Fractionnement des protéines sériques par électrophorèse sur gel polyacrylamide

Annexe 2:

Préparation des gels
(Quantités pour une cuve de deux gels)

Gel de séparation (running gel):

Acrylamide à 35% 35 ml

Bis acrylamide à 2 % 6 ml

Eau distillée 16.6 ml

Tris-HCL pH 8.8 37.6 ml

SDS à 10 % 1 ml

APS à 1% 2.5 ml

TEMED 50 ul

Gel de concentration (stacking-gel):

Acrylamide à 35 % 3.42 ml

Bis acrylamide à 2 % 0.86 ml

Eau distillée 30.4 ml

Tris-HCL pH 6.8 5 ml

SDS à 10 % 0.4 ml

APS à 1 % 2 ml

TEMED 40 ul

Annexes	122
Annexe 3: Solutions utilisées pour la PAGE Solution mère d'acrylamide à 35% (à prépare avec gants et masque): Acrylamide 35 g Eau distillée 100 ml Solution mère de bis acrylamide à 2% (à préparer avec gants et masque): Bis acrylamide 2 g Eau distillé 100 ml Solution d'APS (Ammonium Persulfate) à 1%: A préparer ex temporairement APS 0.1 g Eau distillée 10 ml Tampon Tris HCL pH 8.8 (à préparer sous la hotte, avec gants et masque): Tris (hydroxyméthyl aminomethan) 60.57 g Eau distillée QSP 400 ml Ajuster à pH 8.8 avec du HCL fumant 8 à 10 ml Eau distillée QSP 500 ml Tampon Tris HCL pH 6.8 (à préparer sous la hotte, avec gants et masque): Tris (hydroxyméthyl aminomethan 30.285 g Eau distillée QSP 200 ml Ajuster à pH 8.8 avec du HCL fumant 19.5 ml Eau distillée QSP 250 ml Tampon d'électrophorèse: Glycine 70.55 g Tris (hydroxyméthyl aminomethan) 15 g Eau distillée QSP 5000 ml
Belaouar Hamza/Lamri Adlène

Annexe 4:

Solutions utilisées pour l'Acide-PAGE

Préparation du gel (à prépare avec gants et masque):

Acrylamide 12 ml

Bis acrylamide 12 ml

Tampon lactate d'aluminium 1.6 ml

Eau distillé 57.5 ml

Accélérateur:

Acide Ascorbique 80 ul

Sulfate ferreux 08 ul

Catalyseur:

Eau oxygénée 0.73 ml

Tampon d'électrophorèse:

Glycine 70.55 g

Tris (hydroxyméthyl aminomethan) 15 g

Eau distillée QSP 5000 ml
Solution de coloration:

Acide trichloracétique (TCA) 60 % 30 g

Solution mère de Bleu de Coomassie R250 12.5 ml

Eau distillée QSP 250 ml

Solution mère de Bleu de Coomassie R250:

Bleu de Coomassie R250 10 g

Ethanol 95° QSP 1000 ml

Annexes

124

L'éthanol doit être mis en agitation dans l'éprouvette, avec un barreau aimanté. Le bleu de Coomassie est ensuite ajouté (sinon le bleu prend en masse au fond du contenant).Laisser en agitation au moins deux heurs, puis filtrer la solution.

Les solutions d'extraction pour les 3 méthodes:

Méthode d'électrophorèse Solution d'extraction

PAGE -2.4g urée.

-0.100256g de DTT. -2ml Glycérol.

-0.005% Triton x100

SDS-PAGE -2.125 ml solution Stock*

-0.05g de DTT.

-QSP (5ml) H₂O pure.

Acide-PAGE -1.96 ml NN'de méthyle Formamid.

-2g Saccharose.

-QSP (10ml) eau distillé.