3.2 Méthodes
immunologiques
3.2.1 Test RIA (Radio
Immuno Assay)
Cette technique utilise un principe de compétition,
vis-à-vis de leurs anticorps spécifiques, entre la nicotine ou la
cotinine présentes dans le sérum ou l'urine et une
quantité donnée de nicotine ou cotinine marquée par un
radio-isotope.
L'inconvénient principal est la
réactivité croisée des anticorps anti-nicotine et
anti-cotinine avec la trans- 3'-OH-cotinine et le cotinine-glucuronide
(45,54).
3.2.2 Test ELISA (Enzyme
Linked Immunosorbent Assay)
Le dosage se fait dans des plaques dont les puits sont
recouverts de cotinine. Un anticorps anti-cotinine est ajouté aux puits
ainsi que l'échantillon à tester. L'anticorps n'ayant pas
réagi avec la cotinine de l'échantillon se lie avec la cotinine
fixée dans le puits. Une technique analogue existe pour la nicotine.
Après lavage de la plaque, la quantité d'anticorps lié au
puits est révélée par l'ajout d'un second anticorps
lié à une peroxydase (lecture à 490 nm). La limite de
détection est de 5 ng/ml pour la nicotine et de 2 ng/ml pour la cotinine
dans la salive. Mais cette technique a également été
utilisée pour le dosage de la cotininurie, avec un seuil de
détection à 5 ng/ml.
Cette méthode est simple, rapide, sensible et
spécifique mais coûteuse en réactifs (45,55, 56).
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