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Importance du prélèvement sanguin en hémostase:observations faites au cnhu de cotonou

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par DOUGNON Victorienet HOUNGUE Cyriaque
Université d'Abomey Calavi - Licence professionnelle en analyses biomédicales 2008
  

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    Importance de la qualité du prélèvement sanguin en hémostase : Observations faites
    au Centre National Hospitalier Universitaire Hubert Koutoukou MAGA de Cotonou

    INTRODUCTION GENERALE

    L'Ecole Polytechnique d'Abomey-Calavi (EPAC) dans le souci de donner une formation de qualité à ses étudiants en Analyses Biomédicales a instauré un stage pratique de fin de formation en vue de compléter les cours théoriques.

    Ainsi, notre stage de fin de formation s'est déroulé dans le département LABORATOIRE du CNHU du 02 juin 2008 au 03 août 2008. Ce département est composé de cinq services à savoir la Biochimie, la Parasitologie, la Banque de Sang (BDS), la Bactériologie et l'Hématologie dans lesquelles nous avons travaillé à chaque fois pendant deux semaines.

    Tous les matins, nous étions à la salle de prélèvement commune aux services du LABORATOIRE et nous avons constaté que de nombreux prélèvements étaient systématiquement rejetés, particulièrement ceux destinés aux examens d'hémostase. Ceci nous a motivé à choisir le thème : « Importance de la qualité du prélèvement sanguin en hémostase : Observations faites au Centre National Hospitalier Universitaire Hubert Koutoukou MAGA (CNHU-HKM) de Cotonou »

    Les objectifs visés par ce travail sont les suivants :

    OBJECTIF GENERAL

    Montrer l'importance de la qualité du prélèvement sanguin en hémostase.

    OBJECTIFS SPECIFIQUES

    - Identifier les défauts du prélèvement sanguin réalisé par certains services du CNHU-HKM.

    - Apprécier les atouts du prélèvement sanguin réalisé par la salle de prélèvement des laboratoires.

    - Montrer l'impact d'un mauvais prélèvement sur les tests de l'hémostase.

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    Importance de la qualité du prélèvement sanguin en hémostase : Observations faites
    au Centre National Hospitalier Universitaire Hubert Koutoukou MAGA de Cotonou

    Pour ce faire, nous aborderons le problème suivant le plan ci-après :

    - Première partie : Généralités sur le prélèvement sanguin au laboratoire et plus spécifiquement sur le prélèvement sanguin destiné aux examens d'hémostase.

    - Deuxième partie : Cadre et méthodologie de travail - Troisième partie : Résultats et commentaires.

    Nous achèverons notre étude par une conclusion et émettrons des suggestions.

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    Importance de la qualité du prélèvement sanguin en hémostase : Observations faites
    au Centre National Hospitalier Universitaire Hubert Koutoukou MAGA de Cotonou

    I- Importance de la phase pré-analytique spécifique aux

    prélèvements sanguins

    1- Définition et importance

    La phase pré-analytique est l'ensemble des facteurs qui peuvent influencer le résultat d'un échantillon avant analyse. Une bonne application des règles permet de réduire l'anxiété du patient tout en augmentant l'efficacité et la précision du préleveur.

    Les prélèvements biologiques défectueux obligent à refaire le prélèvement et entraînent des coûts supplémentaires en personnel, en matériel, en temps et en énergie. Si une anomalie n'est pas détectée ou signalée, il est fort possible que les résultats soient erronés et eux-mêmes responsables d'examens complémentaires inutiles et pouvant porter préjudice au patient.

    La non-conformité a un coût élevé. Ce coût est estimé à 25 % du budget annuel du matériel de prélèvement. La non-conformité des échantillons peut avoir pour conséquence d'endommager les analyseurs [4].

    2- Qui est impliqué ?

    Trois facteurs importants interviennent dans le processus préanalytique. Le premier facteur est le facteur temps. Il représente 20 % du processus diagnostique [4].

    Le deuxième facteur est celui représenté par les personnes. Dans ce processus participe un certain nombre d'intervenants, à savoir le personnel infirmier, le personnel de laboratoire, les médecins, les techniciens...

    Le troisième facteur reprend les différents chaînons du processus qui va de la prescription du médecin à la saisie des données, du prélèvement proprement dit au transport...

    3- Importance de la phase préanalytique

    Une méthode de travail prédéfinie par les acteurs principaux, à savoir les enseignants, les instances médico-hospitalières, permettrait de définir un processus adéquat de prélèvement pour chaque situation. Cela réduirait de manière significative les erreurs depuis la prescription des prélèvements jusqu'à l'analyse de l'échantillon prélevé. Les cinq points ci-dessous, constituent probablement les points sensibles qui pourraient être améliorés :

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    au Centre National Hospitalier Universitaire Hubert Koutoukou MAGA de Cotonou

    - Les informations cliniques reprises sur la prescription doivent être libellées de manière précise, lisible et sans équivoque. Dans le cas contraire, il est fort possible et même probable qu'il y ait un risque de mauvaise interprétation ou que les actes posés soient erronés. De même, les résultats ainsi obtenus seraient sans rapport avec la demande initiale et mèneraient immanquablement à un retard de diagnostic.

    - La prise de contact, l'identification ainsi que la préparation du patient à elles seules sont sources de 22 % d'erreurs importantes dans la phase préanalytique [2].

    - Les conditions et mode de prélèvement revêtent une importance essentielle dans la détermination des résultats, la pose du diagnostic et le choix éventuel d'un traitement (exemples : la gestion des veines difficiles, la gestion de l'écoulement difficile, les essais répétés, ...)

    - L'identification des échantillons est une étape importante du processus de prélèvement. Ceux-ci doivent être dûment étiquetés, identifiés et comporter les informations suivantes : date de naissance, nom de jeune fille, sexe, nature de l'échantillon, nom du préleveur, date et heure de prélèvement, traitements éventuels suivis par le patient, degré d'urgence de l'analyse.

    - Le transport devrait être effectué de manière optimale afin que le prélèvement ne subisse aucune modification ; il devrait se faire dans des délais brefs et à température ambiante. Un soin particulier en cas de transport par pneumatique est à conseiller, car ce mode de transport peut provoquer l'activation plaquettaire et par conséquent une hémolyse [4].

    4- Quelques statistiques

    D'après Narayanan et coll., les erreurs les plus communément commises avant, pendant et après les prélèvements sont principalement :

    - phase pré-analytique : représente 85 % des erreurs ;

    - demande de reprélèvement : #177; 5 % ;

    - tubes périmés utilisés : 9 % ;

    - tubes mal identifiés : 22 % ;

    - tubes non conforme : 17 % ;

    - tubes manquants : 17 % ;

    - tubes souillés + contact sang : 31 % ;

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    au Centre National Hospitalier Universitaire Hubert Koutoukou MAGA de Cotonou

    - la phase préanalytique est impliquée dans 68 % des erreurs en coagulation !

    La détection d'erreurs est estimée de manière globale à 0,11 % (pour la coagulation à 0,47 %), ce qui en soi pourrait sembler une marge d'erreurs peu significative.

    Remarque : Si nous prenons l'exemple de la coagulation, nous constatons que la marge d'erreur grimpe à 0,47 %. A l'inverse, l'implication de la phase préanalytique dans la marge d'erreurs rétrograde à 68 %. Dans la conscience collective, la coagulation est incontestablement le point d'attention ! [2].

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    II- Facteurs d'influence et procédure de prélèvement

    Les facteurs d'influence et la procédure de prélèvement peuvent modifier les valeurs jusqu'à plus ou moins 50 %, voire augmenter certains paramètres de 30 fois leur valeur ! [2].

