenté des réactions positives avec toutes les hématies du panel (qui ne permettent pas une identification)	02	25
Total	08	100

Pour les 8 sérums testés à l'identification, 6 ont réagi avec quelques hématies du panel d'identification soit 75% et 2 ont présenté des réactions positives avec toutes les hématies du panel soit 25%.

Tableau XII : Répartition des spécificités Ac identifiées par systèmes de groupes sanguins

Systèmes de groupes sanguins	Spécificités anticorps	Nombres de cas	Pourcentage
Rhésus	anti D	-	-
	anti C	04	57 ,14
	anti E	03	42,86
	ant c	-	-
	anti e	-	-
	anti C^w	-	-
Lewis	anti Le^a	01	100
Lewis	anti Le^b	-	-
MNSs	anti M	-	-
	anti N	-	-
	anti S	01	100
	anti s	-	-

Les spécificités anticorps ont été identifiées dans trois systèmes de groupes sanguins à savoir : Rh, Lewis et MNSs.

Dans le système Rh, sept (7) anticorps ont été identifiés dont (trois) 3 anticorps anti E et quatre (4) anticorps anti C.

Tableau XIII : Fréquence des différents systèmes de groupes sanguins en cause dans l'allo immunisation transfusionnelle.

Systèmes	Rhésus	Lewis	MNSs	Total
Nombre d'Ac identifié	07	01	01	09
Pourcentage	77,78	11,11	11,11	100

Nous remarquons que les anticorps dirigés contre les antigènes du système Rh sont plus fréquemment en cause dans les incompatibilités transfusionnelles. Suivent ceux dirigés contre les antigènes des systèmes MNSs et Lewis.

III.2- Résultats de la RAI effectuée chez les patients polytransfusés du SMAS et les enfants transfusés de pédiatrie.

III.2.1- Caractéristiques de la population.

Nous étudierons ces caractéristiques suivant le sexe, l'âge, les pathologies en cause et le nombre de transfusion.

Sexe	Masculin	Féminin	Total
Tranche d'âge (ans)	N %	N %	N %
[5-14 ]	05 4,95	03 2,97	08 7,92
[15 -24]	06 5,94	19 18,81	25 24,75
[25-34]	20 19,80	11 10,89	31 30,69
[35-44]	16 15,84	04 3,96	20 19,80
[45-54]	06 5,94	04 3,96	10 9,90
[55-64]	03 2,97.	01 0,99	04 3,96
[65 ;?[	01 0,99	02 1,98	03 2,97
Total	57 56,44	44 43,56	101 100

Dans cette population d'étude, 56,44% sont des hommes et 43,56% sont des femmes, La tranche d'âge la plus représentée chez les hommes est celle de 25-34 ans et celle plus représentée chez les femmes est celle de 15-24 ans.

Tableau XV: Répartition des patients de la pédiatrie selon le sexe et l'âge.

Sexe	Masculin	Féminin	Total
Tranche d'âge (ans)	N %	N %	N %
[1-3]	19 19,59	18 18,56	37 38,15
[4-6]	25 25,77	13 13,40	38 39,17
[7-9]	06 6,19	04 4,12	10 10,31
[10-12]	08 8,25	04 4,12	12 12,37
Total	58 59,80	39 40,20	97 100

Dans cette population d'étude, les enfants âgés de 4 à 6 ans sont plus représentés; par contre chez les sujets de sexe féminin ce sont les enfants âgés de 1 à 3 ans qui sont plus représentés.

Tableau XVI : Répartition des patients selon les services et les affections

Services	SMAS	Pédiatrie	Total
Pathologies en cause	N %	N %	N %
Anémie sans drépanocytose	10 5,05	72 36,36	82 41,41
Drépanocytose	50 25,25	00 0,00	50 25,25
Hémophilie	08 4,04	00 0,00	08 4,04
Autres pathologies	33 16,67	25 12,62	58 29,30
Total	101 51,01	97 48,99	198 100

La majorité des enfants de la pédiatrie sont hospitalisés pour anémie; par contre la majorité des patients du SMAS souffrent de drépanocytose avec un pourcentage de 25,25%.

Tableau XVII : Répartition des patients selon le nombre de transfusions et le service.

