Annexe.
Annexe 1: Photos des différents types de
gîte prospectés
1. Etang d'eau 2. Bassin de pisciculture
3. Vieux pneu 4. Bac de stockage des poissons
5 (6). Creux d'arbre au sol 7. Creux d'arbre à 2 m du
sol
8. Flaque d'eau 9. Eau d'égout déversée dans
le champ
10. Bac à laver les mains 11 (12). Bac à fleur mal
entretenu
13. Eau usée provenant du restaurant I
Annexe 2:
- Séquences des amorces utilisées
pour l'identification des espèces du complexe Anopheles
gambiae
+
+
-
-
Région conservée du génome (chez toutes
les espèces)
Région variable et séquences spécifiques
d'espèce
Spécificité Séquence Taille du fragment
amplifié
Universelle (UN) 5' GTGTGCCCCTTCCTCGATGT 3'
An. arabiensis (AR) 5' AAGTGTCCTTCTCCATCCTA 3' 315 pb
An. gambiae (GA) 5' CTGGTTTGGTCGGCACGTTT 3' 390pb
An. melas (ML) 5' TGACCAACCCACTCCCTTGA 3' 464pb
An. arabiensis
An. gambiae
An. melas
UN
AR
GA
ML
+
+
+
-
-
+
-
--
- Représentation schématique du test diagnostic de
3 espèces du complexe Anopheles gambiae d'après Scott et
al. (1993)
Annexe 3: Réactifs et quantité pour
ELISA-CSP
- PBS (Phosphate Buffered Saline)
Reconstituer le PBS en poudre Sigma: 9,7 g dans un litre d'eau
distillée
-NP40/BB = Nonidet P40 pour une plaque 2ml =
25ul NP 40 + 2 ml BB (blocking buffer), agiter (préparer pour 5 plaques
10 ml + 125 ul NP 40)
-BB (blocking buffer) = Dans un litre PBS,
ajouter :
1) 5 g de Caséine
2) 0,1 g de Thiomérosal
3) 0,04 g de phenol red
4) 10 g de BSA
Agiter deux heures
-PBS/TWEEN 20 - 500 ul de Tween 20 dans 1 l de
PBS, agiter
Substrat de Peroxydase = pour 3 plaques:
· 5 mg d'Ortho-tolidine dans 0,25ml de
N,N-diméthylformamide
· 30 ml de Tampon citrate
· 12ul de H2O2 à 10% (ou 4 ul 0 30%, ou
6ul à 20% ).
Tampon Citrate pH4
- Préparer le Tampon Citrate pH4 : pour 1 litre:
Acide citique,
Hydroxyde de Sodium 4,48g
- Dissoudre la soude dans 200ml d'eau bidistillée, puis
l'acide citrique dans cette solution. Ajouter 400ml d'eau bidistillée.
Ajuster le pH à 4 avec l'acide Chlorhydrique 1N. Compléter
à 1 l avec l'eau bidistillée.
RECONSTITUTION DES ANTICORPS MONOCLONAUX LYOPHILISES
(ACm)
· milieu reconstitution = 1/2 volume H2O + 1/2 volume
Glycérol
- 1,0 mg ACm + 2 ml milieu reconstitution - 0,5 mg ACm + 1 ml
milieu reconstitution - 0,25 mg ACm + 0,5 ml milieu reconstitution
QUANTITE D'ACM NECESSAIRE :
- Sensibilisation : ACm capture dans du PBS
· CAPTURE pour une plaque P.
falciparum : 15 ul/5 ml PBS
- Révélation : ACm conjugués à
peroxydase dans BB
* CONJUGUES pour une plaque P. falciparum
: 7,5 ul/5ml BB
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