    1- Facteurs importants d'interprétation

    Dans les valeurs de référence, devraient être repris l'âge, le sexe, la race, des facteurs qui peuvent avoir une influence sur les paramètres suivants : hémoglobine, acide urique, bilirubine, phosphatase alcaline, cholestérol, LDL, HDL... En ce qui concerne la race, les paramètres suivants peuvent subir une influence à savoir amylases, granulocytes, monocytes...

    Le patient a-t-il pris un repas récemment ? L'idéal est d'effectuer le prélèvement douze heures après l'ingestion d'aliments, car certains paramètres comme le glucose, les triglycérides, la Vitesse de Sédimentation... peuvent être influencés. L'heure idéale de prélèvement se situe entre 7 et 9 heures du matin et en tout cas avant 12 heures, car les paramètres suivants peuvent être influencés : cortisol, fer, calcium, magnésium, phosphore...

    Idéalement, il faut attendre 12 heures après un exercice musculaire pour effectuer un prélèvement, car les paramètres suivants peuvent être influencés : lactates, Créatine PhosphoKinase...

    Il est important de s'assurer de l'existence ou non d'une situation de stress, car les paramètres suivants peuvent être influencés : cortisol, hormones thyroïdiennes...

    Les facteurs principaux qui influencent les prélèvements sont la grossesse, l'obésité, l'alcool, le cycle menstruel, la contraception orale, le tabac, la caféine, les médicaments.

    La prise de sang doit s'effectuer avant les soins ou/et la prise de médicaments. Si le patient prend des médicaments, il faut prendre en compte le pic sérique, choisir l'état stationnaire pour faire le prélèvement. Dans le cas d'un bilan préopératoire, la surveillance du traitement, du bilan thyroïdien et du bilan cardiaque est importante.

    Afin que le prélèvement se fasse de manière optimale, le patient sera en position couchée ou allongée, éventuellement assis. Pour certains paramètres, des variations pouvant aller jusqu'à plus ou moins 50 % sont observées si le patient change de position. En position debout, les variations s'échelonnent de 5 à 15 %. Les variations observées lors de la préparation du prélèvement (de

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    l'ordre de plus de 15 %) peuvent être dues au choix du garrot, à une mauvaise utilisation ou un mauvais placement. La position idéale du garrot se situe à plus ou moins dix centimètres au-dessus du site de prélèvement.

    L'ordre des tubes doit être respecté, ainsi que le volume de remplissage. Le taux d'erreurs est estimé à #177; 2 % [2]. Étant donné les nouvelles normes des fabricants, le mélange des tubes doit être effectué maximum 2 minutes après prélèvement, et cela concerne tous les tubes.

    Le stockage ainsi que le transport des tubes devraient se faire en position verticale à température ambiante. La température de conservation et de transport se situe idéalement entre 4 °C et 23 °C.

    Il faut respecter le temps de rétraction du caillot pour les tubes sérum, à savoir 30 minutes à température de la pièce. Cela permet d'éviter la postcoagulation et le risque de blocage des automates. Les tubes sérum devraient être centrifugés au plus tard 1 heure après le prélèvement.

    2- Conseils pour une bonne procédure de prélèvement

    Il est impératif de toujours respecter les principes de sécurité et d'hygiène. Le patient doit être pris en charge toute la durée de la prise de sang. Les étapes à respecter sont les suivantes :

    1. Identification du patient et contrôle des dispositions physiques.

    2. Analyse de la demande et des informations du patient.

    3. Rassurer le patient et le positionner.

    4. Préparation du matériel : choix des tubes et des anticoagulants, aiguilles, cathéters...

    5. Le patient doit avoir la main fermée et le préleveur doit choisir le site de prélèvement de manière appropriée.

    6. Désinfecter le site de prélèvement.

    7. Placer le garrot (type Terumo), relâcher au plus tard après 1 minute.

    8. Introduire l'aiguille dans un angle se situant entre 15° et 30°.

    9. Prélever les tubes en respectant l'ordre approprié.

    10. Relâcher le garrot dès le remplissage du 1er tube.

    11. Mélanger calmement, au plus tard 2 minutes après le prélèvement.

    12. Déposer le dernier tube rempli sur le portoir avant de retirer le holder et l'aiguille.

    13. Retirer aiguille/holder, détacher le garrot, main ouverte.

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    14. Appliquer une compresse, une pression sur la veine bras tendu et appliquer un pansement.

    15. S'assurer des complications éventuelles en rapport avec la phlébotomie.

    16. Appliquer le contrôle de qualité avec la vérification de la conformité des tubes prélevés, et mélanger 5 à 10 fois calmement pour éviter l'hémolyse.

    17. Étiquetage immédiat des tubes.

    18. Envoi rapide en respectant les spécificités de demande du laboratoire.

    19. Température de conservation et de transport de 4 °C à 23 °C (transport idéal: en position verticale).

    3- Ordre des tubes

    Il est impératif, afin d'éviter des interférences par transfert des additifs entre les tubes via l'aiguille ou le bouchon, de respecter un ordre lors des prélèvements.

    Pour éviter les interférences, il suffit de suivre de manière scrupuleuse les conseils ci-dessous:

    - supprimer le pompage ;

    - l'aiguille doit être introduite au plus tard 1 minute après la pose du garrot. Relâcher le garrot dès le reflux du sang dans le premier tube ;

    - changer de bras s'il faut repiquer ;

    - en cas de reflux sanguin, il faut incliner le tube vers le bas afin d'éviter le contact du sang avec le bouchon et l'aiguille ;

    - le stockage doit se faire en position verticale pour éviter l'adhérence de l'anticoagulant sur le bouchon ;

    - mélanger avec soin. Il faut également mélanger auparavant car l'anticoagulant est parfois collé à la paroi (EDTA, potassium oxalate) ;

    - respecter l'ordre des tubes.

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    Il est important de prendre en considération la remarque du National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), section 7.13.3, questions 63, 64, 65, 66, 67 : ordre des tubes.

    Réponse: « Gel separator tubes are considered an additive tube but should be collected before other additive tubes because of the potential for additive contamination~ »

    Traduction : « Les tubes à gel séparateur sont considérés comme tube avec additif et doivent être utilisés avant d'autres tubes avec additif afin d'éviter une potentielle contamination par additif~ »

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    III- Le prélèvement sanguin en hémostase 1- Généralités sur l'hémostase

    L'hémostase, c'est un ensemble de mécanismes qui assurent la prévention des saignements spontanés et l'arrêt des hémorragies.

    On distingue :

    L'hémostase primaire : aboutit à l'obturation de la brèche vasculaire par un thrombus blanc (agrégat plaquettaire)

    La coagulation, consolidation de cet agrégat par la fibrine La fibrinolyse, permet la réinstauration de la circulation.

    1-1 L'hémostase primaire

    A. Physiologie

    Interviennent dans l'hémostase primaire, la paroi vasculaire ; les plaquettes qui ont pour origine la moelle osseuse hématopoïétique et sont des cellules sans noyau en forme de disque ; le facteur Willebrand et le fibrinogène.

    Deux mécanismes de l'hémostase primaire sont à noter :

    · Un temps vasculaire (vasoconstriction)

    · Un temps plaquettaire (formation du thrombus blanc).