Services	SMAS	Pédiatrie	Total
Nombre de TS	N %	N %	N %
Une TS	00 0,00	93 46,97	93 46,97
Deux TS	00 0,00	04 2,02	4 2,02
Trois TS	17 8,58	00 0,00	17 8,58
Quatre TS	33 16,67	00 0,00	33 16,67
Plus de quatre TS	51 25,76	00 0,00	51 25,76
Total	101 51,01	97 48,99	198 100

26% des polytransfusés ont reçu plus de quatre transfusions, par contre la majorité des enfants de la pédiatrie ont reçu une seule transfusion, Soit un pourcentage de 46,97%.

III.2.2- Répartition de la positivité des réactions d'allo immunisation

Tableau XVIII : Répartition des résultats globaux du dépistage selon les services

Services	SMAS	Pédiatrie
Types de réactions			N	%	N	%
Sérums ayant présenté des réactions négatives avec les hématies-tests ID-DiaCell I-II-III			93	92,08	97	100
Sérums ayant réagi avec les hématies-tests ID-DiaCell I-II-III			08	7,92	00	00
TOTAL			101	100	97	100

8% des patients polytransfusés du SMAS ont réagi positivement au dépistage d'anticorps irréguliers. Alors que ceux de la pédiatrie ont réagi négativement.

Tableau XIX : Répartition des patients allo immunisés selon le service et le nombre des transfusions

Services	SMAS		Pédiatrie
Nombre de transfusion (TS)		Nombre de cas		Nombre de positif	%	Nombre de cas	Nombre de positif	%
01 TS		00		00	0,00	93	00	0,00
02 TS		00		00	0,00	04	00	0,00
03 TS		17		02	1.98	00	00	0,00
04TS		33		03	2.97	00	00	0,00
Supérieur à 04 TS		51		03	2,97	00	00	0,00
Total		101		08	7.92	97	00	0,00

Tableau XX : Répartition des patients selon le service et le délai de prélèvement après la dernière transfusion.

Services	SMAS		Pédiatrie
Période de prélèvement		Nombre de cas		Nombre de positif	%	Nombre de cas	Nombre de positif	%
Avant le 8^ème jour		26		00	00	39	00	00
Entre le 8^ème et le 15^ème jour		12		02	1,98	57	00	00
Entre le 15^ème et le 30^ème jour		10		01	0,99	01	00	00
Plus de 30 jours		53		05	4,95	00	00	00
Total		101		08	7,92	97	00	00

La fréquence de positivité est élevée parmi les patients prélevés plus de 30 jours après la dernière transfusion soit un taux d'environ 5% contre une fréquence de 2% chez ceux qui sont prélevés entre le 8^ème et le 15^ème jour après la dernière transfusion. Par contre elle est nulle chez les patients prélevés avant le 8^ème jour après la dernière transfusion.

Sexe	Masculin	Féminin	Total
Tranche d'âge (ans)	N %	N %	N %
[5-14]	0 0	1 12,5	1 12,50
[15-24]	0 0	1 12,5	1 12,50
[25-34]	3 37,50	1 12,5	4 50,00
[35-44]	1 12,50	0 0	1 12,50
[45-54]	1 12,50	0 0	1 12,50
[55-64]	0 0	0 0	0 0
[65 ;?[	0 0	0 0	0 0
Total	5 62,5	3 37,50	8 100

La fréquence de positivité est élevée dans la tranche d'âge de 25-34 ans, soit 50% des patients allo immunisés,

Tableau XXII : Répartition des patients allo immunisés selon les affections

Affections	Nombre de cas	Nombre de positif	%
Anémie	10	01	0,99
Drépanocytose	50	03	2,97
Hémophilie	08	01	0,99
Autres	33	03	2,97
Total	101	08	7,92

La fréquence de patients allo immunisés est élevée chez les drépanocytaires et les patients souffrant d'autres affections (leucémie...).

	N	%
Sérums dans lesquels des spécificités Ac ont été identifiées	06	75
Sérums ayant présenté des réactions positives avec touts les hématies du panel (qui ne permettent pas une identification)	02	25
TOTAL	08	100

Tableau XXIV: Répartition des spécificités Ac identifiées par systèmes de groupes sanguins.

Systèmes de groupes sanguins	Spécificités anticorps	Nombres de cas	%
Rhésus	anti D	-	-
	anti C	03	42,86
	anti E	03	42,86
	anti c	-	-
	anti e	-	-
	anti C^w	01	14,28
Kidd	anti Jk^a	01	100
Kidd	anti Jk^b	-	-
Lewis	anti Le^a	02	100
Lewis	anti Le^b	-	-
MNSs	anti M	-	-
	anti N	-	-
	anti S	01	100
	anti s	-	-

Les spécificités anticorps ont été identifiées dans 4 systèmes de groupes sanguins à savoir : Rh; Kidd; Lewis et MNSs.

