Memoire Online - Méthodes d'études d'activité des antioxydants des plantes médicinales

UNIVERSITE KASDI MERBAH, OUARGLA
FACULTE DES SCIENCES DE LA NATURE ET DE LA VIE
DEPARTEMENT DES SCIENCES BIOLOGIQUE

Avant tout, nous remercions Dieu tout puissant de nous avoir donné la force, le courage, la
persistance et nous a permis d'exploiter les moyens disponibles à fin d'accomplir ce modeste
travail. Merci de nous avoir éclairé le chemin de la réussite.

Nous adressons nos plus sincères remerciements à notre promotrice Mme SAYAH Zineb

Enseignante au Département des Sciences Biologiques à la Faculté des Sciences de la Nature

et de la Vie de l'Université Kasdi Merbah-Ouargla, qui nous a encadrées et dirigées ce travail

avec une grande rigueur scientifique, sa disponibilité, ses conseils et la confiance qu'il nos

Nous offrons nos plus sincères remerciements à l'examinatrice HADJADJ Soumia pour ses

Enseignante au Département des Sciences Biologiques à la Faculté des Sciences de la Nature

Nous remercions aussi tous les membres de la bibliothèque de Département des Sciences

Nous remercions aussi tous les membres de la bibliothèque de l'Université Mohammed Khider

Un grand merci à tous les enseignants du département des sciences de la nature

Nos vifs et sincères remerciements s'adressent tout particulièrement à notre Université de

Je dédié ce travail à Ma famille
MEDJOUDJA Et aux personnes les plus chères au monde mes chers
parents ;
A ma très chère mère Ramdana ;
Tu es l'exemple de dévouement qui n'a pas cessé de m'encourager et de
prier pour moi. Et Puisse Dieu, le tout puissant, te préserver t'accorder
santé, longue vie et bonheur.
A mon père Mohammed ;
Rien au monde ne vaut les efforts fournis jour et nuit pour mon éducation
et mon bien être. Ce travail est fruit de tes sacrifices qui tu as consentis
pour mon éducation et ma formation.
Je dédie spécial Mon mari BILAL qui n'a jamais cessé de croire source
d'amour et de tendresse sans toi ce mémoire n'aurait jamais un le jour...

A ma 2^éme famille : Mes parents : Mohammed elhadi et Ouahiba, Mes soeurs et Mes frères.

A mon binôme Atika qui a partagée avec moi les moments difficiles de ce travail et son famille.

A l'aide de dieu tout puissant, qui m'a tracé le chemin de ma vie, J'ai pu réaliser ce travail que je dédie :

A la lumière de mes yeux, l'ombre de mes pas et le bonheur de ma vie ma
mère qui ma apporté son appui durant toutes mes années d'étude, pour son
sacrifice et soutien qui m'ont donné confiance, courage et sécurité.

A mon cher père qui ma appris le sens de la persévérance tout au long de mes études, pour son sacrifice ses conseils et ses encouragements.

A mes très chères soeurs : Soumia , Soundes.
A mes très chères frères : Abd ellalatif, Samir, Soufiane ,Younes.
A ma très chère soeur Asma et son marie tarik.
A mon nouveau Med Said.

Massouda , Mouna , Imen , Sabah , Zineb B , Sabrinal , Mebaraka ,
Sara, Nour elhouda.
A mon Binôme « Ouafa » qui a partagée avec moi les moments difficiles
de ce travail et son famille.
Sans oublier mes brave Amies de la promotion III de Biochimie.

Introduction	1
Chapitre I- Plantes médicinales et principaux antioxydants naturels.
I.1- Plantes médicinales.	2
I.1.1- Définition de plantes médicinales.	2
I.1.2- Métabolismes secondaires.	2
I.1-3- Phytothérapie.	4
I.1.4- Pouvoir des plantes médicinales.	4
I.2- Mécanisme dégénération des radicaux libres.
I.2.1- Stress antioxydant.	5
I.2.2- Généralité sur l'oxydation et les antioxydants.	6
I.2.3- Définition des antioxydants.	7
I.2.4- Principaux antioxydants.	8
I.2.4.1- Antioxydants endogènes.	8
I.2.4.2- Antioxydants exogènes.	8
I.2.4.2.1- Médicament.	8
I.2.4.2.2- Porbucol(Lurselle).	8
I.2.4.2.3- N-acétylcystéine.	8
I.2.4.3- Alimentation.	9
I.2.4.3.1- Acide ascorbique : Vitamine C.	9
I.2.4.3.2- Vitamine E.	9
I.2.4.3.3- â- carotène.	10
I.2.5- Mécanismes d'action des antioxydants.	11
I.2.5.1- Classification des antioxydants par rapport à leur mécanisme d'action.	11
I.2.5.1.1- Antioxydants primaires ou radicalaires ou vrais.	11
I.2.5.1.2- Antioxydants secondaires ou préventifs.	11
I.2.5.2- Classification des antioxydants suivant la nature chimique dans les aliments.	12
I.2.5.2.1- Antioxydants naturels.	12
I.2.5.2.2- Antioxydants synthétiques.	12
I.2.5.2.3- Antioxydants synergiques.	14
I.2.6- Toxicité des antioxydants.	14
Chapitre II- Méthode d'étude d'activité antioxydants des plantes médicinales.
Introduction.	16
II.1- Test au DPPH.	16	II.2- Test de la réduction du fer FRAP ( Ferric reducing-antioxidant power).
18
II.3- Méthode de TRAP ( Total radical- trapping antioxidant parameter ).	20
II.4- Réduction du radical-cation ABTS ou détermination du TEAC.	20
II.5- Test de blanchissement du f3-carotène.	21
II.6- Méthode de tiocyante ferrique(FTC).	22
II.7- Piégeage du radical superoxyde (O2 .-).	23
II.8- Test ORAC ( Oxygen Radical Absorbance Capacity).	24
II.9- Piégeage du peroxyde d'hydrogène ( H2o2 scavening activity).	26
II.10- Méthode de la xantine oxydase.	27
II.11- Chélation du fer.	28
II.12- Méthode de DEPG ( N,N-dimethyl-p-phenylene diaminedihydrochloride.	28
II.13- Test qualitatif au f3-carotène.	29
II.14- Pouvoir réducteur.	30
II.15- Test de blanchiment de f3-carotène couplé à l'auto-oxydation de l'acide linoléique.	30
II.16- Capacité antioxydant totale (TAC).	31
II.17- Procédé de puissance de réduction (RP).	32
II.18- Piégeage du radical hydroxyle.	32
II.19- Peroxydation de l'acide linoléique.	33
II.20- Procédé de phosphomolybdène.	34
II.21- Test mesurant l'activité antioxydant au moyen de caroténoïdes.	35
II.22- Activité de piégeage de l'oxyde nitrique.	35
Conclusion.	37
Références bibliographiques.	39