    Les différentes étapes de l'hémostase primaire sont :

    a) Lésion vasculaire

    b) Réaction vasculaire : vasoconstriction

    c) Adhésion des plaquettes à la paroi vasculaire grâce au facteur Willebrand 10

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    d) Activation des plaquettes, libération des composés stockés dans les granules plaquettaires

    e) Agrégation plaquettaire, accolement des plaquettes les unes aux autres pour former un agrégat plaquettaire (grâce au fibrinogène)

    f) Rétraction ; l'agrégat va se consolider grace à :

    · La rétraction due à l'action contractile des plaquettes

    · L'apparition du réseau de fibrine de la coagulation. [8] B. Exploration de l'hémostase primaire > Numération plaquettaire

    Le prélèvement doit se faire sur tube à numération (violet) (EDTA). Il faut faire attention aux fausses thrombopénies dues aux difficultés de prélèvement et à l'EDTA.

    > Temps de saignement

    Il existe deux techniques pour le faire : la technique de Duke (se fait par incision au lobule de l'oreille) et la méthode Ivy3points (qui est celle réalisée au CNHU-HKM).

    > Etude des fonctions plaquettaires (adhésion / agrégation) > Dosage du facteur Willebrand

    > Dosage du fibrinogène

    1-2- La coagulation

    L'hémostase primaire forme un thrombus blanc plaquettaire fragile et la coagulation consolide ce thrombus[1].

    Pour cela elle fait intervenir :

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    · les protéines plasmatiques (facteur de coagulation, inhibiteurs de la coagulation)

    · les protéines tissulaires (facteur tissulaire)

    · les plaquettes

    · les ions calcium

    A. Physiologie

    > Description de la coagulation

    C'est la transformation d'un liquide, le plasma en un gel. Cette sorte de gélification est due à la transformation du fibrinogène en fibrine insoluble. Le déclenchement de la coagulation se fait soit par contact avec certains types de surface, soit par apport de fragments cellulaires (facteur tissulaire).

    Par contact, il s'agit de la voie intrinsèque (cinétique lente). Grace au facteur tissulaire, c'est la voie extrinsèque (cinétique rapide) Les deux provoquent la transformation du fibrinogène en fibrine.

    > Les facteurs de coagulation

    Les facteurs de coagulation sont des glycoprotéines synthétisées dans l'hépatocyte et sont définis par un nom, et par un chiffre romain (ex : Facteur I, fibrinogène ; facteur VIII : facteur antihémophilique A, IX : antihémophilique B .)

    Les facteurs de coagulation sont activés au cours du processus de coagulation et sont alors désignés par leur numéro accompagné de « a » pour activer. Un facteur activé sera « actif », il va activer un autre facteur de réaction en cascade. Les deux voies de coagulation, extrinsèque et intrinsèque font intervenir des facteurs distincts pour aboutir à la transformation du fibrinogène en fibrine.

    Voie intrinsèque : facteurs XII, XI, IX, VIII Voie extrinsèque : facteurs tissulaires VII

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    Voie commune : X, V, II, I.

    > Les inhibiteurs physiologiques de la coagulation

    Leur rôle est d'éviter l'extension du processus de coagulation à distance du point de départ (ex : anti thrombine, protéine C).

    B. Exploration de la coagulation

    > Prélèvements

    Le prélèvement se fait dans un tube contenant un anticoagulant (citrate de sodium) à bouchon bleu ; remuer le tube pour éviter la coagulation du sang prélevé.

    > Exploration / voie extrinsèque

    Temps de Quick ou taux de Prothrombine (TP) (normal=70 à 100%) > Exploration / voie intrinsèque

    Temps de Céphaline activée = TCA

    > Mesure du taux de fibrinogène (normal = 2 à 4 g/l) > Dosage d'un facteur de coagulation

    > Dosage d'un inhibiteur de coagulation.

    1-3- La fibrinolyse

    A. Physiologie

    La fibrinolyse dissout le caillot permettant la reperméabilisation des vaisseaux. L'enzyme intervenant est la plasmine qui a une action protéolytique sur la fibrine et le fibrinogène entraînant la formation de produit de dégradation (PDF).

    B. Exploration de la fibrinolyse

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    > Dosage du fibrinogène

    > Dosage du PDF

    > Dosage des D.Dimères : dégradation de la fibrine.

    2- Le prélèvement proprement dit

    A- Les conditions

    - Vérifier si le sujet est à jeun ou n'a pas absorbé de corps gras.

    - Réaliser le prélèvement le plus tard possible après une injection thérapeutique.

    - Faire préciser les médicaments administrés non seulement dans les heures mais dans les jours précédents car des médicaments tels que les hypoglycémiants, les anabolisants sont susceptibles d'augmenter l'effet anticoagulant.

    - Vérifier si le patient n'est pas sous un traitement à l'héparine. Dans ce cas, effectuer le prélèvement sur le bras opposé à la perfusion.

    - Garder à l'esprit que l'examen doit avoir lieu au plus quatre heures après le prélèvement afin de ne pas perdre les facteurs labiles.

    B- Le prélèvement - Sang capillaire

    Il faut prélever dans une solution diluante citratée le sang obtenu au bout des doigts (pulpe du doigt).

    - Sang veineux

    Il faut monter le dispositif de la manière suivante :

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    Figure 3 : Dispositif Vacutainer pour prélèvement sanguin [2]

    Figure 4 : Dispositif Vacutainer pour prélèvement sanguin et procédure de prélèvement [2]

    L'usage du verre est à proscrire puisqu'il provoque une activation de la coagulation.

    Pour éviter la contamination par la thromboplastine tissulaire, il est impératif de rejeter les premiers millilitres de sang ou carrément prélever les échantillons destinés à l'hémostase après les autres échantillons. Si ces règles ne sont pas respectées, on pourrait observer soit la formation de microcaillots soit l'apparition de macrocaillots or la présence de caillots, même non visibles peut faire croire à une hypercoagulabilité, l'activation des facteurs de la coagulation entraînant un raccourcissement des temps.

    Le rapport sang/ anticoagulant doit être à tout prix respecté à savoir 01 volume de citrate pour 09 volumes de sang.

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    C- Les anticoagulants

    Le citrate est l'anticoagulant de choix car il permet une meilleure conservation des facteurs de la coagulation.

    L'oxalate tend à être abandonné car il n'assure pas une bonne conservation du facteur V (facteur Proaccélérine). Il ne faut jamais utiliser l'oxalate pour le temps de céphaline activée. L'EDTA est à proscrire.

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    I- PRESENTATION DU CNHU

    Le Centre Hospitalier et Universitaire Hubert Koutoukou Maga de Cotonou (CNHU-HKM) est situé au Sud de la ville de Cotonou et plus précisément dans le douzième arrondissement. Il s'étend sur près de dix hectares.

    Le CNHU-HKM est limité au Nord-est par le camp militaire Guézo ; au Sud par la Présidence de la République du BENIN, de laquelle il est séparé par l'avenue Jean-Paul II ; à l'Ouest par le Ministère de l'Intérieur, la Faculté des Sciences de la Santé (FSS) et l'Institut des Sciences Biomédicales Appliquées (ISBA).

    Le CNHU, inauguré le 30 octobre 1962 et rénové le 10 janvier 1973, est actuellement dirigé par le Professeur Idrissou ABDOULAYE. Il est constitué de nombreux services médicaux et paramédicaux.

    Ce centre a pour missions :

    - d'assurer en permanence l'accueil et les soins

    - l'hospitalisation des malades et parturientes dans les services

    - assurer une mission de formation clinique des étudiants et médecins spécialistes en médecine, en chirurgie, en gynécologie, en analyses biomédicales, ...

