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Production de glutamate par corynebacterium glutamicum 2262. Mise au point du milieu de culture à  base de son de blé.

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par Hadjer ACHACHA
ferhat abbas - Master 2016
  

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I.1.2. Procédés de production d'acide glutamique

La production de L-glutamate par C. glutamicum résulte de l'application des contraintes (Figure I.3).

Fig. I.3: Cinétique de production du glutamate au cours d'un procédé de production.

Initialement, la source carbonée est utilisée pour la croissance (synthèse de la biomasse), puis une contrainte est appliquée aux C. glutamicum de façon à faire excréter du glutamate parce que l'acide glutamique n'est pas excrété spontanément par les cellules. (Boulahya, 2010).

On distingue deux types de contraintes: contraintes chimiques et contraintes physiques.

I.1.2.1.Contraintes chimiques induisant la production d'acide glutamique

a. Limitation en biotine

C. glutamicum est une bactérie auxotrophe pour la biotine ,cette auxotrophie est due à l'absence du gène bioF qui code la 7-céto-8 aminopilargonate synthétase responsable de l'une des étapes de synthèse de la biotine chez C glutamicum (Hatakeyama et al., 1993a; Hatakeyama et al., 1993b) sa limitation pendant la fermentation glutamique provoque une réduction de la synthèse des phospholipides et une augmentation du rapport acides gras saturés / acides gras insaturés. Cette modification métabolique permet un basculement de la croissance vers la production du glutamate (Clément et al., 1984 ; Clément et Lanéelle, 1986 ; Demain et Bimbaum, 1968; Shibukawa et Ohsawa, 1966).

b. Ajout de pénicilline

La pénicilline inhibe la synthèse du peptidoglycane mais ne modifie ni la teneur en acide gras ni la teneur en phospholipides membranaire (Shibuvkawa et.al, 1968).master 2013. L'ajout de pénicilline permet de produire l'acide glutamique tout en utilisant des matières premières riches en biotine (Sommerson et Philips, 1962).

e. Chapitre I Etude bibliographique

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Ajout de tensioactif

L'ajout de tensioactif diminue la quantité de phospholipides cellulaires de plus de 50% et le rapport acides gras saturé / acides gras insaturés est augmenté contrairement à la pénicilline (Huchenq et al.,1984 ).

l'ajout de tensioactifs comme des acides gras saturés et ses dérivés dans un milieu riche en biotine permet d'excréter du glutamate (Duperray et al., 1992; Takinami et al., 1965; Takinami et al., 1968).

Marquet et al. (1986) ont montré que l'ajout de tensioactifs tel que le polyéthyléneglycol stéarate, polyéthyléneglycol palmitate, ou laurylamine permet d'obtenir un titre final en glutamate compris entre 80 et 100 g.l-1. Dans un milieu riche en biotine, l'ajout des détergents tels que poly-oxyéthyléne sorbitane mono palmitate (Tween 40) ou le poly-oxyéthyléne sorbitane monostéarate (Tween 60) favorise la production de glutamate (Duperray et al., 1992 ; Takinami et al.,1965 ).

f. Ajout d'anesthésique local

Dans un milieu riche en biotine, C. glutamicum excrète jusque 15 g.l-1 de glutamate en présence d'un d'anesthésique local tel que la tétracaine (Lambert et al., 1995) ce qui provoque une altération physique de la membrane sans aucune modification de sa composition ni ses propriétés biochimiques.

g. Limitation en acide oléique et glycérol

Des souches de Corynébacteries auxotrophes pour le glycérol ou des acides gras comme l'acide oléique produisent de glutamate (Kanzaki et al., 1967 ; Nakao et al.,1970). Dans un milieu limité en acide oléique, 100 g.l-1 de glutamate a été atteint avec du glucose comme source de carbone (Miescher, 1975). L'équipe de Nakao s'est intéressée à Corynebacterium alkanolyticum auxotrophe pour le glycérol. La carence en glycérol chez cette bactérie induit l'excrétion d'acide glutamique quelle que soit la source de carbone utilisée (Nakao et al.,1970).

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"Soit réservé sans ostentation pour éviter de t'attirer l'incompréhension haineuse des ignorants"   Pythagore