Développement d'une technologie en bactériologie : l'aromatogramme

ANNEXE IX : FICHE TECHNIQUE DE LA GELOSE MACCONKEY,

BD

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Consulter le document « MODE D'EMPLOI GENERAL » pour connaître les procédures de manipulation aseptique, les risques biologiques, ainsi que les méthodes d'élimination des produits utilisés.

STOCKAGE ET DUREE DE CONSERVATION

Dès réception, conserver les boites de Pétri dans l'obscurité entre 2 et 8 °C, dans leur emballage d'origine, jusqu'au moment de leur utilisation. Ne pas congeler ni surchauffer. Les boites peuvent être ensemencées jusqu'à leur date de péremption (voir étiquette sur l'emballage) et incubées pendant le délai d'incubation recommandé.

Des boîtes provenant d'une pile ouverte de 10 boîtes sont utilisables pour une semaine lorsqu'elles sont conservées entre +2 et +8 °C dans un endroit propre.

CONTROLE DE QUALITE PAR L'UTILISATEUR

Inoculer les échantillons représentatifs avec les souches ci-dessous (pour plus d'informations, voir le document « MODE D'EMPLOI GENERAL »). Incuber les boîtes de Pétri à 35 #177; 2 °C en atmosphère aérobie. Observer les boîtes de Pétri après 18 à 24 h pour mesurer la croissance, la taille des colonies, la pigmentation et la sélectivité.

Souches	Croissance
Escherichia coli ATCC 25922	Croissance, colonies de couleur rose
Proteus mirabiiis ATCC 12453	Croissance, colonies incolores à beiges, essaimage inhibé
Salmonella Typhimurium ATCC 14028	Croissance, colonies incolores à beiges
Salmonella Abony DSM 4224	Croissance, colonies incolores à beiges
Shigella flexneri ATCC 12022	Croissance, colonies incolores
Enterococcus faecalis ATCC 29212	Inhibition partielle à complète
Staphylococcus aureus ATCC 25923	Inhibition partielle à complète
Non inoculé	Couleur rose clair, légèrement opalescente

METHODE

Matériel fourni

BD MacConkey II Agar (boîtes de Pétri Stacker de 90 mm). Produit soumis à contrôle microbiologique.

Matériel non fourni

Les milieux de culture auxiliaires, réactifs et matériel de laboratoire requis.

Types d'échantillons

Ce milieu sélectif, qui sert à isoler les Enterobacteriaceae ainsi que de nombreux autres bâtonnets Gram-négatifs, est utilisable pour tous les types d'échantillons cliniques et pour de multiples matières non cliniques (voir également la section « CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE »).

Mode opératoire du test

Diluer l'échantillon par striation dès que possible après réception par le laboratoire. La boîte à striation sert principalement à isoler les cultures pures des échantillons contenant des flores mixtes.

Si la matière doit être cultivée directement à partir d'un écouvillon, rouler ce dernier sur une petite surface de la boîte de Pétri près du bord, puis strier l'échantillon depuis cette zone inoculée. Il convient d'ensemencer également un milieu non sélectif tel que la Columbia Agar with 5 % Sheep Blood pour signaler la présence d'autres organismes dans l'échantillon. Incuber les boites de Pétri à l'abri de la lumière, à 35 #177; 2 °C pendant 18 à 24 h, davantage si nécessaire (ne pas utiliser la MacConkey II Agar sous une atmosphère enrichie en CO₂).

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Résultats

Généralement, les colonies isolées sur la BD MacConkey II Agar présentent la morphologie suivante :

Organismes	Croissance
E. coli	Colonies de couleur rose à rose-rouge, parfois cernées par une zone de précipitation biliaire
Enterobacter, Klebsiella	Muqueuse, colonies de couleur rose
Proteus	Colonies incolores, essaimage inhibé autour des colonies isolées*
Salmonella, Shigella	Colonies incolores. Couleur du milieu : orange à ambré
Pseudomonas	Irrégulière, colonies incolores à roses

Les bactéries Gram-positives font l'objet d'une inhibition partielle à complète.

CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE La BD MacConkey II Agar figure parmi les milieux utilisés en standard pour l'ensemencement primaire d'échantillons cliniques et de nombreuses matières non cliniques. Ce milieu favorise le développement de tous les organismes de la famille des Enterobacteriaceae ainsi que de nombreux autres bâtonnets Gram-négatifs, par exemple les Pseudomonas et les genres associés.^5-9 Les non-fermentants ou les autres bâtonnets Gram-négatifs sensibles à ses composants sélectifs ne se développent pas dans ce milieu. Avant d'utiliser ce milieu pour des organismes spécifiques, consulter les chapitres correspondants dans les documents de référence.⁵°⁹

Selon certaines sources, des Enterobacteriaceae et des Pseudomonas aeruginosa sont inhibées sur la MacConkey Agar lorsqu'elle est incubée sous une atmosphère enrichie en CO₂.¹⁰ Il est certes possible de procéder à divers tests diagnostiques directement dans ce milieu, mais, pour obtenir une identification complète, il convient d'employer des tests biochimiques et, si nécessaire, immunologiques, faisant appel à des cultures pures. Consulter les documents de référence appropriés. ^5-7'⁹

REFERENCES

1. MacConkey, A.T. 1900. Note on a new medium for the growth and differentiation of the Bacillus coli communis and the Bacillus typhi abdominales. The Lancet, Part 11:20.

2. MacConkey, A. 1905. Lactose-fermenting bacteria in faeces. J. Hyg. 5:333-379.

3. Levine, M., and H.W. Schoenlein. 1930. A compilation of culture media for the cultivation of microorganisms. The Williams & Wilkins Company, Baltimore.

4. MacFaddin, J.F. 1985. Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria, vol. 1. Williams & Wilkins, Baltimore.

5. Baron, E.J., L.R. Peterson, and S.M. Finegold. 1994. Bailey & Scott's diagnostic microbiology, 9th ed. Mosby-Year Book, Inc., St. Louis.

6. Farmer Ill, J.J. 2003. Enterobacteriaceae: introduction and identification. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.

7. Downes, F.P., and K. Ito. 2001. Compendium of methods for the microbiological

examination of foods. ^4th edition. American Public Health Association (APHA). Washington, D.C. USA.

8. Thomson, R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. ln: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology,

Washington, D.C.

9. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003. Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.

10. Mazura-Reetz, G., T.R. Neblett, and J.M. Galperin. 1979. MacConkey agar: CO, vs. ambient incubation, abstr. C 179, p. 339. Abstr. 79th Annu. Meet. Am. Soc. Microbial. 1979.

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