    Le laboratoire d'analyses biomédicales est composé des services suivants :

    1- LA BIOCHIMIE

    Le service de Biochimie est situé en face de celui de BactériologieVirologie et comprend deux laboratoires : le petit laboratoire et le grand laboratoire. Entre ces deux laboratoires, se trouvent l'accueil et le bureau du Chef-Service. En Biochimie, les appareils utilisés sont entre autres des automates, des centrifugeuses, des pipettes.

    a-/ Le prélèvement

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    Importance de la qualité du prélèvement sanguin en hémostase : Observations faites
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    Il s'effectue à la salle de prélèvement entre huit heures et dix heures du matin et quatre postes de prélèvement y sont installés. On y reçoit les patients externes.

    Pour les échantillons destinés à la Biochimie, les prélèvements se font dans des tubes secs avec gel ou/et des tubes avec anticoagulant (héparine). Ils sont au fur et à mesure acheminés vers le laboratoire où ils sont étiquetés, centrifugés et distribués suivant les paillasses :

    b-/ Les paillasses

    - Paillasse bilan standard : Glycémie ; urée ; créatinine ; calcium ; magnésium ; phosphate

    - Paillasse bilan lipidique et enzymatique : Cholestérol total ; HDL ; uricémie ; triglycérides ; bilirubine totale et conjuguée ; transaminases ALAT et ASAT ; phosphatase alcaline ; phosphatase acide ; CPK

    - Paillasse bilan ionique : Sodium ; calcium ; chlorures

    - Paillasse électrophorèse : Electrophorèse de l'hémoglobine ;

    électrophorèse des protéines sériques ; dosage enzymatique de l'activitéde la G6PD

    - Paillasse des urines : Dosage des protéines ; glycosurie ; recherche des pigments et sels biliaires ; bilan ionique ; ...

    c-/ Description de quelques examens

    - Electrophorèse de l'hémoglobine

    Au laboratoire de Biochimie du CNHU, l'électrophorèse se fait sur du gel d'agarose fourni par le kit HYDRAGEL HEMOGLOBIN H2O. Cette technique permet de séparer les hémoglobines normales A et de détecter les variants hémoglobinémiques anormaux S, C, E et D.

    Le principe du test est simple. L'hémoglobine est un pigment de couleur rouge qui se trouve dans les hématies. L'hémoglobine est chargée négativement

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    Importance de la qualité du prélèvement sanguin en hémostase : Observations faites
    au Centre National Hospitalier Universitaire Hubert Koutoukou MAGA de Cotonou

    au pH utilisé et c'est la différence de la vitesse de migration qui permet de séparer les différents types d'hémoglobine.

    Les variants de l'hémoglobine sont dus à des mutations d'acides aminés sur l'une ou l'autre des chaînes. Près de deux cents variants sont connus mais du point de vue médical, quatre seulement ont un intérêt particulier : S, C, E et D. Ces variants sont dus à une mutation au niveau de la chaîne â et en position 6 par remplacement de l'acide glutamique par un autre acide aminé ; ce qui contribue à une diminution de charge de la protéine globale et donc de sa mobilité.

    Placées dans un champ électrique, les hémoglobines se déplacent en fonction de leur taille, des acides aminés qui les constituent, de la nature des liaisons peptidiques, du pH du tampon et même de la nature du support.

    La technique se fait en quatre étapes essentiellement à savoir la migration ; la fixation ; la coloration-décoloration et la lecture au densitomètre à 570 nanomètres.

    Pour chaque série d'électrophorèse, il est recommandé de faire un contrôle de qualité des réactifs utilisés.

    - Dosage du potassium et du calcium

    Ce dosage est réalisé par un automate. Il suffit de présenter le sérum à l'appareil et celui-ci se charge de prélever la quantité adéquate par aspiration et présente les résultats. En fait, l'automate, de marque ILYTE mesure le sodium, le potassium dans les produits biologiques, utilisant la technologie des électrodes sélectives d'ions. La lumière de l'électrode de sodium est constituée d'un tube de verre formulé spécialement pour être sensible aux ions sodium. La lumière de l'électrode de potassium est constituée d'un tube en plastique à base de valinomycine, élément sélectif. Une électrode sélective d'ions développe un voltage qui varie en fonction de l'ion auquel elle est sensible.

    2- LA PARASITOLOGIE

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    au Centre National Hospitalier Universitaire Hubert Koutoukou MAGA de Cotonou

    Les appareils utilisés sont entre autres le microscope optique, la hotte, la centrifugeuse, le mixeur. On y réalise les examens suivants : la coprologie parasitaire, le frottis sanguin + densité parasitaire, la goutte épaisse, le sérodiagnostic de Widal, la sérologie HIV, l'examen cytobactériologique des Urines simple, les sérologies rubéole et toxoplasmose.

    - Le SéroDiagnostic de Widal (SDW)

    C'est un test qui permet de poser le diagnostic biologique des salmonelloses et qui se fait sur du sérum. Le principe consiste en la recherche des agglutinines anti O et anti H dans le sérum du patient, correspondant aux antigènes O et H de Salmonella Typhi et de Salmonella Paratyphi A, B, C.

    Pour cela, on utilise des suspensions antigéniques TO ; TH ; AO ; AH ; BO ; BH ; CO ; CH.

    On dispose de neuf tubes à hémolyse que l'on numérote respectivement TH, TO, AH, AO, BH, BO, CH, CO et le numéro attribué à l'échantillon.

    Dans les huit premiers tubes, on introduit 450 microlitres des réactifs TH, TO, AH, AO, BH, BO, CH, CO.

    Dans le dernier tube, on réalise la dilution du sérum au dixième et l'on répartit 50 microlitres de sérum dilué dans chacun des tubes. Après homogénéisation vient la centrifugation puis on passe à la lecture. Une réaction positive se manifeste par une agglutination en flocons de neige persistante que l'on lit contre la lumière du jour en faisant une chiquenaude sur le bas du tube porté au niveau des yeux.

    - Anti Strepto Lysine O (ASLO)

    On réalise cet examen pour déterminer une infection à streptocoque. Le principe consiste en la recherche d'anticorps anti streptococciques, preuves du passage du streptocoque dans l'organisme.

    Pour le faire, on mélange sur une microplaque, 50 microlitres du sérum et 50 microlitres du réactif ASLO. On mélange puis on agite la microplaque pendant deux minutes. Une réaction positive est traduite par une agglutination au fond de la microplaque.

    3- LA BANQUE DE SANG (BDS)

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    La BDS est le premier bâtiment situé juste à droite à l'entrée du CNHUHKM et comporte :

    - le laboratoire où se font les examens de routine

    - la salle de prélèvement des donneurs de sang

    Au nombre des examens de routine, nous pouvons citer : le groupage sanguin ; le test de comptabilité ; la CRP (Protein C Reactive) ; la sérologie HBs ; la sérologie HCV ; le typage des CD4-CD8.

    Tous ces examens se font sur du sang prélevé dans un tube sec sans gel.

    - Le Groupage Sanguin et Facteur Rhésus (GSRh)

    Cet examen est réalisé dans le but de déterminer le groupe sanguin des individus, ce qui est très important en cas de transfusion sanguine et comprend deux épreuves indissociables et complémentaires.

    L'examen est résumé dans les schémas et le tableau ci-dessous :

    Sérum test anti-A Sérum test anti-B Sérum test anti-AB Sérum test anti-D (Rhésus)

    (bleu) (jaune) (incolore)

    . . . .

    Culot globulaire Culot globulaire Culot globulaire

    Figure 1 : Schéma résumant l'épreuve globulaire du groupage sanguin et la détermination du Facteur Rhésus

    Hématie test A Hématie test B Hématie test O Culot globulaire

    21

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    . . . .

