Controle microbiologique compare entre l'eau de pompage de kimbembe et l 'eau courante du robinet (cas du quartier CRAA)

II.MILIEUX, MATERIELS, METHODES

II.1.MILIEU

Les investigations ont été menées au deux endroits de la ville de Lubumbashi précisément dans deux communes c'est-à-dire commune de Lubumbashi et annexe.

Le bassin de captage d'eau de Kimbembe se trouve dans la commune annexe, sur la route Likasi aux environs du camp kimbembe à 17km du centre-ville de Lubumbashi. Tandis que le Quartier CRAA se trouve dans l'ancienne concession du centre de recherche agro - alimentaire, en sigle CRAA qui est localisé dans la commune de Lubumbashi au N⁰ 1 de l'avenue président ILEO, sur la route Likasi et à environ 10km du centre-ville de Lubumbashi.

II.2.MATERIELS ET REACTIFS

Ø Erlenmeyer de 250ml ;

Ø Microscope binoculaire ;

Ø Centrifugeuse électrique ;

Ø Source de chaleur (plaque chauffante) ;

Ø Tube à essai ;

Ø Comptes -gouttes stérile (pipette pasteur) ;

Ø Pissette de 200ml ;

Ø Lame porte objet ;

Ø Lamelle ;

Ø Violet gentiane ;

Ø Lugol ;

Ø Alcool - acétone ;

Ø Fuchsine au 1/10em ;

Ø Eau distillée ;

Ø Mac conkey agar ;

Ø SS Agar ;

Ø Mannitol Salt Agar (M.S.A.) ;

Ø Gélose au sang

Ø Etuve réglé à 37oC ;

Ø Galerie API20E ;

Ø Micros tubes ;

Ø Tableau de caractère biochimique et d'identification ;

Ø Catalogue analytique ou logiciel d'identification.

II .3.METHODES

1. PRELEVEMENT D'ECHANTILLON D'EAU

Tout commence par le prélèvement des échantillons d'eau aux robinets de la REGIDESO le matin et l'après-midi à l'aide des erlenmeyer de 250ml stérile dans différentes avenues du Quartier CRAA de la commune Lubumbashi ; et aussi à la station de captage et de distribution de L'UNILU au Quartier Kimbembe de la commune annexe.

2. EXAMENS A L'ETAT FRAIS ET APRES COLORATION

- EXAMEN A L'ETAT FRAIS

· Nous identifions les lames porte - objet et les tubes à essai

· Agiter doucement l'erlenmeyer pour mettre les sédiments en suspension homogène ;

· Remplir aussitôt au ¾ un tube à essai à centrifuger;

· Centrifuger pendant 5minuutes à 1500 tours/minute ou à l'aide d'une centrifugeuse à main ;

· Rejeter le surnageant en retournant le tube à essai d'un coup sec ;

· Avec le compte-goutte capillaire, aspirer et refouler trois fois le culot du fond du tube à essai pour rendre homogène ;

· Prélever quelques gouttes culot « homogénéisés » ;

· Déposer une goutte d'eau du culot à l'aide d'une pipette pasteur stérile sur la lame porte objet.

· Couvrir la préparation d'une lamelle couvre objet ;

· Examiner au microscope entre lame et lamelle à l'objectif 10X et 40X.

- EXAMEN APRES COLORATION DE GRAM

Principe : Le violet de gentiane qui colore toutes les bactéries en bleu violet ;

Le lugol fixe plus au moins fort le violet de gentianes dans les bactéries ;

L'alcool acétone qui décolore certaines bactéries où le violet est peu fixé par le lugol ;

La Fuchsine recolore les bactéries qui ont été décoloré par l'alcool -acétone en rouge rose et n'agit pas sur les bactéries qui ont été coloré en bleu violet et restée intacte.

Mode opératoire :

Préparer  un frottis mince et laisser sécher à l'air libre, puis fixer en faisant passer la lame sur la flamme ;

Couvrir la préparation avec le violet de gentiane pendant 30sécondes, puis laver ;

Mordancer pendant 30sécondes le frottis par la solution de Lugol ;

Laver la préparation à l'eau distillée au moyen d'une pissette ou de robinet.

Décolorer la lame à l'aide de l'alcool acétone jusqu'à la disparition complète du colorant

Laver à l'eau comme précédemment

Appliquer la fuchsine pendant 30sécondes

Rincer à l'eau de robinet ou distillée

Sécher la lame

Observer au microscope à l'objectif à immersion (100X).

Résultat

Les bactéries gram + (positif) sont colorées en bleu -violet et Gram-(négatif) en rouge rose.

3. MISE EN CULTURE

En homogénéisant un millilitre prélevé dans l'échantillon d'eau dans 9ml d'eau physiologique stérile, le nombre de micro-organisme par millilitre est réduit à un dixième(facteur de dilution 10).

A l'aide d'une pipette stérile ensemencer 1ml de chaque dilution (càd10 à10) sur le milieu Mac conkey, SS agar, le mannitol Salt agar et sur gélose au sang cuit, respectivement. En suite étuver à 37⁰C pendant 24Heures. Après culture pratiquer l'identification par le système API20E comporte 20 micros tubes inoculé avec une suspension bactérienne qui reconstitue le milieu.

Le résultat s'observe après une période d'incubation qui se traduit par des réactions qui produisent le virage de couleur spontané.

Ces réactions s'interprètent à l'aide d'un tableau de caractères biochimiques et l'identification de germes est obtenue à l'aide d'un catalogue analytique ou d'un logiciel d'identification.