II.7) Colonie PCR :
C'est une PCR qui s'effectue directement sur une colonie
bactérienne permettant ainsi un criblage rapide et fiable des clones
transformés.
Une
colonie est resuspendue directement dans le mélange réactionnel
de la PCR, chauffée pendant 4 min à 95°C (hot start), on
effectue par la suite une PCR comme déjà décrit.
II.8) Préparation des plasmides :
II.8.1) Préculture
bactérienne :
A partir d'un stock de bactéries, des colonies sont
isolées par ensemencement sur boîte de LBLS(Luria Bertani Low Solt
Medium) contenant 20% d'agar et de zéocine à 25
ug/ml.
Une
colonie isolée est incubée dans 5 ml de milieu LBLS à 25
ug par ml de zéocine pendant une nuit à 37°C sous agitation
de 220 rpm.
Cette
préculture sert à ensemencer 50 ml de milieu LBLS liquide qui
seront incubés dans les mêmes conditions.
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