    Sérum Sérum Sérum Sérum

    Figure 2 : Schéma résumant l'épreuve sérique du groupage sanguin

    Tableau 1: Exemples de quelques résultats et commentaires de groupage sanguin possibles

    Sujets

    Epreuve globulaire
    Anti-A Anti-B Anti-AB

    Facteur
    Rhésus

    Epreuve sérique
    Hématie test A B O

    Groupe
    sanguin

    1

    +++ --- +++

    +++

    - + -

    A+

    2

    --- +++ +++

    ---

    + - -

    B-

    3

    --- --- ---

    +++

    + + -

    O+

    4

    +++ +++ +++

    +++

    - - -

    AB+

    - La CRP (Protein C Reactive)

    Cet examen se fait pour diagnostiquer une infection ou une inflammation de toute nature. On fait le test qualitatif et le test quantitatif (en cas de positivité).

    Le test qualitatif se fait en mélangeant 50 microlitres du sérum et cinquante microlitres du réactif CRP OMEGA Avitex. Lorsqu'il y a agglutination, on passe au test quantitatif en vue du titrage de l'infection. Pour ce faire, on réalise des dilutions successives au demi, au quart, au huitième, ...

    La CRP se fait sur une microplaque rectangulaire à fond noir ou blanc.

    4- LA BACTERIOLOGIE-VIROLOGIE

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    Il existe deux paillasses à savoir la paillasse des diverses analyses et celle des urines.

    A la paillasse des divers, se font les examens tels que :

    - les prélèvements vaginaux + antibiogramme

    - la spermoculture - le spermogramme - l'hémoculture

    - l'étude du LCR

    - l'étude du crachat

    - les colorations (Gram spécifiquement)

    C'est un service très sensible car les germes y sont régulièrement manipulés. La particularité dans ce service est l'utilisation des milieux de culture.

    - Le prélèvement vaginal

    Les prélèvements vaginaux permettent de différencier les différents types d'infections vaginales qu'elles soient d'origines parasitaires, mycosiques ou bactériennes.

    Le matériel utilisé pour sa réalisation est constitué d'un spéculum stérilisé, de paires de gants, d'écouvillons stériles, de lames et lamelles.

    Le mode opératoire est le suivant :

    · La patiente est allongée sur une table gynécologique et plie les genoux en écartant les cuisses.

    · Le spéculum est introduit verticalement, tout doucement dans le vagin. Lorsqu'il est introduit au 3/4, le retourner délicatement afin de le mettre en position horizontale.

    · Presser légèrement le spéculum avec la main pour écarter les parois afin de chercher le col de l'utérus. Lorsqu'il est repéré, commencer à visser doucement.

    · Effectuer deux prélèvements à l'aide d'écouvillons stériles au niveau de l'endocol et du cul-de-sac postérieur.

    · Juste après le prélèvement, noter les résultats de l'examen macroscopique à savoir l'aspect du col (normal, saignant, inflammatoire, glaireux) ; l'aspect des leucorrhées (crémeux, caillé, purulent, mousseux, jaune, autres)

    23

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    · Faire l'état frais à la recherche de parasites (Trichomonas vaginalis, levures bourgeonnantes, filaments mycéliens, ...) Préciser l'aspect des leucocytes.

    · Colorer les frottis du col de l'utérus et du vagin au Gram et rechercher à l'objectif X100, les coccobacilles, les bacilles de Doderlein et autres germes. Préciser leur importance (rares, assez nombreux, indénombrables)

    · Conclure (flore normale, intermédiaire, anormale).

    - La coloration de Gram

    Elle est réalisée pour différencier les bactéries Gram+ des bactéries Gram- et se fait sur frottis confectionné. Le mode de réalisation est le suivant :

    · Nettoyer le poste de coloration

    · Réunir le matériel

    · Fixer le frottis séché en passant trois fois le dos de la lame à la flamme

    · Recouvrir la lame avec le violet de gentiane pendant une minute

    · Rincer à l'eau de robinet

    · Recouvrir la lame avec le lugol et attendre une minute

    · Rejeter le lugol et rincer à l'eau de robinet

    · Recouvrir la lame avec l'alcool à 95° pendant 45 secondes

    · Rincer abondamment à l'eau de robinet

    · Recouvrir la lame avec la solution de fuchsine et laisser agir pendant 20 secondes puis rincer et sécher

    · Lire la lame colorée à l'objectif à immersion (X100)

    5- L'HEMATOLOGIE

    Ce service est le second bâtiment situé juste à droite à l'entrée du CNHU. Il est composé de deux unités : la clinique appelée Centre Universitaire des Maladies du Sang (CUMAS) et le laboratoire. Ce dernier se situe juste à côté de

    24

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    la clinique et est divisé en deux sections : la cytologie et l'hémostase. On y utilise les appareils comme les microscopes, les automates de la Numération Formule Sanguine, le coagulomètre (automate pour l'hémostase), la centrifugeuse, le spectrophotomètre.

    En cytologie, se font les examens tels que la numération formule sanguine complète ; la numération des éosinophiles ; le dosage de l'hémoglobine ; la mesure de l'hématocrite ; les biopsies médullaires ; le médullogramme, ...

    En hémostase, se font le Taux de Prothrombine (TP) ; le Temps de Saignement (TS) ; le Temps de Coagulation (TC) ; la Vitesse de Sédimentation (VS) ; le test de grossesse, le Temps de Céphaline Kaolin (TCK) ...

    En ce qui concerne l'hématologie, on prélève le sang dans les tubes suivants :

    - tubes avec anticoagulant (EDTA) pour tous les examens pratiqués en cytologie

    - tubes avec anticoagulant (citrate) pour la VS

    - tubes avec anticoagulant (citrate de sodium) pour tous les examens pratiqués en hémostase (TP, TCA, ...)

    - tubes secs avec gel pour le test de grossesse. Ce test peut également se faire sur les urines.

    - Numération des plaquettes sur frottis sanguin coloré

    Les plaquettes sont des éléments très importants en hématologie et en hémostase. La méthode de comptage est la suivante :

    - Bien homogénéiser le sang

    - Tirer un frottis assez fin

    - Faire une bonne coloration en évitant les dépôts de colorants

    - Faire la mise au point à une partie du frottis où les globules rouges ne se chevauchent pas

    - Compter par champ microscopique le nombre de globules rouges et le nombre de plaquettes et noter le nombre de plaquettes trouvé pour mille (1000) hématies.

    Le calcul se fait de la manière qui suit :

    Soit N le nombre de plaquettes trouvé pour 1000 globules rouges (GR) :

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    Le nombre de plaquettes/ mm3 de sang = N X Nombre de GR/ mm3 de sang

    1000

    - Temps de Saignement (TS)

    C'est un examen qui se fait directement sur le patient et il permet d'apprécier l'activité des plaquettes. On évalue ainsi le temps de formation du clou plaquettaire après un bris vasculaire.

    Pour cet examen, on dispose de :

    - tensiomètre

    - chronomètre

    - tampon

    - vaccinostyle

    - papier buvard

    A l'aide du tensiomètre, on maintient la tension artérielle du patient à 40 millimètres de mercure. On choisit une partie non vascularisée du bras que l'on nettoie correctement avec le tampon d'éther ou d'alcool à 70°. A l'aide du vaccinostyle, on pique trois fois. On démarre le chronomètre dès les piqûres faites et on le stoppe à l'arrêt du sang. A l'aide du papier buvard, on absorbe le sang : c'est la méthode IVy 3 points. Le temps de saignement normal est inférieur ou égal à six minutes.

