IV.2.4.2. IDENTIFICATION DES GROUPES CHIMIQUES
A. RECHERCHE DES ALCALOIDES
Principe
La mise en évidence des alcaloïdes consiste
à les précipiter à l'aide de ces réactifs de
précipitation (15).
Mode opératoire
1 gramme de poudre de matière végétale
est mise à macérer dans 10ml de méthanol à
température ambiante pendant 24 heures et à l'étuve
à 50°C pendant 4 heures. La solution obtenue est filtrée,
lavée avec de portions de méthanol chaud, et est
évaporée à sec à l'étuve à
50°C.
Le résidu est recueilli 2 fois par 2ml de solution
chaude d'acide chlorhydrique 1% et est ensuite filtré.
La solution d'acide obtenue est alcalinisée par
l'ammoniaque concentrée dans une ampoule à décanter.
Ajouter 4 ml de chloroforme dans l'ampoule à décanter. Deux
phases se forment. Agiter puis reposer pour séparer les phases.
Répéter trois fois les opérations. La phase organique est
évaporée à sec à l'air libre et le résidu,
repris par 0,5 ml de chloroforme, est transféré dans un tube
à hémolyse. Ajouter dans ce tube 0,5 ml de HCl 1% et agiter. Les
alcaloïdes ayant été protonés sont supposés se
trouver dans la phase aqueuse. Celle-ci, qui est au dessus, est
prélevée à l'aide d'une pipette Pasteur. Six gouttes en
sont déposées sur une lame porte-objet. Chacune de ces gouttes
est traitée par l'un de six réactifs de précipitation
décrits ci-haut.
La présence d'alcaloïdes n'est
considérée comme certaine que si chacun de six réactifs
donne un précipité. La méthode permet de détecter
jusqu'à des teneurs d'alcaloïdes inferieurs à 0,01% sur une
prise d'échantillon de 1 gramme (17).
B. RECHERCHE DES
FLAVONOIDES
Principe
L'extrait aqueux flavonoïde donne, en présence de
l'acide chlorhydrique concentré et de copeaux de magnésium, une
coloration rose-rouge et rouge violacé dans la couche surnageante
d'alcool isoamylique (15).
Mode opératoire
5 grammes de matériel végétal
placés dans un Erlenmeyer sont infusés dans 50ml d'eau
distillé pendant 30 minutes. Après filtration, 5 ml de filtrat
sont traités par l'alcool éthylique à 97%, puis on y
ajoute successivement 5 ml d'eau distillée, 5 ml d'HCl, quelques gouttes
d'alcool isoamylique et 0,5g de copeaux de magnésium.
La coloration rose-orange, rouge ou rouge violet apparait dans
la couche surnageante si la solution contient les flavonoïdes (17).
C. RECHERCHE DES QUINONES
Principe
Les quinones sont mises en évidence par une
réaction de coloration caractéristique qui se produit dans une
base forte en occurrence de NaOH 1% ou KOH (17).
Mode opératoire
5 grammes de matériel végétal en poudre
sont macérés pendant une heure dans le benzène ou pendant
24 heures dans l'éther de pétrole. Après filtration, 10 ml
de filtrat benzénique ou étherique sont traités par 5 ml
de NaOH 1%. L'apparition d'une coloration rouge indique la présence de
quinones dans la solution (17).
D. RECHERCHE DES STEROIDES ET TERPENES
Principe
En présence de l'acide acétique anhydre et de
l'acide sulfurique concentré, l'extrait organique
éthéré contenant les stéroïdes donne des
colorations mauves ou vertes. L'identification des terpénoides suit
le même schéma en plus de l'ajout du réactif de Hirschson
(Acide trichloracétique). La couleur jaune virant au rouge indique la
présence de terpénoides (17).
Mode opératoire
5 grammes de matériel végétal sont mis
à macérer pendant 24 heures dans l'éther de pétrole
ou dans le benzène. Après filtration, le solvant est
évaporé à sec. Dans le résidu obtenu, on ajoute
successivement et en agitant, 2 ml de chloroforme, 0,5ml d'anhydride
acétique et trois gouttes d'acide sulfurique concentré.
L'apparition des colorations mauves et vertes indique la présence des
stéroïdes.
L'identification des terpénoides suit le même
schéma que celui des stéroïdes. En plus du test
utilisé pour la recherche des stéroïdes, quelques gouttes de
réactif de Hirschson sont ajoutées à 4 ou 5 ml de la
solution acidifiée. La coloration jaune virant au rouge indique la
présence de terpénoides (17).
E. RECHERCHE DES SAPONINES
Principe
La détection de saponines est basée sur le
pouvoir moussant. Pour une mousse non persistante, on teste le filtrat avec
un mélange à volume égal d'acide sulfurique 1N et le
dichromate de potassium 10%. L'apparition d'une coloration vert-sale ou
violette virant au rouge (15).
Mode opératoire
Dans un Erlenmeyer contenant 10 grammes de matériel
végétal, on ajoute 100ml d'eau distillée que l'on porte
à ébullition pendant 30 minutes. Après refroidissement,
filtrer la solution. 15 ml du filtrat sont recueillis dans un pied
gradué et versé dans un tube à essai de 16 mm de
diamètre et 160 mm de hauteur. Le contenu du tube à essai est
agité pendant 10 secondes.
Laisser ensuite reposer la solution pendant 10 minutes puis
mesurer la hauteur de la mousse (17).
F. RECHERCHE DES HETEROSIDES CYANOGENETIQUES
Principe
En présence d'acide cyanhydrique, le papier
picrosodé de couleur jaune vire à l'orange ou au rouge suivant la
concentration de HCN (15).
Mode opératoire
5grammes de matière végétale sont
placées dans un Erlenmeyer avec 10 ml d'eau distillée.
Fermer cet Erlenmeyer avec un bouchon auquel est fixé
une bandelette de papier picrosodé légèrement
humectée d'eau. Chauffer légèrement la solution (17).
G. RECHERCHE DES TANINS
Principe
En présence de chlorure ferrique 1% les extraits aqueux
tannoïdes donnent de colorations bleu-vert, bleu sombre et verte ou des
précipités (17).
Mode opératoire
5 grammes de matériel sont infusés dans 50ml
d'eau contenue dans un Erlenmeyer pendant 30 minutes. 5 ml de l'infusé
sont prélevés et mis dans un tube à essai ou on ajoute 1
ml de chlorure ferrique 1%. Le test est positif lorsqu'un
précipité ou une coloration (bleu-vert, bleu sombre ou verte)
apparait, 15ml de réactif de Stiasny sont ajoutés à 30 ml
de l'infusé, le mélange est porté au bain marie à
90°C. L'apparition d'un précipité indique la présence
de tanins catéchiques. La solution est ensuite filtrée, le
filtrat est saturé d'acétate de sodium avant d'y ajouter quelques
gouttes de chlorure ferrique. La formation d'un précipité dans ce
cas révèle la présence de tanins galliques (17).
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