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Evaluation in vitro des propriétés antifalcémiantes et antihémolytiques de l'extrait aqueux de spirulina platensis (oscillatoriaceae) du Cameroun


par Apollinaire TEGUEM TCHOULEGHEU
Université Yaoundé 1 - Master 2 2019
  

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ANNEXES

A

ANNEXES

Annexe I : Autre M a t é r i e l

Cellule d e M a l a s s e z , s p e c t r o p h o t o m è t r e (J e n w a y ) , balance électronique ( J A 2 0 0 3 N ) ,

lyophilisateur, microscope ( Olympus), centrifugeuse ( 9 0 - 3 ) , lame, lam elle, papier aluminium, tubes à e s s a i s , t u b e s E D T A , tubes e p p e n d o f f , barreau aim a n t é ( R o u c a i r e ) , a g i t a t e u r m a g n é t iq u e

( I K A - C M A - H S 7 ) , balance électrique ( M E T T L E R TOLEDO E L 6 0 2 ) , p H mettre, ( P H S - 5 5 0 ) ,

v o l t e x ( T o p r i x F B 1 5 0 2 4 ) , papier filtre w a t t m a n 4 , ainsi que les a u t r e s v e r r e r i e s d e laboratoire.

Annexe I I : Pourcentage d e f a l c i f o r m a t i o n e n fonction d u temps d'incubation à l a c o n c e n t a t io n

1 6 0 0 u g / m L d'extrait.

T é m o i n n é g a t i f

Annexe III : Pourcentages e t taux d e réversibilité d e l a f a l c i f o r m a ti o n obtenus après 2 h à différente s concentrations.

Concentrations ( u g / m L )

Initial

Témoin ( - )

1 0

0

 

2 0 0

 

4 0 0

 

8 0 0

 

1 6 0

0

% d e f a l c i f o r m a t i o n extrait

5 4 , 4

6

6 4 , 9

 

4 5

, 8 5

 

4 4 , 2

 

3 9 , 4

1

3 4 , 5

 

3 2 ,

8 6

après 2 h ( % )

#177; 3 , 2

5

#177; 1 , 3

 

#177; 1

0 , 1

7

#177; 6 , 9

6

#177; 7 , 9

8

#177; 4 , 1

0

#177; 4

, 8 2

% d e f a l c i f o r m a t i o n

phénylalanine après 2 h ( % )

5 4 , 4

#177; 3 , 2

6

5

6 4 , 9

#177; 1 , 3

 

4 6

#177; 3

, 3 5

, 7 3

 

4 1 , 4

#177; 2 , 3

4

1

4 1 , 2

#177; 3 , 7

1

3

3 7 , 9

#177; 4 , 3

4

8

2 4 ,

#177; 1 ,

4 7

6 7

Taux d e réversibilité extrait

a p r è s 2 h ( % )

0 0 , 0

#177; 0 , 0

0

0

- 1 9 ,

#177; 1 , 2

1 7

9

1 5

#177; 1

, 2

, 1 4

 

1 5 , 1

#177; 1 , 7

6

1

2 8 , 1

#177; 3 , 3

5

4

3 7 , 5

#177; 6 , 3

4

5

3 9 ,

#177; 2 .

7 5

3 1

Taux d e réversibilité d e

phénylalanine après 2 h ( % )

0 0 , 0

#177; 0 , 0

0

0

- 1 9 ,

#177; 1 , 2

1 7

9

1 0

#177; 2

, 4 4

, 9 9

 

2 3 , 2

#177; 2 , 9

6

5

2 4 , 6

#177; 9 , 9

1

3

3 2 , 1

#177; 3 , 2

6

5

4 5 ,

#177; 8 ,

9 6

8 1

Annexe I V : Pourcentages e t taux d e réversibilité d e l a f a l c i f o r m a t io n obtenus après 4 h à différente s concentrations.

B

Concentrations ( u g / m L )

Initial

Témoin (-)

1 0 0

 

2 0

0

 

4 0 0

 

8 0 0

 

1 6 0 0

 

% d e f a l c i f o r m a t io n extrait

5 4

,4

6

6 7

,8 2

 

3 7 ,0

1

3 3

,1 1

 

2 7 ,8

9

3 0 ,4

5

2 2 ,0

5

après 4 h ( % )

#177; 3

,2

5

#177; 3

,1

 

#177; 4 ,8

 

#177; 2

,0 2

 

#177; 3 ,6

8

#177; 3 ,8

4

#177; 3 ,9

7

% d e f a l c i f o r m a tio n

5 4

,4

6

6 7

,8 2

 

4 1 ,4

4

3 1

,1 6

 

3 3 ,4

5

3 1 ,6

5

2 0 ,4

9

p h é n y l a l a n i n e a p r è s 4 h ( % )