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    II- Méthode d'étude 1- Echantillonnage

    La partie technique de notre travail s'est déroulée au laboratoire d'hémostase du Centre National Hospitalier Universitaire Hubert Koutoukou Maga (CNHU-HKM).

    Nous avons réalisé des prélèvements sanguins sur trente (30) individus de deux manières différentes.

    Dans un premier temps, nous avons effectué les prélèvements de manière idéale, telle que décrite dans le présent document ; c'est-à-dire en utilisant la méthode Vacutainer (prélèvement sous vide). L'anticoagulant utilisé est le citrate de sodium à 3,8%.

    Dans un second temps, nous avons réalisé, sur les mêmes individus, les prélèvements en ne respectant pas le rapport volume sang/ anticoagulant. L'anticoagulant utilisé est le citrate de sodium à 3,8%.

    Nous avons donc deux (02) lots d'échantillons (Lot 1 : Prélèvements bien réalisés ; Lot 2 : Prélèvements mal réalisés) sur lesquels nous avons pratiqué les examens suivants à savoir le Temps de Céphaline Activé (TCA) et le Taux de Prothrombine (TP).

    2- Procédure de réalisation des examens 2-1- Temps de Céphaline Activé (TCA)

    C'est un test global qui explore la coagulation intrinsèque par le temps de recalcification du plasma pauvre en plaquettes en présence de céphaline (substitut plaquettaire) et d'un activateur (kaolin ; acide ellagique).

    2-1-1- Intérêt

    Il permet :

    - le dépistage des anomalies de la voie intrinsèque - la surveillance de l'héparino-thérapie

    - le dosage des facteurs VIII et XI

    27

    Importance de la qualité du prélèvement sanguin en hémostase : Observations faites
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    - l'évaluation du degré de sévérité d'une affection hépatique ou d'une Coagulation Intra Vasculaire Diffuse (CIVD)

    2-1-2- Phase pré-analytique

    Les réactifs utilisés sont :

    - Actimat

    - Chlorure de calcium dilué au dixième pré-incubé à 37°C

    Le plasma est obtenu après prélèvement franc du sang sur citrate trisodique à 3,8% à raison d'un volume de citrate pour 09 volumes de sang. La centrifugation est faite à 3000 tours/ minute pendant dix minutes.

    2-1-3- Phase analytique

    Technique

    Introduire dans une cupule ou dans un tube à hémolyse :

    Actimat

    100 ul

    Plasma

    100 ul

    Agiter et incuber 3 minutes exactement à 37°C

    Chlorure de calcium dilué au 1/10ème Préchauffé à 37°C

    100 ul

    Déclencher simultanément le chronomètre Noter le temps de coagulation

     
     

    Faire une double détermination par échantillon et procéder de la même manière avec le plasma témoin.

    Résultat

    Plasma témoin 32 secondes #177; 4 secondes

    Un temps supérieur de 10 secondes à celui du témoin doit être considéré comme anormal.

    28

    Importance de la qualité du prélèvement sanguin en hémostase : Observations faites
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    Un temps inférieur ou égal à 20 secondes amène à vérifier s'il n'y a pas un coagulum.

    Notons qu'en cas de traitement par l'héparine (TCA compris entre 50 et 100 secondes) ou par les antivitamines K (TCA compris entre 50 et 65 secondes), une importance particulière doit être accordée au prélèvement. Si le test ne peut être réalisé dans l'heure qui suit le prélèvement, il convient de centrifuger le sang le plus tôt possible et de séparer le plasma pour éviter une contamination par les facteurs plaquettaires, qui pourrait conduire à des résultats erronés, du fait de leur activité antihéparine.

    2-1-4- Phase post-analytique

    Ranger les réactifs, décontaminer le matériel utilisé et le ranger, retirer les gants et les jeter dans la poubelle adéquate, enregistrer les résultats et faire la transmission en tenant compte de la confidentialité.

    2-2- Temps de Quick (TQ) ou Taux de Prothrombine (TP)

    Le Temps de Quick (TQ) encore appelé Taux de Prothrombine (TP) est un test global qui explore la coagulation extrinsèque plus précisément la formation de la prothrombine exogène. C'est le temps de recalcification d'un plasma citraté, déplaquettisé en présence de la thromboplastine calcique.

    2-2-1- Phase pré-analytique

    Il faut nettoyer la paillasse, réunir le matériel, porter des gants et préparer les réactifs. Comme matériels et réactifs utilisés, on peut citer :

    - une centrifugeuse

    - un semi-automate de coagulation

    - un distributeur de billes + billes magnétiques - des barrettes magnétiques

    - une accuvette pour réactifs

    29

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    - des cupules

    - la thromboplastine calcique incubée à 37°C

    Le plasma est obtenu après prélèvement franc du sang sur citrate trisodique à 3,8% à raison d'un volume de citrate pour 09 volumes de sang. On centrifuge à 3000 tours/minute pendant 10 minutes.

    2-2-2- Phase analytique Technique

    Reconstituer la thromboplastine en diluer un flacon de thromboplastine dans un flacon de solvant. Laisser dissoudre puis agiter par retournements successifs pour obtenir une suspension homogène.

    Introduire dans une cupule ou dans un tube à hémolyse :

    Plasma

    100 ul

    Incuber 02 minutes à 37°C

    Agiter et incuber 03 minutes exactement à 37°C

    Thromboplastine calcique préalablement Chauffé à 37°C (15 minutes)

    200 ul

    Déclencher simultanément le chronomètre et noter le temps de coagulation

     

    Faire une double détermination par échantillon et procéder de la même manière avec le plasma témoin.

    Résultat

    La conversion du Temps de Quick en pourcentage (Taux de Prothrombine) permet d'apprécier l'activité prothrombinique du plasma à tester comparativement à un plasma témoin servant de référence (100%).

    Cette conversion se fait à l'aide d'un tableau qui est livré avec chaque lot de réactifs. Les valeurs normales sont comprises entre 70% et 100%. Une attention particulière doit être accordée aux prélèvements de sujets traités par les antivitamines K.

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    2-2-3- Phase post-analytique

    Il s'agit de ranger les réactifs ; de décontaminer le matériel utilisé et le ranger ; de retirer les gants et les mettre dans la poubelle adéquate ; d'enregistrer les résultats et faire la transmission en tenant compte de la confidentialité des résultats.

