2-2-2-2. Dosage de la transferrine sérique
La transferrine dans les échantillons de sérum
est analysée par la technique immunoturbidimétrique en fonction
du kit « Transferrin Immunoturbidimetric ».
2-2-2-2-1. Principe du dosage de la transferrine
La transferrine est une â-globuline, une
glycoprotéine de poids moléculaire de 75000 daltons
synthétisée par le foie. Dans le sang, son dosage consiste
à mettre en présence d'un échantillon de sérum, un
anticorps antitransferrine. La présence dans le sérum de
transferrine a entraîné la formation d'un complexe trouble
transferrine-antitransferrine. Ce complexe trouble est mesuré par
l'automate Lisa Bio 300. L'intensité de turbidité de ce complexe
était proportionnelle à la concentration de la transferrine dans
l'échantillon de sérum.
2-2-2-2-2. Détermination des concentrations
sériques de transferrine
Le tampon « Tris » et l'anticorps
antitransferrine sont associés pour former le réactif de travail
dans les proportions 1/41. L'étalon est préparé selon la
double dilution proposée par le fabriquant à partir du
kit « Transferrin
Immunoturbidimetric » (Figure 9). Selon cette
technique, 6 tubes à hémolyse numérotés de 1
à 6 sont utilisés pour effectuer les manipulations. Le premier
tube contenait 600 ul de soude 9 g/l et 100 ul d'étalon de fer. Les
autres tubes en contenaient 300 ul de soude 9 g/l et aucun étalon.
Trois cents ul du tube 1 sont ajoutés au contenu du
tube 2. La même méthode de dilution successive est
répétée jusqu'au tube 5. Des dilutions au 1/7, 1/14, 1/28,
1/56 et 1/112 sont donc réalisé respectivement dans les tubes 1,
2, 3, 4 et 5. Ces dilutions sont associées respectivement aux facteurs
3 ; 1,5 ; 0,75 ; 0,38 et 0,19 (Figure 9). Les
concentrations des différentes solutions étalonnées sont
obtenues en multipliant la valeur de la concentration type de l'étalon
de fer (7 g/l) par les différents facteurs. L'échantillon de
sérum et le contrôle sont dilués au 1/21 avec de la soude 9
g/l et le contenu de chaque tube est préparé en fonction du mode
opératoire décrit dans tableau VII. Dix minutes
après l'adjonction du réactif de travail, le contenu de chaque
tube est mélangé de façon modérée. La
détermination des différentes teneurs de transferrine est
effectuée par l'automate LisaBio 300 (Hycel groupe, Pouilly en Auxois,
France) après la construction de la courbe d'étalonnage. Le
contrôle des concentrations sériques de transferrine est
réalisé selon le kit de contrôle de sérum,
« Protein Serum ». Les valeurs limites de contrôle
des concentrations sériques de transferrine sont comprises entre 0,9 et
1,34 g/l et celles de référence entre 2 et 3,6 g/l selon le kit
« Transferrin Immunoturbidimetric ».
Figure 9: Méthode de dilution de
l'étalon de transferrine
Tubes : 1 2
3 4 5
6
NaCl (ul) : 600 300
300 300 300
300
Etalon (ul) : 100 -
- - -
-
Dilution : 1/7 1/14
1/28 1/56 1/112
-
Facteurs : 3 1,5
0,75 0,38 0,19
-
Conc. (g/l) : 21 10,50
5,25 2,66 1,33
-
300 ul 300 ul
300 ul 300 ul
Tableau VII: Mode opératoire pour
la lecture des concentrations sériques de transferrine
|
Réactifs
|
Tube
blanc réactif
de travail
|
Tube
étalon de transferrine
|
Tube
échantillon
de sérum
ou de contrôle
|
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NaCl 9 g/l (ul)
|
50
|
-
|
-
|
|
Etalon de transferrine (ul)
|
-
|
50
|
-
|
|
Echantillon de sérum ou de contrôle dilué
(ul)
|
-
|
-
|
50
|
|
Réactif de travail (ul)
|
1000
|
1000
|
1000
|
- : Le tube à analyser n'a pas reçu le
réactif concerné
| 
