4.2. Recherche des spores de Clostridium
sulfito-Réducteur (ISO 66 49)
Principe :
Les Clostridium sulfito-réducteurs sont mis en
évidence en utilisant la gélose viande foie (VF) à quelle
on ajoute le sulfite de sodium (milieu sélectif des Clostridium
qui réduisent les sulfites en sulfures) et l'alun de fer qui permettent
la formation d'un complexe noir entre le fer et le sulfite réduit par
les Clostridium.
Mode opératoire :
Fondre un flacon de gélose de VF, le refroidir dans un
bain d'eau à 45°C et ajouter une ampoule d'alun de fer et une
ampoule de sulfite de sodium mélanger soigneusement et aseptiquement, le
milieu est ainsi près à l'emploi, mais il faut le maintenir dans
une étuve à 45°C jusqu'au moment de l'utilisation.
Ensemencement :
Les tubes contenant les dilutions 10-1,
10-2, 10-3 seront soumis, d'abord à un chauffage
dans un bain marie à 80°C pendant 8 à 10 min, puis à
un refroidissement immédiat sous l'eau de robinet.
A partir de ces dilutions, porter aseptiquement 1 ml de chaque
dilution en double dans deux tubes à vis de 16 mm de diamètre,
puis ajouter dans chaque tube environ 15 ml de la gélose VF prête
à l'emploi. Laisser solidifier sur la paillasse pendant 30 min puis
incuber les tubes à 37°C pendant 16, 24 et 48 heures.
Lecture :
La première lecture doit se faire impérativement
à 16 h car :
? Il faut absolument repérer toute colonie noir ayant
poussé en masse et d'un diamètre supérieur à
0.5mm.
? Dans le cas où il n'y a pas de colonies
caractéristique ré-incuber les tubes et effectué une
deuxième lecture au bout de 24 h et 48h.
Matériel et méthodes
Dilution 10-1 Dilution 10-2 Dilution
10-3
Chauffage dans un bain marie à 80C pendant 8 à 10
min.
Refroidissement immédiat sous l'eau de robinet.
1 ml 1ml 1 ml
Ajouter dans chaque tube environ 15 ml de la gélose VF
prêt à l'emploi.
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Laisser sur solidifier sur la paillasse pendant 30 min.
Incubation dans l'étuve à 37°C pendant 16h 24h
et 48h.
Lecture
Figure13 : Etapes de recherche des spores de Clostridium
sulfito-Réducteur.
Matériel et méthodes
4.2. Recherche et dénombrement des
moisissures
Les moisissures sont des champignons filamenteux,
aérobie, acidophile (pH=3à 7 et mésophile, se
développe sur les aliments à faible activité d'eau
(JO n°35/1998).
Principe :
Pour l'isolement des moisissures, on utilise le milieu
sélectif OGA (gélose glucosé additionnée d'un
antibiotique sélectif l'Oxytétracycline).
Mode opératoire :
Préparation du milieu : fondre préalablement un
flacon de gélose OGA, puis le refroidir à 45°C et couleur
dans 3 boites de pétri et laisser solidifier sur paillasse.
Ensemencement :
La technique d'ensemencement en surface c'est-à-dire 4
gouttes de dilutions10-1, 10-2, 10-3, sont
mises sur milieu solide OGA.
À l'aide d'un écouvillon en place quatre goutte
pour chacune des boites.
Deux autres boites de pétri sont
considérées comme témoin de OGA et de l'eau physiologique
stérile (ensemencement en surface après avoir mis 4 gouttes de
eau physiologique stérile).
Incubation : à 20-25°C pendant 5
jours.
Lecture : des colonies sont épaisses,
pigmentées ou non, parfois envahissantes.
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Matériel et méthodes
Dilution10-1 dilution10-2
dilution10-3
4 gouttes 4 gouttes 4 gouttes
Sur la gélose OGA on fait étalement des 4 gouttes
avec un râteau stérilisé
Incubation des boites avec les couvercles en haut à une
température ambiante (25°C) pendant 5 jours
Figure 14 : Etape Recherche et dénombrement des
moisissures.
Matériel et méthodes
5. Dosage des composés
phénoliques
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