#177; 3

,2

5

#177; 3

,1

 

#177; 1 ,3

5

#177; 2

,7 5

 

#177; 5 ,1

8

#177; 4 ,1

3

#177; 3 ,2

6

Taux d e réversibilité extrait

0 0

,0

0

- 2

4 ,5

3

2 4 ,9

2

3 9

,0 4

 

4 8 ,9

3

4 4 ,2

2

5 9 ,3

8

après 4 h ( % )

#177; 0

,0

0

#177; 5

, 2 1

 

#177; 4 ,0

2

#177; 1

7 ,3

6

#177; 6 ,8

0

#177; 6 ,8

3

#177; 7 ,4

2

Taux d e réversibilité d e

0 0

,0

0

- 2

4 ,5

3

2 3 ,6

8

4 1

,7 6

 

3 8 ,8

4

4 2 ,0

2

5 5 ,3

7

phénylalanine après 4 h ( % )

#177; 0

,0

0

#177; 5

,2 1

 

#177; 8 ,8

1

#177; 3

,2 5

 

#177; 9 ,9

3

#177; 2 ,9

5

#177; 2 ,9

9

Annexe V : Pourcentages e t taux d e réversibilité d e l a f a l c i f o r m a t i o n obtenus après 2 4 h à différente s concentrations.

C o n c e n t r a t i o n s ( u g / m L )

Initial

T é m o i n ( - )

1 0 0

 

2 0

0

 

4 0

0

 

8 0 0

 

1 6 0 0

 
 
 
 
 

7 2

,0 2

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

% d e f a l c i f o r m a t io n extrait

5 4

,4

6

 
 
 

3 6 ,0

3

2 8

,6

 

2 4

,9

1

1 3 ,6

1

9 ,5 7

 
 
 
 
 

#177; 1

,2

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

après 2 4 h ( % )

#177; 3

,2

5

 
 
 

#177; 5 ,3

5

#177; 6

,1 5

 

#177; 3

,4

 

#177; 4 ,5

4

#177; 3 ,1

0

 
 
 
 

7 2

,0 2

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

% d e f a l c i f o r m a tio n

5 4

,4

6

 
 
 

3 7 ,5

1

3 5

,1 6

 

2 5

,5

9

2 3 ,0

9

2 0 ,4

9

 
 
 
 

#177; 1

,2

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

phénylalanine après 2 4 h ( % )

#177; 3

,2

5

 
 
 

#177; 4 ,7

8

#177; 5

,4 7

 

#177; 3

,0

1

#177; 3 ,4

7

#177; 3 ,2

5

 
 
 
 

- 3

2 ,2

4

3 3 ,7

6

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Taux d e réversibilité extrait

0 0

,0

0

 
 
 
 
 

4 7

,4 3

 

5 4

,0

6

7 4 ,8

9

8 2 ,3

4

 
 
 
 

#177; 3

,6 2

 

#177; 1 0

,2

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

après 2 4 h ( % )

#177; 0

,0

0

 
 
 
 
 

#177; 1

1 ,0

5

#177; 7

,1

4

#177; 8 ,5

3

#177; 5 .6

3

 
 
 
 
 
 
 

2

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

- 3

2 ,2

4

3 1

,6

2

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Taux d e réversibilité d e

0 0

,0

0

 
 
 
 
 

4 5

2

,6

 

4 9

,0

3

6 2

,4

5

7 7

,4

4

 
 
 
 

#177; 3

,6 2

 

#177; 1 1

,2

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

phénylalanine après 2 4 h ( % )

#177; 0

,0

0

 
 
 
 
 

#177; 5

,2 9

 

#177; 8

,4

4

#177; 8 ,0

3

#177; 3 ,2

2

 
 
 
 
 
 
 

7

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

C

Annexe V I : Notice d'informations des participants e t c o n s e n t e m e n t éclairé pour participer à

l ' é t u d e .

N o t i c e d ' i n f o r m a t i o n s des participants

TITRE: Investigation des propriétés a n t i f a l c é m iantes i n vitro d e l'extrait aqueux d u s p i r u l i n a p l a t e n i s

Investigateur Principal: T E G U E M T C H O U L E G H E U APO LL I NAIRE ( étudiant e n

M aster B i o c h i m i e , f a c u l t é des s c i e n c e s , u n i v e r s i t é d e Yaoundé I

T é l : 6 9 3 1 3 2 7 9 0 mail: t e g u e m a p o l l i n a ir e @ g m a il .o m

E n c a d r e u r : P I E M E CONSTANT A N A T O L E ( M a i t r e d e Conférence à l'université d e Y a o u n d é 1 ) .

1 - But d e l'étude.