Dans le système Rh, sept (7) anticorps ont été identifiés dont trois (3) anticorps anti- C, trois (3) anticorps anti E et un (1) anticorps anti C^w.

Tableau XXV: Fréquence des différents systèmes en cause dans l'allo immunisation transfusionnelle chez les polytransfusés du SMAS

Systèmes	Rhésus	Kidd	Lewis	MNSs	Total
Nombre d'Ac identifiés	07	01	02	01	11
%	63,64	0,09	0,18	0,09	100

Les anticorps du système Rh sont fréquemment en cause dans les immunisations transfusionnelles avec une fréquence de 63,64%, Suivent les anticorps des systèmes Lewis, Kidd et MNSs.

IV.1- Analyse des résultats des tests de compatibilité effectués.

IV.1.1- Caractéristiques de la population

L'étude du sexe dans notre série fait remarquer que les candidats à une transfusion sont à dominance de sexe féminin ; soit 3 patients sur 5. Chez ces mêmes sujets, la tranche d'âge comprise entre 22-31 ans est la plus représentée, suit celle de 32-41 ans. Ceci s'explique par l'optimum de maternité atteinte dans cette tranche d'âge selon les travaux d'ENIANLOKO [17] effectuée sur les femmes accouchées en zone rurale et urbaine.

IV.1.2- Etude des résultats des tests de compatibilité effectués.

Dans notre étude, 35 tests soit 3,09% des tests de compatibilité effectués sur 1134 poches ont réagi positivement au Test de compatibilité et/ou à l'autotest traduisant des cessions d'unités de sang incompatibles.

Les incompatibilités transfusionnelles mises en cause sont dues à des agglutinines chaudes, lesquelles peuvent entraîner des réactions post-transfusionnelles allant de l'hémolyse à la transfusion sans bénéfice. La gravité de ces réactions prouve l'importance de la réalisation du test de compatibilité au laboratoire qui pourrait certainement réduire les risques immunologiques aux patients.

Les études réalisées par SIBERTZ-JADIN (B.) [23] en 1996 sur une population de 1238 patients au Bénin ont montré que sur 2765 poches compatibilisées, 569 sont déclarées positives soit 20,60%. Les travaux réalisés par SOSSA Dagnon [45] en 1995 sur 177 cessions d'unités de sang ont montré que 35% étaient incompatibles. De même, ceux rapportés par ADEBO (D.) et HOUNKPONOU (J-B), révèlent que 311 tests sont positifs sur 1900 tests effectués soit 16,14%. Ces résultats sont différents de ceux de notre série. Ceci peut s'expliquer par le fait que nous avons effectué nos tests uniquement en milieu Coombs-LISS contrairement aux autres où les tests ont été effectués en plus du milieu Coombs-LISS, en milieux salin et enzymatique.

- Etude de la répartition des patients allo immunisés selon la fréquence des transfusions.

L'analyse approfondie de la figure n°15 révèle que le taux de positivité est élevé chez les patients ayant reçu plus de deux transfusions antérieures et nul chez ceux n'ayant reçu qu'une seule transfusion antérieure. Ces transfusions ont induit l'allo immunisation chez la première série de patients. En effet, il existe une probabilité plus importante d'allo immunisation liée à des transfusions antérieures. Ceci concorde avec les résultats des travaux réalisés par SMITH (F.) [43] à propos de 132 tests effectués sur les enfants polytransfusés au CNHU-HKM, ADEBO D. HOUNKPONOU J-B [2]à propos de 1900 tests de compatibilité réalisés à la BDS du CNHU-HKM. Il parait alors important de phénotyper les patients susceptibles de polytransfusions.

Aussi sur un grand nombre de bulletins de demande de sang, aucune information n'était mentionnée concernant le nombre de transfusions antérieures du malade. Cet état des choses nous a bloqués dans l'interprétation des résultats.

L'étude de la positivité selon le sexe montre que 3 patients allo immunisés sur 4 sont de sexe féminin. Ceci traduit la fréquence d'immunisation plus élevée chez les femmes, comme l'a remarqué ROUGER (P.) [36] dans les bases de la Transfusion Sanguine et SALMON (C.) [39] dans l'immunisation par la Transfusion Sanguine.

