2- LA PARASITOLOGIE
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Cotonou
Les appareils utilisés sont entre autres le microscope
optique, la hotte, la centrifugeuse, le mixeur. On y réalise les examens
suivants : la coprologie parasitaire, le frottis sanguin + densité
parasitaire, la goutte épaisse, le sérodiagnostic de Widal, la
sérologie HIV, l'examen cytobactériologique des Urines simple,
les sérologies rubéole et toxoplasmose.
- Le SéroDiagnostic de Widal
(SDW)
C'est un test qui permet de poser le diagnostic biologique des
salmonelloses et qui se fait sur du sérum. Le principe consiste en la
recherche des agglutinines anti O et anti H dans le sérum du patient,
correspondant aux antigènes O et H de Salmonella Typhi et de Salmonella
Paratyphi A, B, C.
Pour cela, on utilise des suspensions antigéniques TO ; TH
; AO ; AH ; BO ; BH ; CO ; CH.
On dispose de neuf tubes à hémolyse que l'on
numérote respectivement TH, TO, AH, AO, BH, BO, CH, CO et le
numéro attribué à l'échantillon.
Dans les huit premiers tubes, on introduit 450 microlitres des
réactifs TH, TO, AH, AO, BH, BO, CH, CO.
Dans le dernier tube, on réalise la dilution du
sérum au dixième et l'on répartit 50 microlitres de
sérum dilué dans chacun des tubes. Après
homogénéisation vient la centrifugation puis on passe à la
lecture. Une réaction positive se manifeste par une agglutination en
flocons de neige persistante que l'on lit contre la lumière du jour en
faisant une chiquenaude sur le bas du tube porté au niveau des yeux.
- Anti Strepto Lysine O (ASLO)
On réalise cet examen pour déterminer une
infection à streptocoque. Le principe consiste en la recherche
d'anticorps anti streptococciques, preuves du passage du streptocoque dans
l'organisme.
Pour le faire, on mélange sur une microplaque, 50
microlitres du sérum et 50 microlitres du réactif ASLO. On
mélange puis on agite la microplaque pendant deux minutes. Une
réaction positive est traduite par une agglutination au fond de la
microplaque.
3- LA BANQUE DE SANG (BDS)
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La BDS est le premier bâtiment situé juste à
droite à l'entrée du CNHUHKM et comporte :
- le laboratoire où se font les examens de routine
- la salle de prélèvement des donneurs de sang
Au nombre des examens de routine, nous pouvons citer : le
groupage sanguin ; le test de comptabilité ; la CRP (Protein C Reactive)
; la sérologie HBs ; la sérologie HCV ; le typage des CD4-CD8.
Tous ces examens se font sur du sang prélevé dans
un tube sec sans gel.
- Le Groupage Sanguin et Facteur Rhésus
(GSRh)
Cet examen est réalisé dans le but de
déterminer le groupe sanguin des individus, ce qui est très
important en cas de transfusion sanguine et comprend deux épreuves
indissociables et complémentaires.
L'examen est résumé dans les schémas et le
tableau ci-dessous :
Sérum test anti-A Sérum test anti-B Sérum
test anti-AB Sérum test anti-D (Rhésus)
(bleu) (jaune) (incolore)
. . . .
Culot globulaire Culot globulaire Culot globulaire
Figure 1 : Schéma résumant l'épreuve
globulaire du groupage sanguin et la détermination du Facteur
Rhésus
Hématie test A Hématie test B Hématie test O
Culot globulaire
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. . . .
Sérum Sérum Sérum Sérum
Figure 2 : Schéma résumant l'épreuve
sérique du groupage sanguin
Tableau 1: Exemples de quelques résultats et
commentaires de groupage sanguin possibles
Sujets
|
Epreuve globulaire Anti-A Anti-B Anti-AB
|
Facteur Rhésus
|
Epreuve sérique Hématie test
A B O
|
Groupe sanguin
|
1
|
+++ --- +++
|
+++
|
- + -
|
A+
|
2
|
--- +++ +++
|
---
|
+ - -
|
B-
|
3
|
--- --- ---
|
+++
|
+ + -
|
O+
|
4
|
+++ +++ +++
|
+++
|
- - -
|
AB+
|
- La CRP (Protein C Reactive)
Cet examen se fait pour diagnostiquer une infection ou une
inflammation de toute nature. On fait le test qualitatif et le test quantitatif
(en cas de positivité).
