Profil sérique du bilan lipidique de juillet 2023 au juin 2025 a Likasi

2.6.1.3 Echantillon

Sérum ou plasma

Le cholestérol est stable 7 jours entre 2-8°C ou 3 mois à 20°c.

2.6.1.4 Procédure

1. Longueur d'onde 510 nm (500-550) ; Température 37°C/15-25°c ; cuvette trajet optique 1 cm ;

2. Ajuster le zéro de l'instrument avec de l'eau distillée ;

3. Pipeter dans une cuvette.

	Blanc	Standard	Echantillon
Standard Echantillon Réactif	-- -- 1 ml	10ul -- 1 ml	-- 10ul 1 ml
Mélanger et incuber 10 min à 37°c ou 15 min à 15-25°c Mesurer les absorbances (Abs) de l'échantillon et du standard contre le tube blanc. La couleur est stable au moins 45 minutes.

2.6.1.5 Calcul

Facteur de conversion :

2.6.1.6 Valeur de référence

Evaluation du risque (adultes) :

Moins de 200mg/dl	Désirables
200 - 239 mg/dl	Suspectes hautes
240 mg/dl et au-delà	Élevées

Ces valeurs sont données à titre indicatif. Chaque laboratoire doit élaborer sa propre plage de référence.

2.6.3. CHOLESTEROL HDL DIRECT (Dosage enzymatique colorimétrique)

2.6.3.1. Principe

Le test HDL cholestérol ne nécessite pas de prétraitement de l'échantillon ou d'étape de fractionnement et mesure les taux de HDLC directement en utilisant des substances tensioactives spécialement formulés.

Le LDL, les lipoprotéines de très basse densité (VLDL) et les chylomicrons (CM) se lient avec le polyacide vinyle sulfonique (PVS) et le polyéthylène-glycol méthyle ester (PEGME), qui les rendent inaccessibles à la réaction avec le cholestérol oxydase (CHOD) et le cholestérol lestérase (CHE). Le HDL réagit avec les enzymes pour produire du H₂O₂ quantifié par la réaction de Trinder. L'intensité de la couleur est proportionnelle à la concentration du cholestérol HDL présent dans l'échantillon.

POD

CHOD/CHE

PVS/PEGME

2.6.3.2. Composition des réactifs

Réactif 1 Détergent	Tampon MES pH 6,5 .................................. TODB ................................................. Polyacide vinyle sulfonique (PVS) ............... Polyéthylène glycol méthyle ester (PEGME) ... MgCl2 ................................................. EDTA .......................................................... Détergent .....................................................	< 500 mmol/l < 50 mmol/l <50 g/l < 50 g/l < 50 mmol/l < 10 mmol/l < 2 %
Réactif 2 Enzymes	Tampon MES pH 6,5 ............................... Cholestérol estérase (CHE) ........................ Cholestérol oxidase (POD) ........................ Peroxydase (POD) .................................. 4 - Aminoantipyrine ............................... Détergent .............................................	< 500 mmol < 100 U/l < 100 U/l < 100 U/l < 50 mmol/l < 2 %
Réactifs additionnel (non inclus) :
Calibreur HDL/LDL Direct	HVC11................................................	1 1 ml

2.6.3.3. Echantillons

Sérum or plasma (EDTA, citrate, Li Héparine). Des échantillons à jeun et des échantillons pas à jeun peuvent être utilisés.

2.6.3.4. Procédure

1. Longueur d'onde 600 nm (560 - 600) ; Température 37°C ; Cuvette trajet optique 1 Cm

2. Ajuster le zéro de l'instrument avec de l'eau distillée

3. Pipeter dans une cuvette :

	Blanc	Standard	Echantillon
Standard Echantillon Eau Distillée Réactif 1	-- -- 10ul 750ul	10ul -- -- 750ul	-- 10ul -- 750ul
Mélanger et incuber 5 min à 37°C Mesurer l'absorbance (Abs 1) du calibrateur et des échantillons par rapport au blanc. Ajouter :
Réactif 2	250ul	250ul	250ul
Mélanger et mettre à incuber pendant 5 min à 37°C Mesurer l'absorbance (Abs 2) par rapport au blanc

2.6.3.5. Calcul

Calculer

2.6.5.6. Valeurs de référence

Niveau de risque :

Moins de 400mg/dl	Elevé
40 - 59 mg/dl	Modérément élevé
= 60 mg/dl	Pas de risque

2.7. CHOLESTEROL LDL (dosage enzymatique colorimétrique)

2.7.1. Principe

Le test LDL ne nécessite pas de prétraitement de l'échantillon ou d'étape de fractionnement et mesure les taux de LDL-C directement en utilisant des substances tensioactives spécialement formulées. Le dosage comprend deux étapes ; au cours de la 1^ère étape, les chylomicrons, les VLDL et les HDL sont éliminés dans les conditions spécifiques de ces lipoprotéines. Le cholestérol dérivé de ces lipoprotéines, mais non pas des LDL. Au cours de la 2^ème étape, le LDL-C restant peut être dosé spécifiquement comme formation de couleur (pigment quinone) après une série de réductions enzymatiques.