Deux patients allo immunisés sur 16 sont dans la tranche d'âge 2-11 ans soit 12,5% et sont tous de sexe féminin. Sept (07) patients allo immunisés sur 16 sont dans la tranche d'âge de 22-31 ans dont six (06) de sexe féminin. Ceci traduit une immunisation des sujets jeunes de sexe féminin pouvant ainsi compromettre leur avenir obstétrical.

Si dans certaines études, les réactions d'allo immunisation sont fréquentes dans des catégories plus jeunes comme dans notre étude, elles sont plus importantes chez les sujets âgés, car avec l'âge augmente la fréquence des transfusions du fait d'un plus grand nombre potentiel d'indications médicales et/ou chirurgicales.

IV.2- Etude des résultats des travaux effectués chez les polytransfusés et les enfants de pédiatrie.

IV.2.1- Caractéristiques de la population.

L'observation des résultats montre que, contrairement au constat général fait dans la population béninoise, l'échantillon de notre étude au SMAS comporte plus de sujets de sexe masculin (56,44%) que de sexe féminin (43,56%). Il en est de même pour la pédiatrie où nous avons 59,60% d'hommes contre 40,20% de femmes.

L'étude de la répartition selon les services et les affections montre que 82 patients soit 41,41% sont anémiés pour diverses causes dont 72 enfants de la pédiatrie. Ceci s'explique par le fait que le Bénin est dans une zone endémique où l'anémie palustre est la principale cause de transfusion sanguine chez les enfants. Viennent ensuite la drépanocytose et les diverses autres affections.

IV.2.2- Etude des résultats de dépistage d'allo anticorps.

La lecture des tableaux X et XI montre qu'au dépistage, seulement huit (08) sérums du SMAS ont donné des réactions positives avec les hématies-tests

ID-DiaCell I-II-III. Ceci peut s'expliquer par le fait qu'en pédiatrie tous les enfants ont reçu au plus, deux transfusions et que la plupart des prélèvements effectués sur les enfants étaient faits avant le 8^ème jour après la dernière transfusion alors que dans les travaux de SMITH (F.) [43] la plupart des enfants prélevés avaient reçu plus de deux transfusions, ce qui traduit la positivité observée dans son travail. De plus dans les Bases de la Transfusion Sanguine de ROUGER (P.) le pic d'anticorps est atteint entre le 8^ème et le 14^ème jour.

Par contre la positivité observée chez les polytransfusés est élevée chez ceux ayant reçu au moins quatre (04) transfusions. Aussi, soulignons-nous que malgré des prélèvements faits chez certains de ces polytransfusés, plus de 30 jours après la dernière transfusion, des sérums, se sont révélés positifs au dépistage d'allo anticorps. Ainsi, nous pouvons affirmer qu'en dehors de la période optimale de dépistage d'anticorps (entre le 10^ème et le 21^ème jour après la transfusion) des anticorps peuvent persister dans le sérum pendant longtemps. Nous revenons au fait que le risque d'allo immunisation est lié au nombre de transfusions.

IV.3- Etude des résultats de l'identification des anticorps irréguliers.

Les sérums révélés positifs au test de compatibilité avec autotest négatif ont permis l'identification de 09 anticorps dont 04 anti C, 03 anti E, 01 anti Le^a et 01 anti S. Cinq (05) sérums sont polyspécifiques, ce qui peut s'expliquer par le fait que ces malades avaient été en contact au cours des différentes transfusions antérieures avec des antigènes immunogènes qu'ils ne possèdent pas.

Cette polyspécificité des anticorps des sérums examinés peut aboutir au blocage de la transfusion, car il devient plus difficile de trouver des poches de sang compatibles.

Au regard des résultats précédents, en pratiquant uniquement le contrôle ultime au lit du malade avant une cession de sang, les receveurs allo immunisés pourraient réagir. Ces réactions post transfusionnelles vont de l'hémolyse des hématies transfusées à la transfusion sans bénéfice.

La fréquence élevée des anticorps dirigés contre des antigènes du système Rh traduit la forte immunogénicité de ces antigènes.

L'immunisation à l'antigène E et à l'antigène C est fréquente dans la population étudiée. Ce constat avait été fait par KINTOMONHO (S.R.) [26] chez les donneurs bénévoles de sang au CNTS et par ADEBO et HOUNKPONOU [2].