    31

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    I- Résultats

    Les résultats de nos manipulations se présentent comme suit :

    1- Résultats du Temps de Céphaline Activé (TCA) Tableau III: Temps de Céphaline Activé selon la qualité de prélèvement

    Numéro

    Prélèvements bien
    faits

    Prélèvements mal
    faits

    1

    24,5 s

    34,4s

    2

    29,7s

    32,4s

    3

    29,8s

    100s

    4

    29,9s

    31,5s

    5

    30,3s

    100s

    6

    30,3s

    65,2s

    7

    31,1s

    38,1s

    8

    31,5s

    42,1s

    9

    31,6s

    100s

    10

    31,6s

    36,3s

    11

    31,7s

    30,6s

    12

    31,8s

    43,1s

    13

    32s

    45,2s

    14

    32,7s

    30,3s

    15

    32,8s

    43s

    16

    32,9s

    45,2s

    17

    33,1s

    48s

    18

    34,6s

    59,4s

    19

    34,7s

    42,9s

    20

    35,3s

    49,8s

    21

    35,7s

    81,4s

    22

    35,9s

    100s

     

    32

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    23

    36s

    100s

    24

    36,6s

    100s

    25

    37,3s

    43,8s

    26

    37,5s

    55,2s

    27

    37,8s

    100s

    28

    38s

    39,9s

    29

    39,3s

    59s

    30

    40,7s

    56,9s

     

    2- Résultats du Taux de Prothrombine (TP) Tableau IV: Taux de Prothrombine selon la qualité de prélèvement

    Numéro

    Prélèvements bien
    faits

    Prélèvements mal
    faits

    1

    11,4s

    100s

    2

    12,3s

    100s

    3

    12,3s

    15,7s

    4

    12,4s

    13,8s

    5

    12,6s

    13s

    6

    12,8s

    100s

    7

    12,8s

    100s

    8

    12,8s

    100s

    9

    13s

    30s

    10

    13,2s

    23,7s

    11

    13,2s

    100s

    12

    13,3s

    20s

    13

    13,5s

    20s

    14

    13,5s

    100s

    15

    13,6s

    38,4s

     

    33

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    16

    13,8s

    100s

    17

    13,8s

    100s

    18

    14s

    100s

    19

    14,2s

    100s

    20

    14,2s

    100s

    21

    14,3s

    19,4s

    22

    14,4s

    100s

    23

    14,5s

    100s

    24

    14,7s

    26,8s

    25

    15,3s

    52,7s

    26

    16s

    100s

    27

    26,5s

    100s

    28

    29,2s

    100s

    29

    31s

    100s

    30

    100s

    100s

     

    34

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    II- Commentaires

    Nos commentaires s'articuleront autour de deux points à savoir : - l'analyse des résultats du TCA selon la qualité de prélèvement - l'analyse des résultats du TF selon la qualité de prélèvement

    1- Analyse des résultats du TCA selon la qualité de prélèvement

    De l'analyse des résultats, il ressort que sur les trente échantillons réalisés dans de mauvaises conditions de prélèvement (prélèvements insuffisants), on note sept qui ont une valeur égale à 100 secondes soit 23,33% des échantillons. Cela est principalement dû à la quantité trop minime du sang prélevé sur l'anticoagulant. Ensuite, on remarque que les valeurs de deux échantillons (6,66%) ont pratiquement doublé par rapport à celles des mêmes échantillons prélevés dans les conditions optimales. Enfin, vingt-et-un échantillons soit 70% ont présenté des valeurs plus ou moins supérieures à celles obtenues avec les prélèvements réalisés dans les conditions optimales.

    35

    Importance de la qualité du prélèvement sanguin en hémostase : Observations faites
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    Figure 5 : Variations du TCA selon la qualité de prélèvement

    De plus, la figure 5 montre que les valeurs du TCA pour un prélèvement mal fait sont largement au-dessus de celles correspondant aux prélèvements bien 60

    réalisés.

    2- Analyse des résultats du TP selon la qualité de prélèvement

    Péè

    0 D'après l'analyse des résultats, il ressort que dix-neuf échantillons sur trente

    mal faits

    soit 63,33% ont donné des résultats égaux à 100 secondes. Trois échantillons 20

    soit 10% ont donné des valeurs qui doublent pratiquement celles obtenues avec les prélèvements réalisés dans les conditions optimales et huit échantillons (26,66%) ont donné des valeurs plus ou moins supérieures à celles des prélèvements réalisés dans les conditions optimales.

    0

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    au Centre National Hospitalier Universitaire Hubert Koutoukou MAGA de Cotonou

    Figure 6 : Variations du TP selon la qualité de prélèvement

    De plus, la figure 6 montre que les valeurs du TP pour un prélèvement mal fait sont largement au-dessus de celles correspondant aux prélèvements bien réalisés.

    Il ressort de cette étude qu'il faut systématiquement rejeter tout prélèvement qui ne respecte pas le rapport volume sang/ anticoagulant. Ce rapport volume sang/ anticoagulant est respecté en prélevant le sang jusqu'au trait marqué sur le tube (limite imposée par le fabricant) bien sûr en utilisant le prélèvement sous vide Vacutainer.

    Par ailleurs, une petite enquête nous a permis de constater que certains

    Préèm n

    services médicaux du CNHU-HKM de Cotonou ne réalisent pas le prélèvement

    faits

    tel que nous l'avons décrit : ils utilisent toujours la vieille méthode de

    Prélèveents mal

    prélèvement par seringue. Les conclusions du présent travail leur sont donc

    faits

    vivement adressées.

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    Importance de la qualité du prélèvement sanguin en hémostase : Observations faites
    au Centre National Hospitalier Universitaire Hubert Koutoukou MAGA de Cotonou

    CONCLUSION

    Les analyses biomédicales tiennent une place très importante dans la santé des êtres vivants que nous sommes. Or du résultat présenté au médecin traitant par le laboratoire, dépend le choix d'un traitement efficace. Cela signifie donc que la qualité des prélèvements pour ces examens doit être une priorité.

    Notre étude nous a révélé que le non-respect du rapport volume sang/ anticoagulant induit généralement une augmentation des valeurs des examens d'hémostase. Ainsi de façon succincte, sur trente prélèvements réalisés dans de mauvaises conditions, pour le Temps de Céphaline Activé (TCA), 23,33% des patients ont un TCA égal à 100 secondes ; 6,66% ont un TCA dont la valeur est doublée par rapport à celle des prélèvements de qualité optimale et 70% ont un TCA avec des valeurs plus ou moins supérieures à celle des prélèvements de qualité optimale. Pour le Taux de Prothrombine (TP), 63,33% des patients ont un TP dont la valeur est égale à 100 secondes ; 10% ont un TP doublant la valeur des prélèvements de qualité optimale et 26,66% ont un TP avec des valeurs plus ou moins supérieures à celles des prélèvements de qualité optimale.

    Nous espérons alors que le présent document apportera un plus pour une meilleure réalisation des prélèvements en vue de la satisfaction des patients et la qualité des résultats délivrés par le service.

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    SUGGESTIONS

    Les résultats obtenus à la suite de ce travail nous amènent à formuler quelques suggestions, notamment à l'endroit :

    DES AUTORITES POLITIQUES

    · Faire un plaidoyer pour l'appui des laboratoires en matériels, équipements, ressources humaines et réactifs.

    DU MINISTERE DE LA SANTE

    · Mettre en place un organe d'évaluation du contrôle qualité des prélèvements dans tous les laboratoires du BENIN.

    · Faire un plaidoyer pour la formation des techniciens notamment sur les techniques de prélèvement et leur expliquer l'importance.

    DES TECHNICIENS DE LABORATOIRE

    · Respecter les normes et procédures de chaque prélèvement à exécuter

    · Assister à tour de rôle aux recyclages sur le prélèvement sanguin surtout en hémostase.

    · Eviter au maximum les mouvements de grève prolongés car après tout la santé n'a pas de prix.

    DES AUTORITES DE L'EPAC

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    · Essayer de faire en sorte que les stages de fin de formation aient une durée plus longue ; cela permettrait aux étudiants d'être plus efficaces dans leurs travaux.

    · Instaurer un cours complet sur l'importance du prélèvement sanguin à dispenser aux étudiants avant de les envoyer en stage.

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    REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

    1. Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. Samples : from the patient to the laboratory. Darmstadt, Git Verlag GMBH 1996 : 101p.

    2. Narayanan S, Guder WG. Preanalytical variables and their influence on the quality of laboratory results. eJIFCC, vol 13n n° 1.