Le test qualitatif se fait en mélangeant 50 microlitres
du sérum et cinquante microlitres du réactif CRP OMEGA Avitex.
Lorsqu'il y a agglutination, on passe au test quantitatif en vue du titrage de
l'infection. Pour ce faire, on réalise des dilutions successives au
demi, au quart, au huitième, ...
La CRP se fait sur une microplaque rectangulaire à fond
noir ou blanc.
4- LA BACTERIOLOGIE-VIROLOGIE
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Il existe deux paillasses à savoir la paillasse des
diverses analyses et celle des urines.
A la paillasse des divers, se font les examens tels que :
- les prélèvements vaginaux + antibiogramme
- la spermoculture - le spermogramme - l'hémoculture
- l'étude du LCR
- l'étude du crachat
- les colorations (Gram spécifiquement)
C'est un service très sensible car les germes y sont
régulièrement manipulés. La particularité dans ce
service est l'utilisation des milieux de culture.
- Le prélèvement vaginal
Les prélèvements vaginaux permettent de
différencier les différents types d'infections vaginales qu'elles
soient d'origines parasitaires, mycosiques ou bactériennes.
Le matériel utilisé pour sa réalisation est
constitué d'un spéculum stérilisé, de paires de
gants, d'écouvillons stériles, de lames et lamelles.
Le mode opératoire est le suivant :
· La patiente est allongée sur une table
gynécologique et plie les genoux en écartant les cuisses.
· Le spéculum est introduit verticalement, tout
doucement dans le vagin. Lorsqu'il est introduit au 3/4, le retourner
délicatement afin de le mettre en position horizontale.
· Presser légèrement le spéculum
avec la main pour écarter les parois afin de chercher le col de
l'utérus. Lorsqu'il est repéré, commencer à visser
doucement.
· Effectuer deux prélèvements à l'aide
d'écouvillons stériles au niveau de l'endocol et du cul-de-sac
postérieur.
· Juste après le prélèvement, noter
les résultats de l'examen macroscopique à savoir l'aspect du col
(normal, saignant, inflammatoire, glaireux) ; l'aspect des leucorrhées
(crémeux, caillé, purulent, mousseux, jaune, autres)
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· Faire l'état frais à la recherche de
parasites (Trichomonas vaginalis, levures bourgeonnantes, filaments
mycéliens, ...) Préciser l'aspect des leucocytes.
· Colorer les frottis du col de l'utérus et du
vagin au Gram et rechercher à l'objectif X100, les coccobacilles, les
bacilles de Doderlein et autres germes. Préciser leur importance (rares,
assez nombreux, indénombrables)
· Conclure (flore normale, intermédiaire,
anormale).
- La coloration de Gram
Elle est réalisée pour différencier les
bactéries Gram+ des bactéries Gram- et se fait sur frottis
confectionné. Le mode de réalisation est le suivant :
· Nettoyer le poste de coloration
· Réunir le matériel
· Fixer le frottis séché en passant trois
fois le dos de la lame à la flamme
· Recouvrir la lame avec le violet de gentiane pendant une
minute
· Rincer à l'eau de robinet
· Recouvrir la lame avec le lugol et attendre une minute
· Rejeter le lugol et rincer à l'eau de robinet
· Recouvrir la lame avec l'alcool à 95° pendant
45 secondes
· Rincer abondamment à l'eau de robinet
· Recouvrir la lame avec la solution de fuchsine et laisser
agir pendant 20 secondes puis rincer et sécher
· Lire la lame colorée à l'objectif à
immersion (X100)
5- L'HEMATOLOGIE
Ce service est le second bâtiment situé juste
à droite à l'entrée du CNHU. Il est composé de deux
unités : la clinique appelée Centre Universitaire des Maladies du
Sang (CUMAS) et le laboratoire. Ce dernier se situe juste à
côté de
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la clinique et est divisé en deux sections : la
cytologie et l'hémostase. On y utilise les appareils comme les
microscopes, les automates de la Numération Formule Sanguine, le
coagulomètre (automate pour l'hémostase), la centrifugeuse, le
spectrophotomètre.
