1.2.1. Mesures
1.2.1.1. Enquêtes parasitologiques
+ Les paramètres physiques des animaux étaient
déterminés au moment ou après le prélèvement
sanguin. Le sexe et l'état corporel étaient
déterminés par examen visuel direct, l'âge de l'animal
était celui donné par l'éleveur.
+ L'hématocrite est défini comme le pourcentage
de globules rouges dans un volume donné de sang. Il permet de
caractériser le degré d'anémie. Il a été
déterminé après centrifugation à 12 000
tours/minute pendant 10 minutes de tubes capillaires à
hématocrites remplis au 4/5e de leur volume avec du sang
prélevé à partir de la veine jugulaire (le
prélèvement sanguin est fait à l'aide d'une aiguille
vacutainer montée sur un tube contenant de l'EDTA). Les valeurs de
l'hématocrite sont directement lues à l'aide d'un abaque de
lecture SIGMATM.
+ Les examens parasitologiques
La méthode d'examen du "Buffy-coat" ou
méthode de Murray (Murray et al., 1977) et la méthode du
frottis sanguin ont été utilisées pour rechercher la
présence de parasites dans le sang périphérique des
animaux. La méthode de l'ELISA-indirect a été
utilisée pour détecter des anticorps anti-trypanosomes dans le
plasma des animaux (preuve d'une infection récente ou passée).
La méthode du frottis sanguin consiste à
étaler une goutte de sang sur une lame et fixer à l'alcool
(méthanol) puis colorer au Giemsa. La lame est ensuite observée
au microscope (objectif X100) avec de l'huile d'immersion pour l'identification
des parasites.
La méthode de Buffy-coat (MBC) : après la
lecture de la valeur de l'hématocrite (technique décrite plus
haut), on coupe le tube capillaire à l'aide d'une pointe en diamant
à 1 mm environ en dessous de la couche de globules blancs. Le
matériel biologique (interface globules/plasma) est ensuite
observé entre lame et lamelle au microscope (objectif X40) à fond
noir. La parasitémie est ensuite exprimée en nombre de parasites
par champ microscopique ou nombre de parasites sur 40 champs. Ces valeurs sont
ensuite converties en nombre de trypanosomes par millilitre de sang selon le
tableau de correspondance établi par Paris et al. (1982).
La méthode d'ELISA-indirect : le plasma est obtenu par
centrifugation du sang des bovins à 12 000 tours/minute pendant 10
minutes. Le principe est de sensibiliser des microplaques ELISA en
polystyrène à fond plat par des antigènes solubles de
Trypanosoma spp (5 ug/ml) extraits du parasite (par
ultra-centrifugation). Les immunoglobulines spécifiques des
sérums positifs se fixent sur les antigènes et forment des
complexes incolores, qui sont reconnus par des antiglobulines de bovins
couplés à la peroxydase de Raifort. La révélation
est faite à l'aide d'un complexe substrat/révélateur (eau
oxygénée/ABTS pour la peroxydase). Pour les échantillons
négatifs, le lavage exporte le conjugué et le puits reste
incolore à la révélation. La lecture des plaques est faite
à l'aide d'un spectrophotomètre du type MCC/340 à 405 nm
relié à un ordinateur. Les densités optiques (DO) obtenues
sont exprimées en Pourcentage de Positivité Relative (PPR) par
rapport à des échantillons de références positifs
et négatifs dont PPRB pour T. brucei brucei, PPRC pour T.
congolense, PPRV pour T. vivax. La formule du PPR est la suivante
:
Moyenne DO (échantillon) - moyenne DO (témoin
négatif)
PPR = x 100
Moyenne DO (témoin positif) - moyenne DO (témoin
négatif)
Les résultats des trois tests ont été
interprétés par le score maximum de positivité. Le score
de PPR le plus élevé des trois indique avec une très forte
probabilité la présence d'anticorps dirigés contre l'un au
moins des parasites rencontrés par l'hôte (Desquesnes et
al., 1999).
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