I-2-1. Cytotoxicité de L.pneumophila
vis-à-vis des souches amibiennes
Afin d'étudier l'effet cytopathogène de
L.pneumophila, deux ratios ont été utilisés pour
les co-cultures. Les résultats obtenus nous ont permis d'observer un
taux de cytotoxicité important vis-à-vis des deux souches. Pour
le ratio de 0,1 à J1 (24 h) Legionella pneumophila a induit un
taux de mortalité d'amibes de l'ordre de 36% pour la souche SA1 et de
19% pour la souche SA2. Alors que pour le ratio de 10, nous avons trouvé
62% pour la souche SA1 et de 22 % pour la souche SA2. À J2 (48 h), le
nombre de trophozoïtes continue à diminuer jusqu'à la
moitié 50% pour la SA1 et jusqu'à 28% pour la souche SA2 au ratio
de 0,1. La diminution est de 70% pour SA1 et 40% pour SA2 au MOI de 10. La
confirmation de la mortalité des trophozoïtes est constatée
par un nombre de trophozoïtes dénombré à J3(72 h)
dans lequel nous observons une inhibition cytotoxique des amibes par
Legionella pneumophila qui atteint 68% et 48% pour la SA1 et SA2
respectivement au ratio de 0,1 et un taux d'inhibition de 72% et 62% pour la
souche SA1 et SA2 respectivement au ratio de 10. Donc, le rapport de
multiplicité d'infection à jouer le rôle de facteur
discriminant dans la mortalité des amibes, que ça soit pour la
souche amibienne 1 ou 2 avec une différence (résistance) de la
souches SA2 par rapport à la souche SA1.
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% cellules vivantes
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MOI 0,1
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100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10%
0%
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24h
48h
72h
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SA1 SA2
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Souches
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Figure 10:Taux de trophozoïtes vivants
après 72h de co-culture avec L.p MOI 0,1
Etude de la relation entre des bactéries Legionella et
des amibes 21
Chapitre 3: Résultats et discussions
% cellules
vivantes MOI 10
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100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%
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24h
48h
72h
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SA1 SA2
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Souches
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Figure 11: Taux de trophozoïtes vivants après
72h de co-culture avec L.p MOI 10 I-2-2. Affinité de
L.pneumophila pour le substrat (amibes)
Afin de calculer la constante d'affinité KS, la
linéarisation de Lineweaver et Burke, fondée sur le modèle
cinétique de Michaelis-Menten a été
élaborée. Elle permet d'approcher des valeurs des constantes de
croissance par l'équation :y = x/S + 1/u Où « S » est
la concentration en substrat (densité amibienne) et « 1/u »
est l'inverse de la vitesse de croissance.
-1,00E+00 -7,00E-01 -4,00E-01 -1,00E-01 2,00E-01 5,00E-01
8,00E-01
1/S ( amibe/bactérie)
1/u
20
40
30
50
60
10
70
0
y = 91,39x + 19,44 R2 =
0,906
y = 37,15x + 29,70
R2 = 0,537
SA1
SA2
Figure 12: La relation entre la vitesse spécifique
de croissance (u) de Legionella pneumophilla et du ratio initial
(bactéries/amibes)
Chapitre 3: Résultats et discussions
Dans ce cas, l'intersection entre la droite et l'axe des
ordonnées correspond à la valeur 1/pmax, alors que
l'intersection entre la droite et l'axe des abscisses correspond à la
valeur - 1/KS. KS est la constante d'affinité pour le substrat, en
d'autres termes il correspond au nombre d'amibes initiales nécessaires
pour que la bactérie Legionella pneumophila puisse
croître à une vitesse égale à la moitié de sa
vitesse maximale de croissance, pmax étant la valeur maximale
théorique de p pouvant être atteinte. Le tableau
ci-dessous résume l'ensemble des paramètres calculés.
Tableau 2: Valeurs de KS (bactéries/amibe) et umax
(h-1) à partir de la linéarisation
(-1/ks) 1/umax KS (bactéries/amibe) umax (h-1)
G=ln2/u R2
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SA1
|
-7,80E-01
|
29,5
|
1,2821
|
0,034
|
20,38
|
0,537
|
|
SA2
|
-2,10E-01
|
19,5
|
4,7619
|
0,051
|
13,59
|
0,906
|
La valeur de KS calculée est plus faible pour l'essai
avec la souche amibienne SA1 que pour la souche amibienne SA2. En particulier,
Legionella pneumophila semble donc avoir besoin d'une plus grande
quantité d'amibe de la souche amibienne SA1 par rapport à la
souche amibienne SA2 pour assurer une croissance rapide. Le fait que la valeur
de KS obtenue ici soit plus élevée pour Legionella
pneumophila vis-à-vis de la SA2 viendrait étayer que la
souche amibienne SA2 peut rapidement augmenter son activité
prédatrice. Cependant, cette observation n'est valable que si les
conditions (température ; souches), plus spécifiquement la
quantité de substrat (amibes) disponible, sont favorables. Les valeurs
de pmax sont corrélées aux valeurs de KS. En effet, la
vitesse spécifique de croissance maximale la plus élevée
correspond au KS le plus grand. Les temps de génération
correspondants sont de 20,38 heures pour Legionella pneumophila en
co-culture avec la souche amibienne SA1,et 13,59 heures en co-culture avec la
souche amibienne SA2. Ces données devront être
complétées par d'autres études. En effet, les
données de départ sont insuffisantes pour l'application du
modèle de Michaelis-Menten ou ce modèle ne peut pas s'appliquer
à la cinétique d'absorption de bactéries par les
amibes.
Etude de la relation entre des bactéries Legionella et
des amibes 22
Etude de la relation entre des bactéries Legionella et
des amibes 23
Chapitre 3: Résultats et discussions
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