2.3.4 Détermination
du pourcentage de déstabilisation des extraits actifs
Le mécanisme d'action de l'effet antibactérien a
été évalué pour les extraits ayant
présenté une inhibition sur toutes les souches
bactériennes testées. Ainsi, le test de
perméabilité de la membrane externe a été
effectué.Il a été déterminé
selon la méthode décrite par Hao et al., (2009). Dans
une microplaque de 96 puits, des concentrations de CMI et 2CMI de chaque
extrait ont été préparées en triplicata par
dilution en série. Cent microlitres (100ìl) de suspension de
chaque souche ont été ajoutés et la plaque a
été incubée à 37 °C pendant 24 h. Les
densités optiques ont été lues à 405 nm
(longueur d'onde à laquelle la forme complexe entre les
lipopolysaccharides et les cations divalents stabilisateurs de membrane absorbe
les cations divalents).Le pourcentage de déstabilisation a
été calculé à l'aide de la formule
ci-dessous :
%D = [(Ao - As) Ao] x 100
Avec %D : Pourcentage de déstabilisation?;
Ao : Absorbance du contrôle négatif?;
As : absorbance des échantillons testés.
L'imipénème a été utilisée
comme contrôle positif et a été préparée de
manière égale à la CMI (0,0781 ìg/mL) et 2CMI
(0,1562 ìg/mL). Le MHB et la suspension des bactéries ont
constitué le contrôle négatif tandis que le contrôle
de stérilité contenait MHB seul. Les puits contenant le bouillon
Mueller Hinton et les extraits seuls ont constitué le blanc. Un
graphique du %D par rapport à la concentration de l'extrait a
été tracé afin de déterminer la concentration qui
provoque une déstabilisation maximale de la membrane.
2.3.6.
Analyses statistiques
Les données collectées ont été
présentées en tableaux et en graphes avec respectivement les
logiciels Excel et Graph Pad. Les statistiques descriptives ont
été réalisées grâce au logiciel SPSS 20.
Le test ANOVA a été utilisé pour la comparaison des
moyennes. Les comparaisons ont été faites au seuil de
significativité de 5 %.
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