E- TAUX DE CD4/CD8
C'est un examen hématologique plus
précisément cytologique réalisé
généralement chez les personnes suspectés
séropositifs ou chez les personne déprimés et/ou
présentant un système immunitaire affaibli.
1- Matériels
Comme matériels nous avons :
- Une seringue stérile - Un tube à EDTA
- Une micropipette - Un incubateur
- Des embouts - Un portoir
- Un crayon gras - Un perforeur
- Des réactif CD4/CD8 - Un vortex
- L'eau distillée - Papier hygiénique
- Un Cytomètre équipé d'une imprimante,
d'un tube absorbant, d'un clavier et d'un portoir
2- Mode opératoire
- préparer la solution du malade,
- homogénéiser les réactifs après
avoir homogénéiser,
- percer les flacons contenant le réactif à l'aide
du perforeur,
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Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
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- homogénéiser le sang du patient
prélevé dans un tube à EDTA,
- homogénéiser et incuber pendant une heure
à l'abri des rayons solaires,
- y introduire la solution de fixation (50ul de CD4 et50ul de
CD8) et incuber pendant 5à10minutes,
- introduire à tour de rôle les réactifs CD4
puis les réactifs CD8 comme demander par la machine,
- la machine donne les résultats sur un format quelques
minutes après.
II- EXAMENS DES PARAMETRES BIOCHIMIQUES ET DOSAGE
ENZYMATIQUES
A- EXAMENS DES PARAMETRES BIOCHIMIQUES
Il s'agit d'une série de dosages nous permettant de
quantifier les éléments présents dans le plasma et dans
l'urine. Pour ce qui est de notre cas nous allons nous limiter au dosage de
certains ions et certaines molécules.
1- La calcémie
Elle représente le taux de calcium sanguin et se dose dans
un échantillon de sanguin prélevé chez un individu
à jeun et conservé dans un tube sec ou contenant de
l'héparine.
a- Matériels et réactifs
Les matériels nécessaires sont les suivants :
- Un échantillon de sang - Des tubes à essais
- Une centrifugeuse - Un portoir
- Un spectrophotomètre - Une micro pipette de 1000 ul
- Des embouts - Une solution de standard
- Deux réactifs R1et R2
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b- Mode opératoire
Le mode opératoire est le suivant :
- centrifuger les échantillons de sang pour avoir le
sérum,
- préparer la solution de travail (4000 ul de
réactif 1 +1000 ul de réactif 2),
- répartir la solution de travail dans les tubes malade,
tube blanc et tube standard,
- introduire 20 ul de solution standard dans le tube standard,
- introduire chaque échantillon de sérum dans un
tube malade,
- incuber pendant 5 minutes,
- introduire dans la machine la solution de blanc pour le
calibrage,
- faire suivre le standard et tours à tours les
échantillons à doser puis lire les valeurs affichées
à l'écran du spectrophotomètre.
2- Dosage de la créatinine
a- Principe
En milieu alcalin, la créatinine donne avec l'acide
picrique une coloration jaune-orangée. La vitesse de
développement de la coloration est proportionnelle à la
concentration en créatinine.
b- Méthodologie
La procédure se déroule comme suit (Tableau 2) :
Tableau 2 : Méthodologie de dosage de la
créatinine
|
Tubes
|
Blanc
|
Standard
|
Echantillon
|
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Réactif 1
|
1000 ìl
|
1000 ìl
|
1000 ìl
|
|
Echantillon
|
/
|
/
|
50 ìl
|
|
Standard
|
/
|
50 ìl
|
/
|
- mélanger, incuber pendant 5 min à 37° c et
ajouter 250 ìl du réactif 2.
- mélanger, lire l'absorbance initiale (Standard), puis
l'absorbance (Echantillon).
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