2. Méthodes
2-1. Prélèvements des échantillons
sanguins
Chez chacune des femmes recrutée, un
prélèvement de sang par ponction veineuse franche recueilli sur
un tube sec et sur un tube avec anticoagulant (EDTA) de 5 ml chacun, est
effectué à jeûn au pli du coude le matin. Par ailleurs, il
est réalisé chez les femmes enceintes à chaque trimestre
de la grossesse (entre 8 et 15 semaines d'aménorrhée pour le
premier trimestre, entre 16 et 28 semaines d'aménorrhée pour le
second trimestre, enfin 29 et 36 semaines d'aménorrhée pour le
troisième trimestre). La détermination des paramètres
hématologiques est effectuée immédiatement à partir
des prélèvements sur les tubes EDTA par un analyseur
hématologique automatique Sysmex-Poch 100 i (1-5-1
Wakinohama-Kaigandori, Chuo-Ku, Kobe 651-0073, Japon). Les
prélèvements contenus dans les tubes secs, sont
centrifugés à 3000 tours/min pendant 5 min et le sérum est
aliquoté, puis conservé à - 20° C pour le dosage des
paramètres biochimiques. Les concentrations sériques de fer sont
déterminées par la méthode colorimétrique tandis
que les teneurs sériques de transferrine et de ferritine sont mises en
évidence par la méthode immunoturbidimétrique. La
capacité totale de fixation du fer par la transferrine
(CTF) et le coefficient de saturation de la transferrine par
le fer (CST) sont déduits par le calcul (Vernet et
al., 1981).
Chaque dosage d'échantillon sanguin du même
prélèvement est dupliqué pour réduire les
éventuelles erreurs de manipulations. Et la moyenne des 2 valeurs
obtenues est utilisée pour la suite de l'étude.
2-2. Dosages des paramètres biologiques
Les dosages des échantillons sanguins sont
effectués selon les techniques de dosages hématologiques et
biochimiques. Ainsi 11 paramètres biologiques comprenant 6 variables
hématologiques et 5 indicateurs biochimiques sont analysés.
2-2-1. Techniques hématologiques
Les échantillons sanguins prélevés sur
anti-coagulant EDTA, ont permis directement de réaliser la
numération globulaire (le nombre de globules rouges, les taux
d'hémoglobine et d'hématocrite) et à estimer les indices
érythrocytaires (VGM, TCMH et CCMH) par un analyseur
hématologique automatique Sysmex-Poch 100 i. En effet, le sang obtenu
sur anti-coagulant EDTA, est dilué avec du pocH-pack-D (diluant) dans un
bac de comptage de l'automate dans lequel est déterminé le nombre
de globules rouges par la méthode de détection cellulaire. Un
volume fixe de la lyse, pocH-pack-L (un volume de lyse pour 2 volumes du
diluant) est ensuite ajouté automatiquement pour obtenir une dilution
finale au 1/500. L'adjonction du pocH-pack-L, lyse les globules rouges et
réduit le stroma cellulaire résiduel à un niveau non
détectable par l'appareil. L'hémoglobine est
libérée pendant la lyse des globules rouges et convertie en
méthémoglobine. Une partie de cet échantillon
dilué, est automatiquement transférée vers le
photomètre de l'appareil dans lequel l'absorption du pigment
respiratoire est mesurée pour déterminer sa concentration.
L'autre partie de l'échantillon dilué, est utilisée par le
microprocesseur de l'automate pour déterminer les indices
érythrocytaires.
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