Considérant les résultats des anticorps du système Kidd, nous avons identifié comme dans les travaux de YARA (J.) et BAYILI (G.) [48] un anti Jk^acontrairement aux travaux de DOFONHAKOU [16] et YABI [47] qui n'ont pas identifié des spécificités anticorps dans ce système. Cet anticorps est dangereux aussi bien en transfusion sanguine que lors de la MHNN. L'existence de cet antigène dans la population béninoise a été démontrée dans les travaux de KINTOMONHO [26], de BIGOT (A.) SECLONDE (H.) et coll [9]. La rareté de cette allo immunisation est due à la faible immunogénicité de l'antigène.

Au niveau du système Lewis, des anticorps anti Le^a ont été identifiés en milieu Coombs-LISS. De tels anticorps pourraient provoquer des incidents transfusionnels du genre raccourcissement de la durée de vie des hématies Lewis incompatibles transfusées. Il importerait donc de rechercher de tels anticorps avant toute transfusion.

Enfin concernant la distribution des anticorps dirigés contre les antigènes du système MNSs, seul l'anti S a été identifié. Cet anticorps actif en milieu Coombs-LISS et donc à température du corps humain est également dangereux.

IV.4- Difficultés rencontrées.

- l'impossibilité de suivi des malades de la pédiatrie, ce qui nous a amené à faire des prélèvements avant le 8^ème jour après la transfusion.

- l'insuffisance de la quantité des échantillons tests des patients envoyés à la BDS ne nous permettant pas de réaliser le TC après celui des techniciens de la BDS.

- les informations incomplètes sur l'ordonnance de demande de sang. constituant ainsi un handicap dans l'interprétation des résultats des tests de compatibilité.

- le non acheminement des réactifs de la RAI à temps, ce qui a constitué un frein à nos travaux.

- l'absence de réactifs de phénotypage pouvant nous permettre d'exclure éventuellement l'anticorps anti C^w.

Etude comparative des différentes techniques utilisées lors des tests de compabilité au laboratoire.

Intérêt des tests de comptabilité au laboratoire (à propos de 1900 poches cédées)

Contribution à l'étude de l'allo immunisation Rhésus (anti D) dans la région de Cotonou.

Serogilocal investigations of 1,358 transfusions réactions in 74,000 transfusions.

9. BIGOT (A.), GUERRIERI (C.), SECLONDE (H.), LATOUNDJI (S.), ZOHOUN (I.), DE BRUYERE (M.), SOKAL (G.)

Recherche d'anticorps irréguliers dans une population de femme enceinte à Cotonou : Fréquence et nature.

Immunologie et immunogénétique. Tome 1 Maison Médicale U.C.L., Bruxelles, 1993-1994:12-94

Contribution à l'étude de l'allo immunisation contre les antigènes érythrocytaires en République du Bénin (à propos du dépistage d'anticorps irréguliers chez 132 malades transfusés à l'hôpital de Porto-Novo).

Contribution à l'étude de l'allo immunisation foeto-maternelle en République du Bénin

Intérêt de la pratique systématique du test de coombs dans un service de maternité de zone rurale et de zone urbaine.

Prévention des accidents transfusionnels par incompatibilité sanguine. Le risque d'incompatibilité transfusionnelle en pratique hospitalière.

Accidents immuno hématologiques au cours de la transfusion de plus de deux millions de concentrés de globules rouges.

Étude des phénotypes érythrocytaires autres que ABO et recherche d'Ac irréguliers chez les donneurs bénévoles de sang au CNTS de Cotonou

Antigènes et anticorps de groupes sanguins et leur rôle dans la transfusion sanguine.1990:17-65

Immunologie Fondamentale et appliquée : 2^ème édition MEDSI / MC / GRAW-HILL, Paris, 1989 :3-40

Application du Micro-Typing System ou Micro-Groupage à la surveillance immunologique des enfants polytransfusés. (A propos de 132 tests effectués au CNHU de Cotonou).

Contribution à l'étude de l'allo immunisation transfusionnelle anti érythrocytaire en République Populaire du Bénin.

Contribution à l'étude de l'allo immunisation transfusionnelle et foeto-maternelle anti-érythrocytaire : intérêt du Micro Typing System dans la RAI au CNHU.

Contribution à l'étude de l'Allo immunisation post- transfusionnelle chez les patients transfusés à Cotonou Bénin

TABLE DES MATIERES