II.2.3. Préparation
de l'inoculum
- A l'aide d'une anse préalablement flambée puis
refroidie, prélever une colonie sur Sabouraud ;
- Ensemencé sur la pente de sabouraud incorporer des
extraits de feuille de papaye ;
- Incuber à 27°C, pendant 24 heures, pour observer
si les colonies ont poussés.
II.2.4. Evaluation du
pouvoir antifongique.
Nous avons utilisé deux méthodes :
- La méthode de dilution (incorporer l'extrait dans le
milieu de sabouraud) ;
- La méthode de diffusion (Imprégnation des
diques).
II.2.4.1. méthode de
dilution
· préparer le milieu de sabouraud en
réduisant la quantité d'eau prévue par le fabriquant.
· Prévoir la quantité d'extrait
nécessaire à l'antifongigramme.
· Stériliser à l'U.V. pendant 30
minutes.
· Couler dans les tubes ou boites
stérilisés à l'eau 120° pendant 15 minutes.
· refroidir le milieu sans le laisser se solidifier, dans
les conditions aseptique, mélanger les extraits stérilisés
à l'U.V., au milieu de sabouraud laisser se solidifier.
· à l'aide d'un écouvillon, ensemencer en
stries serrés la surface du milieu.
· incuber à l'étuve à 37°c
pendant 24 à 48 heures.
· lire les résultats en vérifiant la pousse
des colonies.
II.2.4.2. Méthode de
diffusion
Nous y avons pratiqué deux techniques :
- technique par puits
- technique par disque
Ø technique par puits
· préparer et couler le milieu de sabouraud dans
les boites des pétries, dans les conditions aseptiques, creuser des
petits puits de 6mm de diamètre, sans atteindre le fond de la
boite ;
· A l'aide d'un écouvillon stérile,
ensemencer l'inoculum sur toute la surface du milieu ;
· En se servant d'une pipette pasteur placée dans
chaque puits un goute de extrait (cas concentrations différentes dans
les trous différents) ;
· Incuber des boites à l'étuve à
37° pendant 24 heures à 48 heures ;
· lire les résultats en cherchant les zones
d'inhibition autour des puits.
Ø technique par disque
· tremper le disque de 6 mm de diamètre dans les
extrait de concentration connue;
· Préparer et couler le milieu de sabouraud dans
les boites de pétrie ;
· à l'aide d'un écouvillon stérile
ensemencer en strie serrée l'inoculum sur toute la surface du milieu
dans les conditions aseptiques retirer les disques des extraits et les
appliquer sur la surface du milieu ;
· Incuber à 37° pendant 24 heures à 48
heures ;
· lire les résultats en cherchant les zones
d'inhibition autour des disques.
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