III.3.4.4. Dénombrement
a. Principe :
La culture en surface d'un milieu gélosé,
dite surface count, est recommandée lorsque la description des colonies
peut être utile à l'identification des germes
dénombrés.
La gélose TSA est un milieu riche permettant le
développement de la plupart des micro-organismes susceptibles
d'être rencontrés dans un aliment. Sa formule comprend une peptone
riche en acide aminés libres et de l'extrait de levure. L'association de
ces 2 constituants fournie au milieu de nombreux facteurs de croissance. (J.-L.
MULTON, 1994)
b. Mode opératoire :
ü Préparation du milieu :
- Faire fondre le milieu de base et le refroidir
jusqu'à 45°c.
- Couler en boites de pétri
stériles
- Après solidification, sécher la
surface du milieu à l'étuve à 45°c, couvercle
entrouvert, et laisser refroidir couvercle fermé.
- Marquer les boîtes (10-1,
10-2,...).
ü Ensemencement et incubation :
- A partir de la prise d'essai bien
homogénéisée, porter aseptiquement 0,1 ml (2 gouttes) dans
la boite de pétri contenant la gélose TSA ou encore
Muller-Hinton.
- Etaler l'inoculum à l'aide d'un
étaleur stérile « pipette râteau » que
l'on passe à la surface de la gélose pendant que l'on imprime
à la boite un mouvement circulaire horizontal.
- Laisser sécher 15 mn à la
température du laboratoire.
- Incuber les boites à 37 °c pendant
48 h.
ü Lecture « classique » :
- La lecture s'effectue par comptage visuel. Dans
tous les cas, seules les boites contenant entre 20 à 300 colonies sont
utilisées
- Lorsque le nombre de colonies est 20, on
conclut « moins de 200 UFC/ml ».
- Lorsque le nombre de colonies est 300, on
exprime le résultat par « plus de 3000 UFC/ml ».
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