3.3.4. Abondance du zooplancton et du phytoplancton
3.3.4.1. Echantillonnage, fixation et
conservation
L'échantillonnage du zooplancton est fait à
l'aide d'un filet à plancton, d'une ouverture de 25 cm et de mailles de
50um, entraîné sur une distance de cinq mètres. Tout le
volume recueilli est concentré dans une bouteille de 500 mL.
L'échantillon est ensuite fixé sur le terrain, au formol
(à une concentration finale dans l'échantillon de 5%) pour une
conservation à longue durée.
L'échantillon du phytoplancton est fixé sur le
terrain à l'aide d'une solution de Lugol alcalin (dans les proportions
de 2,5mL pour un flacon de 500mL) afin de le garder pendant trois semaines au
maximum. Mais pour une conservation de plus longue durée, une fixation
complémentaire s'impose : l'utilisation de glutaraldéhyde est
préférée à une concentration finale dans
l'échantillon à 0,5% (Cemagref, 2009).
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protégée en relation avec sa physico-chimie : cas
de
Gbèzoumè dans la commune de Ouidah.
2.3.4.2. Zooplancton
Le comptage du zooplancton a été fait selon le
processus suivant : un sous-échantillon de cent millilitres provenant de
l'échantillon filtré sur le terrain est déposé dans
la cellule de comptage (Figure 11) laquelle est montée au microscope
(Figure 12). Le comptage est fait maille par maille et sans
répétition. La même chose est répétée
trois fois de suite pour les échantillons pris à chaque site. Une
moyenne n, des nombres d'espèces comptées est faite afin de
connaître avec précision le nombre d'individus qui se trouvent
dans les cent millilitres.
L'abondance N est enfin obtenue en divisant le nombre n
d'individus par 100 mL (0,1 litre) puis le tout multiplié par le facteur
de concentration (v/V).
N= +
0,1
12 ×
V
Soit : Avec :
V : Volume total d'eau pris sur le terrain en litre (V=
r2xïxL)
v : Le volume concentré, en litres.
V
V
: Le facteur de concentration de l'échantillon d'eau
r : Rayon de l'ouverture du filet à plancton (0,125 m);
L : Distance sur laquelle est tiré le filet à
plancton en mètres (5 m) ;
Ï : La constante ï ;
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Figure 11 : Cellule de Figure 12: Cellule de comptage
du
comptage du zooplancton zooplancton montée
à la loupe
2.3.4.3. Phytoplancton
La numération cellulaire est la détermination du
nombre de cellules contenues dans un volume précis de liquide. On
exprime le résultat en nombre de cellules par litre. Elle a
été directement réalisée par comptage au
microscopique optique, à l'aide de la cellule de Burker
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(Figure 13). C'est une lame épaisse en verre,
comportant des rigoles et deux quadrillages séparés par une
rigole. La grille centrale (colorée en noir) de chacune des chambres est
subdivisée en 25 petits carreaux ; chaque petit carreaux mesure
0,2mm×0,2mm. L'épaisseur de la chambre est de 0,1mm. Ainsi la
chambre occupée par chaque petit carreaux a un volume de
0,2mm×0,2mm×0,1mm, soit 4×10-9 litre.
Lorsque la suspension cellulaire est trop concentrée,
il est nécessaire de réaliser une dilution préalable. En
effet, lorsque la suspension cellulaire est trop concentrée (grand
nombre de cellules par unité de volume), il est difficile de compter les
individus.
> Remplissage de la cellule de numération
- Humecter les deux plateaux latéraux. Faire
adhérer parfaitement la lamelle aux
plateaux latéraux : pour
cela placer la lamelle sur ces plateaux, puis à l'aide des pouces
posés sur la lamelle, exercer une pression sur la lamelle tout en
pratiquant un mouvement de va et vient jusqu'à perception d'une
résistance.
- Placer la cellule de comptage sur une surface plane.
Homogénéiser la suspension
cellulaire, et prélever
celle-ci à l'aide d'une pipette Pasteur. Remplir la chambre de comptable
par capillarité, en plaçant la pointe de la pipette
légèrement inclinée près de la lamelle sur la
plate-forme centrale quadrillée. Le remplissage doit être fait en
une seule fois, sans bulles d'air, et sans faire déborder le liquide
dans les rigoles. Laisser sédimenter les cellules sur le quadrillage
quelques minutes et passer à la numération.
- Après utilisation, la lame porte-objet et la lamelle
sont immergées dans un bain d'eau
de javel pendant cinq minutes, puis
sont rincées avec de l'eau distillée et essuyées avec du
papier (sans frotter, en particulier au niveau du quadrillage).
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> Numération
- Observer à l'objectif x10 pour repérer la
position du quadrillage et
vérifier
l'homogénéité de la répartition
des espèces à compter (si la répartition est mauvaise,
recommencer).
- Observer ensuite à l'objectif x40 pour réaliser
le comptage (un rectangle par champ).
- Compter les cellules contenues dans 4, 10, 20 ou dans la
totalité des espaces
délimitées.
- Reprendre la même chose pour trois
sous-échantillons différents.
- Pour les espèces chevauchant les lignes de quadrillage,
compter seulement celles qui
chevauchent deux arêtes sur quatre de l'espace
délimitée (en pratique, on choisit de prendre en compte les
cellules chevauchant la ligne horizontale supérieure, et la ligne
verticale droite).
> Calcul des abondances
Après avoir effectué la manipulation, on calcule la
concentration cellulaire de la suspension de cellules étudiée.
Soient :
- na et nb, les moyennes des nombres d'algues des
sous-échantillons, dans 20 carreaux
de 0,2mm×0,2mm, respectivement dans les chambres A et B de
la lame porte-objet ;
- V, le volume total d'eau pris sur le terrain (avec, V=
r2ï×L ; r = 0,125m, le rayon de
l'ouverture du filet
à plancton et L = 5m, la distance sur laquelle le filet à
plancton est entraîné) ; V en litres.
- v, le volume filtré en litre;
- v/V : le facteur de concentration ;
- ï, la constante ï.
N= 0,5X(na+nb)
4X1019 ×
î, V
Le nombre N d'algues dans un litre à chaque point de
prélèvement peut être exprimée par la formule
suivante:
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