II.5.2 Méthodes
II.5.2.1 L'interrogatoire des
parents ou tuteurs
Les responsables des enfants préalablement
informés et consentants étaient soumis à un questionnaire
(voir annexe 3) par l'investigateur principal et/ou les enquêteurs.
II.5.2.2 Le
prélèvement et l'examen biologique des selles
v Collecte des selles
Pour chaque enfant inclus dans l'étude, un
échantillon de selles fraiches a été prélevé
dans une boite stérile telle qu'habituellement effectué pour les
examens de routine et acheminé au laboratoire d'analyse médical
de l'hôpital. Des écouvillonnages rectaux été
réalisés chez les nouveau-nés et les enfants chez qui il
été difficile d'obtenir un échantillon de selles par
émission normale. L'acheminement des selles au laboratoire se faisait
immédiatement après la collecte par l'investigateur principal
à l'aide d'un porte vaccin contenant les pots de coproculture, sur
lesquels étaient mentionnés les éléments
d'identification des enfants (codifiés), accompagnés de la fiche
de suivi au laboratoire conçue pour la cause. Sur chaque
échantillon de selle deux types de tests ont été
effectués: la recherche des virus et la recherche des parasites
intestinaux (formes végétatives, oeufs et kystes (KOAP).
v Examens biologiques des selles
Les examens biologiques ont été
réalisés sur les paillasses de sérologie et de
parasitologie du laboratoire l'Hôpital Régional de Bertoua. Pour
le bon déroulement de l'étude il a été
établit au sein du laboratoire un protocole qui contenait les
procédures à suivre concernant les techniques.
- Recherche des parasites dans les
échantillons de selles prélevés
Cet examen a été fait dans l'heure qui suivait
l'arrivée des prélèvements au laboratoire. Il s'agissait
d'un examen simple sans concentration. Nous faisions : un examen macroscopique
qui permet de classer les selles selon leur aspect en (pâteuses,
semi-liquides avec présence ou non de glaire, liquides) et leur couleur
(jaunâtre, verdâtres, brune, blanchâtre,
décolorée) ; un examen direct entre lame et lamelle à
l'état frais dans du sérum physiologique, puis dans une solution
de Lugol.
· Principe
L'examen direct dans du sérum physiologique permet de
mettre en évidence les formes végétatives, vivantes et
mobiles des protozoaires ainsi que leurs kystes, mais également les
oeufs ou les adultes des helminthes. L'observation de toute la lame se fait
d'abord a l'objectif 10× puis a l'objectif 40×. La coloration (au
Lugol) permet d'une part de différencier les kystes
d'Entamoebahistolytica(noyaux colore en jaune) de ceux
d'Entamoeba coli, et d'autre part de bien distinguer les kystes de
Giardia (forme du kyste bien nette).
· Mode opératoire
Nous avons prélevé à plusieurs endroits
(2 à 3 endroits selon l'aspect des selles) de l'échantillon de
selle une petite quantité de selle. Ce prélèvement a
été étalé sur une lame porte objet portant une
goutte d'eau physiologique à une extrémité et une goutte
de Lugol à l'autre, puis les étalements ont été
recouvert par des lamelles 22x22, et les préparations (non
épaisses) ont été observées au microscope optique
respectivement à l'objectif 10× et 40× en commençant
par celle faite avec le sérum physiologique.
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