Annexe 3
UNIVERSITE CHEIKH ANTA DIOP
Faculté des Sciences et
Techniques
Département de Biologie Animale
Laboratoire Écologie Vectorielle et Parasitaire
(LEVP)
Protocole d'identification par PCR des espèces du
complexe Gambiae Témoin positif : Souche
insectarium (An. Coluzzii = Forme M)
Témoin négatif : eau ultra pure
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MASTER MIX
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Conditions
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amplification
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nombre de
tubes
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50
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réactif
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conc. Solution
mère
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volume (iil)
par tube
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volume MIX
en iil
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Eau
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9,1
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455
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5X Go Taq Buffer
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5
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250
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dNTP
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2,5 mM
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2,5
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125
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MgCl2
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25 mM
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0,5
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25
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IMP-UN
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F, 25 pmol/iil
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1
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50
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AR-3T
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R, 25 pmol/iil
|
1
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50
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GA-3T
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R, 25 pmol/iil
|
1
|
50
|
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ME-3T
|
R, 25 pmol/iil
|
1
|
50
|
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QD-3T
|
R, 25 pmol/iil
|
2
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100
|
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IMP-S1
|
R, 25 pmol/iil
|
1
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50
|
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IMP-M1
|
R, 25 pmol/iil
|
1
|
50
|
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Go Taq
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5,0 U/iil
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0,2
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10
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Total Master MIX
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1265
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Total Master MIX par tube: 25 ul
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Volume ADN par tube : 1 ul
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Référence : Wilkins et al.
2006
e
Bandes attendues : An. quadriannulatus: 637 pb
An. melas/merus: 529 pb
An. arabiensis: 388 pb
Forme M (An. coluzzii): 426 pb
Forme S (An. gambiae): 221 pb
Annexe 4
UNIVERSITE CHEIKH ANTA DIOP
Faculté des Sciences et
Techniques
Département de Biologie Animale
Laboratoire Écologie Vectorielle et Parasitaire
(LEVP)
Protocole de migration
Préparation de gel d'agarose 2%
- Peser 2g d'agarose pour 100 ml de tampon TBE
- Mélanger puis chauffer à la micro-onde
jusqu'à dissolution complète environ 2 min
- Laisser refroidir un instant et ajouter 5 ìl de biotium
dans le mélange et homogénéiser
Préparation de la Cuve à
électrophorèse
- Placer d'abord les peignes dans le moule puis couler le gel
- Attendre que le gel soit complètement solide avant de
retirer les peignes environ 40 min
- Placer le portoir de gel dans la cuve à
électrophorèse, remplir avec du tampon TBE 1X
- Charger les puits avec 5 ìl d'amplicon
mélangé avec du bleu de charge (sur parafilm)
- Mélanger 3 ìl de marqueur de taille et 2
ìl de dye sur le parafilm, bien homogénéiser puis
déposer le mélange dans les deux puits
extrêmes du gel.
- Couvrir la cuve avec les électrodes.
- Régler le générateur de courant à
80V et 400 mA puis le démarrer
- vérifier si le courant passe (petites bulles d'air au
niveau des électrodes)
- Laisser migrer l'ADN pendant 90 à 120 min.
- A la fin de la migration, éteindre le
générateur, enlever le couvercle et sortir le portoir pour
la lecture sur la table à UV (GeldocTM).
Titre : Etude de la dynamique des populations
d'Anopheles et de la transmission du paludisme dans le district
sanitaire de Nioro (Kaolack, Sénégal) après la campagne
d'aspersion intra-domiciliaire d'insecticide de 2015
Nom du candidat : Assane Yade Ndiaye
Nature du mémoire : Master en Biologie
animale spécialité : Entomologie Membres du Jury
:
Président : Pr Ousmane FAYE
LEVP/FST/UCAD
Membres : Dr Mamadou Demba SY
LEVP/FST/UCAD
Dr Libasse Gadiaga PNLP/MSAS
Dr Abdoulaye Diop Abt Associates
Superviseur : Dr Lassana Konaté
LEVP/FST/UCAD
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