Figure	Titre	Page
1	Classification des quelques métabolites secondaires (MUANDA, 2010).	3
2	Réaction de FENTON et de HABER-WEISS (PELLETIER et al., 2004).	6
3	Régulation de la production d'espèces réactives de l'oxygène par les systèmes de défenses antioxydants (MILBURY et RICHER, 2008).	7
4	Structure de l'acide ascorbique (DIALLO, 2005).	9
5	Structure de la vitamine E (DIARRA, 2006).	10
6	Structure de la â-carotène (DIALLO, 2005).	10
7	Structures chimiques des antioxydants naturels (EL KALAMOUNI, 2010).	13
8	Structure chimique du radical libre DPPH · (2,2 DiPhenyle-1-Picryl-Hydrazyle) (POPOVICI et al., 2009).	16
	917 Réaction de test DPPH (2.2 Diphenyl 1 picryl hydrazyl) (CONGO, 2012).
	1018 Schéma sur la réaction de test FRAP (Ferric reducing antioxidant power) (PRIOR et al., 2005).

Introduction

Nous ne pouvons survivre sans oxygène. Rares étaient ceux qui soupçonnaient récemment encore que ce souffle de vie pouvait également être mais en rapport avec nombre de maladies. Ce paradoxe de l'oxygène est une des phénomènes les plus curieux de la nature. Les effets nocifs de l'oxygène ne sont pas provoqués par l'oxygène en soi, mais par les espèces oxygénées réactives formées sur place. Celles-ci se créent notamment par pertes successives d'un électron de l'oxygène moléculaire conduisant à la formation du radical superoxyde, du peroxyde d'hydrogène et du radical hydroxyle (KOEN, 2004).

Les espèces oxygénées réactives oxydent lentement nos molécules biologiques. Heureusement, il existe un système de défense, le système antioxydatif. Ce réseau d'antioxydants, enzymatiques ou non, permet à notre corps de se défendre contre les substances réactives oxygénées (KOEN, 2004).

Les antioxydants sont des molécules capables d'interagir sans danger avec les radicaux libres et de mettre fin à la réaction en chaîne avant que les molécules vitales ne soient endommagées. Chaque molécule antioxydant ne peut réagir qu'avec un seul radical libre et par conséquent, il faut constamment refaire le plein de ressources antioxydants (PELI et LYLY, 2003).

Dans l'organisme, il existe plusieurs types de molécules à activité antioxydant : les enzymes antioxydants directement synthétisées par l'organisme (superoxyde dismutases, glutathion peroxydases, â catalase...) et les composés antioxydants d'origine exogène c'est-à-dire alimentaire (les vitamines A, C et E ; les caroténoïdes comme le lycopène et la lutéine ; la taurine ; les polyphénols ; certains minéraux et oligoéléments comme le magnésium, le zinc, le sélénium et le manganèse). Ces systèmes antioxydants interviennent en protégeant les cellules des dommages oxydatifs induits par les radicaux libres. Le principe de leur emploi pour prévenir l'apparition et le développement de certaines maladies dans lesquelles sont impliqués des phénomènes oxydatifs semble séduisant (PASTRE, 2007).

L'importance d'un système antioxydatif efficace est illustrée par la corrélation entre le stress oxydatif et certaines maladies, y compris des cancers, des maladies cardio-vasculaires et le

Aujourd'hui, les traitements à base de plantes reviennent au premier plan, car l'efficacité des médicaments tels que les antioxydants, les polyphénols et surtout les flavonoïdes sont des antioxydants puissants susceptibles d'inhiber la formation des radicaux libres et de s'opposer à l'oxydation des macromolécules (VAN ACKER et al., 1995 ; ISERIN, 2001).

Le présent travail porte sur une recherche des méthodes d'évaluation de l'activité antioxydant des plantes médicinales. Il comprend deux chapitres :