    3. Mitchell WM. Haemolysis. Cause and effect. Lab Notes. Home Healthcare Laboratory of America .

    4. Togni G, Volken C, Sabo G. Préanalytique. Forum Med Suisse 2002 ; 6 : 113-120.

    5. Heslop L. A discursive exploration of nursing work in the hospital emergency setting. Nursing Inquiry 1998 ; 5 : 87-95.

    6. Nystrom M, Dahlberg K, Carlsson G. Non-caring encounters at an emergency care unit - a life-world hermeneutic analysis of an efficiency-driven organization. Int J Nurs Stud 2003 ; 40 : 761-769.

    7. Kennedy C, Angermuller S, King R et al. A comparison of haemolysis rates using intravenous catheters versus venipuncture tubes for obtaining blood samples. J Emerg Nurs 1996 ; 22 : 566-569.

    8. The effect of blood drawing techniques and equipment on the haemolysis of ED laboratory blood samples School of nursing, John Hopkins Hospital, Baltimore, MD, USA.

    9. Reine A., Stage pratique effectué au Centre National Hospitalier Universitaire Hubert Koutoucou Maga à Cotonou du 27 août 2007 au 09 octobre 2007, 2-30

    10. Auguste A., Rosalie K., Assurance qualité sur les prélèvements : cas de l'hématologie, communication faite au CNHU-HKM en juin 2008

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    ANNEXES

    Annexe 1 : Réalisation du prélèvement sous vide (Méthode Vacutainer)

    LIEU DE PRELEVEMENT ET CONFORT DU PATIENT

    Le prélèvement doit s'effectuer dans un local propre, bien aéré et calme pour la mise en confiance du patient.

    L'accueil du patient doit être bien fait. Le préleveur doit avoir une blouse bien propre et être assez courtois avec le patient en vue de calmer peut être son anxiété et de le mettre en confiance.

    Vérifier l'état du jeun du patient si nécessaire.

    Installer le patient dans le fauteuil prévu à cet effet. Il doit être en position demi-couché.

    IDENTIFICATION DES ECHANTILLONS

    Pour répondre aux exigences de l'assurance qualité sur les prélèvements et du guide de bonne exécution des analyses, avant tout prélèvement, il faut identifier en écrivant de façon très lisible directement sur le tube ou après apposition d'une étiquette qui porte les nom et prénoms du patient.

    Normalement, la date et l'heure du prélèvement doivent être aussi marquées à cause de certains examens qui sont très sensibles (hémostase: facteurs labiles).

    Tout spécimen non conforme sera rejeté et un nouveau prélèvement sera exigé. (Pas de nom, présence de coagulum, etc.)

    ACHEMINEMENT DES ECHANTILLONS DANS LES LABORATOIRES

    - Les échantillons doivent être acheminés dans les 2 heures suivant le prélèvement au plus tard.

    - Les échantillons doivent être en position debout afin d'éviter l'hémolyse et l'écoulement des échantillons.

    PROCÉDURE DE PRÉLÈVEMENT

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    * Vérifier l'identité du bénéficiaire et la nécessité ou non d'être à jeun. * Identifier les tubes appropriés.

    * Expliquer au bénéficiaire les étapes du prélèvement et leur utilité.

    * Appliquer le garrot pour rendre turgescent la veine et la faire saillir ; * Repérer ensuite la veine (Gants facultatifs).

    * Désinfecter la peau avec un tampon d'alcool.

    *Faire une friction modérée pour produire une légère anesthésie. *Éviter de toucher la peau au site de ponction; laisser sécher l'alcool à l'air ambiant seulement.

    *Immobiliser la veine avec le pouce de la main libre (5,0 cm plus bas que le site de la ponction).

    *Placer la pointe de l'aiguille, biseau vers le haut.

    *Traverser fermement la peau, pénétrer doucement la veine, dans le sens de la circulation.

    *Remplir les tubes dans l'ordre : tubes secs sans gel, tubes secs avec gel, tubes avec anticoagulant liquide, tubes avec anticoagulant cristallisé. Cet ordre évite les contaminations d'un tube à l'autre.

    *Retirer lentement la quantité de sang requise, surtout si le prélèvement s'effectue au moyen d'une seringue.( l'éviter au maximum)

    * Respecter le rapport anticoagulant / sang.

    * Homogénéiser les tubes avec anticoagulant par 5 à 10 retournements successifs et délicats pour éviter la formation de coagulum.

    * Retirer l'aiguille, en plaçant un tampon sec à la base de celle-ci. * Comprimer suffisamment.

    * Faire une protection avec du sparadrap adéquat apposé au site de prélèvement afin d'éviter les souillures éventuelles.

    * Si présence de sang sur le bouchon des tubes, nettoyer avec un tampon d'alcool.

    * Procéder à l'acheminement des échantillons dans les différents laboratoires du CNHU-HKM.

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    Figure 7 : Prélèvement sanguin [Docteur A. DEOM]

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    au Centre National Hospitalier Universitaire Hubert Koutoukou MAGA de Cotonou

    Annexe 2 : Fiche de résultats du Temps de Céphaline Activé (TCA) au CNHU-HKM de Cotonou

    Prescripteur :

    Nom : Malade

    Dossier N° : 06

    Prénoms : Patiente

    Analyses du : 08-07-08

    Age : 56 ANS

    Diagnostic : BILAN

    Sexe : F

    HEMOSTASE

     

    Témoin

    Résultats
    du : 21-07-08

    VALEURS NORMALES

    ( Sous
    Anticoagulant )

    TCA

    30''0 sec

    39»9 sec

    30 - 40 sec

    COTONOU , le 21-07-08

    Pr. Ag. LATOUNDJI Sèmiou Le Chef de Service

    45

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    Annexe 3 : Fiche de résultats du Taux de Prothrombine (TP) au CNHUHKM de Cotonou

    Prescripteur :

    Nom : MONSIEUR

    Dossier N° :

    Prénoms : Patient

    Analyses du : 30-06- 08

    Age : 46 ANS

    Diagnostic : SINTROM

    Sexe : M

    HEMOSTASE

     
     

    Témoin

     

    Résultats
    du : 21-07-08

    VALEURS NORMALES

    ( Sous
    Anticoagulant

     
     
     
     
     
     

    )

    TP

    14''0

    sec

    100

    51''3 sec

     

    35% -

     

    %

     
     

    19

    %

    45%

    COTONOU , le 21-07-0

    Pr. Ag. LATOUNDJI Sèmiou

    Le Chef de Service

    46

    Importance de la qualité du prélèvement sanguin en hémostase : Observations faites
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    Annexe 4 : Questionnaire d'évaluation du prélèvement dans les services médicaux du CNHU-HKM de Cotonou

    Nom de la structure visitée : Heure de la visite :

    1-/ Quelle méthode utilise-t-on pour faire le prélèvement ?

    ·

    Prélèvement sous vide

    · Prélèvement à la seringue

    ·

    Autre

    2-/ Le prélèvement réalisé est-il suffisant pour réaliser l'examen ?

    ·

    Oui

    ·

    Non

    3-/ L'ordre de remplissage des tubes est-il respecté par le préleveur ?

    ·

    Oui

    · Non

    4-/ Combien de temps s'écoule entre le prélèvement et l'acheminement vers le laboratoire ?

    ·

    1 heure ?

    · 2 heures ?

    ·

    Le temps voulu ?

    5-/ La sécurité du préleveur est-elle suffisante au cours du prélèvement ?

    · Oui

    · Non

    47






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"En amour, en art, en politique, il faut nous arranger pour que notre légèreté pèse lourd dans la balance."   Sacha Guitry