2.7.2. Composition des réactifs

Réactif 1 Enzymes	PIPES pH 7,0 Cholestérol estérase (CHE) Cholestérol oxydase (CHOD) Catalase TOOS	50 mmol/l = 600 U/l = 500 U/l = 600 KU/l 2 mmol/l
Réactif 2 Enzymes	PIPES Ph 7,0 4-AA Peroxydase (POD)	50 mmol/l 4 mmol/l = 4 KU/l
Calibrateur HDL/LDL	Sérum lyophilisé	Conc. Sur l'étiquette

2.7.3. Echantillon

Utiliser du sérum, du plasma héparinisé ou du plasma EDTA comme échantillon. Si un échantillon a des précipités, centrifuger avant de son utilisation.

Stabilité : 6 jours entre 2 et 8°C. Ne pas congeler les échantillons.

2.7.4. Procédure

1. Longueur d'onde 600 nm (590-700) ; Température 37°C ; cuvette trajet optique 1 cm ;

2. Ajuster le zéro de l'instrument avec de l'eau distillée ;

3. Pipeter dans une cuvette.

	Blanc	Standard	Echantillon
Calibrateur Echantillon Réactif 1	-- -- 750 ul	10 ul -- 750 ul	-- 10 ul 750 ul
Mélanger et mettre à incuber pendant 5 min à 37°C Ajouter
Réactif 2	250 ul	250 ul	250 ul
Mélanger et mettre à incuber 5 min à 37°C. Mesurer l'absorbance (Abs) par rapport à un réactif à blanc.

2.7.5. Calcul

2.7.5. Valeur de référence

Niveaux de risque :

Moins que 100 mg/dl	Normal
130 - 160 mg/dl	Modéré
160 mg/dl and above	Elevé

Ces valeurs sont données à titre indicatifs. Chaque laboratoire doit élaborer sa propre plage de référence.

2.8. Triglycéride

2.8.1. Principe de la méthode

LPL

les triglycérides dans l'échantillon sont hydrolysés de manière enzymatique en glycérol et acides gras libres. Le glycérol libéré est d'abord phosphorylé par le glycérol kinase et est ensuite oxydé par glycérol - 3 - phosphate oxydase, libérant d'une quantité équivalente de l'eau oxygénée (H₂O₂). Le H₂O₂ participe à une réaction de Trinder modifiée, qui entraîne la formation d'un colorant quinoneimine rouge. L'intensité de la couleur formée est proportionnelle à la concentration de triglycérides de l'échantillon.

GK

Triglycérides + 3H₂O Glycérol + 3 acides gras

GPO

Glycérol + ATP Glycéroles-3-phosphate + ADP

POD

Glycérol - 3 - phosphate + O₂ Dihydroxyacétone - P + H₂O

H₂O₂ + 4 - AAP + DHBS Colorant de Quinoneimine + 2 H₂O

2.8.2. Composition des réactifs

Réactif	Pipes pH7,0 DHBS Lipoprotein lipase (LPL) Glycérol kinase (GK) Glycérol - 3 - phosphate oxidase (GPO) Peroxidase (POD) 4 - Aminoantyrine (4 - AAP) ATP	50 mmol/l 1 mmol/l 1500 U/l 700 U/l 1500 U/l 2000 U/l 0,8 mmol/l 1,5 mmol/l
Standard	Triglycérides aqueux (en glycérol)	200 /dl

2.8.3. Echantillon

Sérum ou plasma. Le Triglycéride est stable 5 jours entre 2-8°C.

2.8.4. Procédure

1. Longueur d'onde 510 nm (500-550) ; Température 37°C/15-25°C ; cuvette trajet optique 1 cm ;

2. Ajuster le zéro de l'instrument avec de l'eau distillée ;

3. Pipeter dans une cuvette.

	Blanc	Standard	Echantillon
Standard Echantillon Réactif	-- -- 1 ml	10ul -- 1 ml	-- 10ul 1 ml
Mélanger et incuber 5 min à 37°C ou 10 min à 15-25°C Mesurer les absorbances (Abs) de l'échantillon et du standard contre le tube blanc. La couleur est stable au moins 30 minutes.

2.8.4.1. Calcul

Facteur de conversion :

2.8.4.2. Valeur de référence

Evaluation du risque (adultes) :

< 150 mg/dl	Normal
150 - 199 mg/dl	Elevé
200 - 499 mg/dl et au-delà	Hyperglycéridémique
> 499 mg/dl	Très élevé

Ces valeurs sont données à titre indicatif. Chaque laboratoire doit élaborer sa propre plage de référence.