II Méthodes
Afin
de guider le choix des plantes, une enquête a été
effectuée dans la ville de Dschang et ses environs (Annexe III). Suite
à cette enquête, à l'identification et à une
étude bibliographique, des échantillons de plantes ont
été récoltés et séchés avant
extraction.
II.1 Extraction et
partitionnement
Les tiges et feuilles de Tristemma hirtum d'une
part, et les feuilles d'Acalypha manniana d'autre part, ont
été découpées et séchées à
l'abri de la lumière, à température ambiante pendant
environ 5 jours puis réduites en poudre. Un kilogramme de poudre de
chaque plante a été macéré dans 4 L de
méthanol pendant 3 jours. Le mélange était remué
deux fois par jour . Le macérât a ensuite été
filtré à l'aide du papier Watmann N°3, puis le solvant des
filtrats a été évaporé à 65°C à
l'aide d'un évaporateur rotatif (BÜCHI R-200/205).
Deux extractions ont été effectuées pour chaque
échantillon et le rendement d'extraction a été
calculé par rapport à la masse du matériel
végétal sec.
Les extraits de plantes ont été
épuisés successivement à l'hexane et à
l'acétate d'éthyle comme suit. Cent grammes d'extrait au
méthanol ont été dissouts dans 1litre d'hexane. La phase
supérieure hexanique a ensuite été
récupérée après 2h de repos par décantation
et l'hexane a été évaporé à 70°C. Le
résidu a une fois de plus été dissout dans 1 litre
d'acétate d'éthyle, puis, le mélange a été
laissé au repos pendant 2 heures. La phase supérieure à
l'acétate d'éthyle a ensuite été
récupérée par décantation, puis son solvant
évaporé à 78°C. Toutes les fractions obtenues
(hexanique, à l'acétate d'éthyle et résiduelle)
ont été séchées à l'étuve à
40°C pour évaporation complète des solvants et le rendement
d'extraction a été déterminé par rapport à
la masse d'extrait brut.
II.2 Criblage phytochimique des
extraits et fractions
Les principaux groupes de substances antimicrobiennes ont
été recherchés dans les différents extraits et
fractions par les méthodes standards décrites par Brunetton
(1999).
II.2.1 Les
flavonoïdes : test de Shinoda
L'extrait/fraction (0,1 g) a été dissout dans 3
ml de méthanol. 0,05 g de copeau de magnésium et 4 gouttes
d'acide sulfurique y ont ensuite été ajoutés. Le
développement de la couleur orange a indiqué la présence
des flavonoïdes.
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