c) Méthodes de dosage
La méthode la plus courante pour déterminer la
teneur en alginates d'une algue, consiste à les extraire à chaud
par solubilisation alcaline puis les précipiter pour les quantifier par
pesée (Pérez, 1970; Haug, 1964). Cette méthode
d'extraction sera traitée dans la parie pratique de ce mémoire.
Ou à les doser en solution aqueuse dosage des sucres totaux classiques
peuvent êtres utilisés, par exemple le protocole de Dubois et al.
(1956). Celle-ci peut conduire à une sous-estimation en raison des
pertes qu'elle induit, notamment dans le cas d'alginates dégradés
ou de faible masse Moléculaire qui précipitent mal. [1] [10]
Les alginates, en solution aqueuse, extraits de la biomasse
algale sont dosés par deux méthodes soit par colorimétrie
où par gravimétrie.
i. Méthodes colorimétriques
s Méthode au phénol
(méthode de Dubois) [6] [15]
Des solutions de 5 à 100 ug.ml-1de glucose constitutives
de la gamme étalon sont préparées
simultanément.
= A 200 uL de surnageant ou de la gamme
étalon dans des tubes à essais, on ajoute :
= 200 uL d'une solution aqueuse de
phénol à 5 %.
= Le mélange est
homogénéisé au vortex
= 1mL d'acide sulfurique concentré est
rapidement introduit à la pipette dans le milieu
réactionnel.
= Après homogénéisation au
vortex,
= le mélange est porté au
bain-marie à 100°C durant 5 minutes. Les tubes sont refroidis
dans
un bain de glace et placés 30 minutes à
l'obscurité.
= Les densités optiques sont par la
suite mesurées à 492 nm
s Méthode au bleu d'Alcian (Analyse
des polysaccharides sulfatés) [7] [15]
A partir d'une solution mère d'agar on prépare
une gamme de concentrations croissantes de
50 à 400 mg/l. l'eau distillé servira de blanc
optique.
Chaque tube recevra les solutions suivantes :
= 1ml de suspension algale (remplacer par
l'agar pour la gamme)
= 4ml d'acide acétique (0,5M)
= 50ul du bleu d'alcian (10mg/ml)
= On agite au vortex pour
homogénéiser et on les incubes pendant 12h
= On centrifuge (4000g/20min)
= On lit la DO à 610 nm sur un
Spectrophotomètre Perkin-Elmer
-
ii. Méthode gravimétrique
Cette méthode nécessite la séparation des
alginates de la solution aqueuse soit par centrifugation soit par filtration.
Les alginates recueillis sont séchés à l'étuve puis
pesés et ensuite ramenés au poids de la matière
sèche ou fraiche de l'algue. Cette dernière méthode sera
utilisée pour l'estimation des alginates extraits des deux algues objet
de ce travail. [1] [10] [15]
10
| 