En cytologie, se font les examens tels que la
numération formule sanguine complète ; la numération des
éosinophiles ; le dosage de l'hémoglobine ; la mesure de
l'hématocrite ; les biopsies médullaires ; le
médullogramme, ...
En hémostase, se font le Taux de Prothrombine (TP) ; le
Temps de Saignement (TS) ; le Temps de Coagulation (TC) ; la Vitesse de
Sédimentation (VS) ; le test de grossesse, le Temps de Céphaline
Kaolin (TCK) ...
En ce qui concerne l'hématologie, on
prélève le sang dans les tubes suivants :
- tubes avec anticoagulant (EDTA) pour tous les examens
pratiqués en cytologie
- tubes avec anticoagulant (citrate) pour la VS
- tubes avec anticoagulant (citrate de sodium) pour tous les
examens pratiqués en hémostase (TP, TCA, ...)
- tubes secs avec gel pour le test de grossesse. Ce test peut
également se faire sur les urines.
- Numération des plaquettes sur frottis
sanguin coloré
Les plaquettes sont des éléments très
importants en hématologie et en hémostase. La méthode de
comptage est la suivante :
- Bien homogénéiser le sang
- Tirer un frottis assez fin
- Faire une bonne coloration en évitant les
dépôts de colorants
- Faire la mise au point à une partie du frottis
où les globules rouges ne se chevauchent pas
- Compter par champ microscopique le nombre de globules
rouges et le nombre de plaquettes et noter le nombre de plaquettes
trouvé pour mille (1000) hématies.
Le calcul se fait de la manière qui suit :
Soit N le nombre de plaquettes trouvé pour 1000 globules
rouges (GR) :
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Importance de la qualité du
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Le nombre de plaquettes/ mm3 de sang = N X Nombre
de GR/ mm3 de sang
1000
- Temps de Saignement (TS)
C'est un examen qui se fait directement sur le patient et il
permet d'apprécier l'activité des plaquettes. On évalue
ainsi le temps de formation du clou plaquettaire après un bris
vasculaire.
Pour cet examen, on dispose de :
- tensiomètre
- chronomètre
- tampon
- vaccinostyle
- papier buvard
A l'aide du tensiomètre, on maintient la tension
artérielle du patient à 40 millimètres de mercure. On
choisit une partie non vascularisée du bras que l'on nettoie
correctement avec le tampon d'éther ou d'alcool à 70°. A
l'aide du vaccinostyle, on pique trois fois. On démarre le
chronomètre dès les piqûres faites et on le stoppe à
l'arrêt du sang. A l'aide du papier buvard, on absorbe le sang : c'est la
méthode IVy 3 points. Le temps de saignement normal est inférieur
ou égal à six minutes.
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II- Méthode d'étude 1-
Echantillonnage
La partie technique de notre travail s'est
déroulée au laboratoire d'hémostase du Centre National
Hospitalier Universitaire Hubert Koutoukou Maga (CNHU-HKM).
Nous avons réalisé des prélèvements
sanguins sur trente (30) individus de deux manières
différentes.
Dans un premier temps, nous avons effectué les
prélèvements de manière idéale, telle que
décrite dans le présent document ; c'est-à-dire en
utilisant la méthode Vacutainer (prélèvement sous vide).
L'anticoagulant utilisé est le citrate de sodium à 3,8%.
Dans un second temps, nous avons réalisé, sur
les mêmes individus, les prélèvements en ne respectant pas
le rapport volume sang/ anticoagulant. L'anticoagulant utilisé est le
citrate de sodium à 3,8%.
Nous avons donc deux (02) lots d'échantillons (Lot 1 :
Prélèvements bien réalisés ; Lot 2 :
Prélèvements mal réalisés) sur lesquels nous avons
pratiqué les examens suivants à savoir le Temps de
Céphaline Activé (TCA) et le Taux de Prothrombine (TP).
2- Procédure de réalisation des examens
2-1- Temps de Céphaline Activé (TCA)
C'est un test global qui explore la coagulation
intrinsèque par le temps de recalcification du plasma pauvre en
plaquettes en présence de céphaline (substitut plaquettaire) et
d'un activateur (kaolin ; acide ellagique).
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