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Evaluation de l'activité antidermatophytique des extraits au méthanol et fractions d'acalyphamanniana (euphorbiacées) et tristemma hirtum (mélastomatacées)

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par Rosine Clémence Momo Dongmo
Université de Dschang - Master en biochimie clinique et pharmacologie 2009
  

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II.3 Evaluation de l'activité antidermatophytique in vitro

II.3.1 Evaluation de l'effet des extraits et fractions sur la croissance radiale mycélienne des dermatophytes

g) Préparation de l'inoculum fongique

Le front de croissance d'une culture de dermatophyte âgée de 10 jours a été inondé avec 10 ml d'eau physiologique stérile (NaCl 0,9%). Après agitation et filtration, 1 ml de la suspension obtenue a été répandu sur la surface du milieu Sabouraud dextrose agar (SDA) préalablement coulé et gélifié dans une boîte de Pétri de 90 mm de diamètre intérieur. Les boîtes de Pétri ont ensuite été incubées pendant 10 jours à 30°C (Kuiate et al.,2006).

h) Préparation des solutions mères d'extrait et des concentrations tests

L'extrait/fraction (0,08 g) a été dissout dans 500 ul de diméthylsulfoxide (DMSO), puis le volume de la suspension a été complété à 5 ml avec de l'eau distillée stérile pour une concentration finale de 16 mg/ml. A partir de cette solution mère des dilutions successives en série de 2 ont été effectuées pour obtenir des concentrations tests comprises allant de 8 à 0,25 mg/ml (Tableau 1).

Tableau 1: protocole de préparation des différentes concentrations d'extraits et fractions testées

Echantillons Témoin négatif Tests

volume de solution mère 0 2,25 1,13 0,56 0,28 0,14 0,07

d'extrait (ml)

volume de SDA en 4,5 2,25 3,37 3,94 4,22 4,36 4,43

surfusion (ml)

concentration test (mg/ml) 0 8 4 2 1 0,5 0,25

i) Procédure

L'évaluation de l'inhibition de la croissance radiale mycélienne a été réalisée par la méthode d'incorporation en milieu solide (Kuiate et al., 2006). A cet effet, nous avons utilisé des plaques de 24 puits (NUNC®). Nous avons introduit 1,5 ml de SDA supplémenté à différentes concentrations d'extrait/fraction dans chaque puit. Trois essais ont été réalisés pour chaque concentration. Après gélification du milieu, chaque puit a été inoculé en son centre à l'aide d'un explant (2 mm de diamètre intérieur) prélevé du front de croissance d'une culture âgée de 10 jours. Les plaques ont ensuite été recouvertes et incubées à 30°C pendant 7 jours. La croissance radiale mycélienne des dermatophytes a été mesurée chaque jour, à la même heure, à l'aide d'une règle graduée, dans deux directions perpendiculaires passant par le centre de l'explant et ôtée du diamètre de l'explant. A partir de ces mesures, les pourcentages d'inhibition de la croissance radiale mycélienne de chaque dermatophyte par l'extrait/fraction ont été calculés en utilisant la formule :

%I : pourcentage d'inhibition

Dt : diamètre moyen de la colonie du témoin négatif

Dx : diamètre de la colonie dans le puit test

Les explants dont la croissance a été totalement inhibée ont été prélevés et ensemencés sur un autre milieu non supplémenté en extraits ou fractions, puis incubés pendant 7 jours à 30°C pour déterminer si la substance est fongicide ou fongistatique (Thompson, 1989).

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