Cette recherche a pour but d ' i n v e s t i g u e r l'effet a n t i f a l c é m i a n t e s e t a n t i o x y d a n t e s i n vitro d e l'extrait aqueux d u s p i r u l i n a p l a t e n s i s

2 - P r o c é d u r e .

L a procédure suivante devra être respectée:

- une fiche d'identification v o u s s e r a r e m i s e e t i l y aura u n entretien entre vous e t l ' i n v e s t i g a t e u r;

- une petite quantité d e sang ( 4 ,5 m l ) sera prélevée dans u n tube contenant d e l ' E D T A par

ponction veineuse à votre pli d u coude par u n personnel q u a l i f i é , a p r è s nettoyage préalable d e

l ' e n d r o i t p a r l ' a l c o o l . L e sang collecté sera acheminé a u Laboratoire d e Biochimie d e l a Faculté d e M é d e c i n e e t des Sciences Biomédicales ( F M S B ) d e l'Université d e Yaoundé l o ù les tests a n t i f a l c i m i a n t s seront effectués.

3 - Participation.

L a participation à l'étude est volontaire. Vous êtes libre d'accepter o u d e refuser. Une fois engagée dans l ' é t u d e , v o u s pouvez à t o u t m o m e n t l a q u i t t e r s a n s être c o n t r a i n t d ' y rester.

4 - Bénéfice éventuel.

S i les résultats escomptés sont c o n f i r m é s , i l s ' a g i t l à d'un départ p o u r l a mise a u point d'un

m é d i c a m e n t a n t i f a l c é m i a n t e à base des algues.

Cela devra perm e t t r e à brève échéance d'initier l e t r a i t e m e n t d e l a d r é p a n o c y t o s e .

C o n f i d e n t i a l i t é .

Les résultats issus d e notre étude constitueront une base d e données qui sera exploitée par les

i n v e s t i g a t e u r s , p r é s e n t é e p u b l i q u e m e n t ( dans l e cadre d e l a soutenance d e M aster) e t m ê m e publiée dans des journaux e t revues scientifiques e t n e fera jamais l'objet d'une forme d e m a r k e t i n g .

5 - Risques potentiels.

Très peu d e risques, voire aucun n'est connu à l'exception d e l a petite douleur qu'on pourra r e s s e n t i r p e n d a n t l a prise d e sang. Cette prise sera effectuée par u n p e r s o n n e l m é d i c a l qualifié ( infirmier o u technicien d e laboratoire), e n r e s p e c t a n t l a procédure standard avec m a t é r i e l s t é rile e t à usage unique.

6 - Recours é v e n t u e l .

S i a u cours d e cette étude vous croyez avoir été l é s é , n ' a v o i r pas e u les bénéfices p o t e n t i e l s , o u bien n'avoir pas été informé d e certains aspects néfastes liés à l'étude o u à votre droit bafoué, vous serez libre d e vous plaindre auprès d u directeur d e l'institution hospitalière, auprès d u Comité National d ' E t h i q u e o u d u M i n i s t è r e d e l a Santé Publique a u Cam e r o u n .

7 - Com p e n s a t i o n .

L a participation à cette étude est libre e t non payante. L a fiche individuelle, l e form u l a i r e d e c o n s e n t e m e n t é c l a i r é e t les protocoles d'analyses vous s e r o n t d o n n é s g r a t u i t e m e n t . A u s s i b i e n , les participants à cette étude n e devront pas être payés.

C o n sente m e n t éclairé.

a - Reconnaissance d e l'investigateur.

j e soussigné ... ... ... ... ... ... ... ... .... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... a v o i r informé l e

participant ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... s u r l a nature, l e caractère volontaire, les bénéfices éventuels d e l'étude, l a procédure devant être utilisée pour s a réalisation, e t les risques éventuels quelques minimes qu'ils soient. I l lui a été demandé d e poser des questions sur les différents aspects d e l ' é t u d e . L e s réponses ont été c l a i r e s , p r é c i s e s e t sans ambiguïté.

D

b - D é c l a r a t i o n d u participant.

J e soussigné ...................................................déclare avoir été bien inform é d e l a nature, d e l a procédure, des bénéfices e t risques éventuels d e l'étude « investigation des propriétés a n t i f a l c i m i a n t e s i n vitro d e l'extrait aqueux d u s p i r u l i n a p l a t e n s i s » . J ' a c c e p t e d e participer v o l o n t a i r e m e n t à cette étude e t j e serai libre d e l a quitter à tout moment sans porter préjudice aux bénéfices que j e pourrai e n tirer des résultats d e l'étude.

I n v e s t i g a t e u r P a r t i c i p a n t o u r e p r é s e n t a n t l é g a l d u patient

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"Il faudrait pour le bonheur des états que les philosophes fussent roi ou que les rois fussent philosophes"   Platon