2.2. Recherche et dénombrement des germes
REVIVIFIABLES
2.2.1. Principe
La recherche et le dénombrement des germes
REVIVIFIABLES se réalise à deux températures
différentes afin de cibler à la fois les micro-organismes
à tendance PSYCHROPHILES soit à 20°C et
ceux franchement MÉSOPHILES soit 37°C.
A partir de l'eau à analyser, porter aseptiquement deux
fois 1ml dans deux boites de Pétri vides
préparées à cet usage et numérotées.
Compléter ensuite chacune des boites avec environ
20 ml de géloseTGEA fondue puis refroidie à
45#177;1°C.
Faire ensuite des mouvements circulaires et de va-et-vient en
forme de « 8 » pour permettre à
l'inoculum de se mélanger à la
gélose.
Laisser solidifier sur paillasse, puis rajouter une
deuxième couche d'environ 5 ml de la même
gélose ou de gélose blanche. Cette double
couche a un rôle protecteur contre les contaminations diverses. (Tony
HART, Paul SHEARS)
2.2.2. Incubation
La première boite sera incubée,
couvercle en bas à 20°C, et la seconde sera
incubée couvercle en bas à 37°C. Pendant
72 h avec :
· Première lecture à 24 h.
· Deuxième lecture à 48 h.
· Troisième lecture à 72 h.
2.2.3. Lecture
Les germes REVIVIFIABLES se présentent dans
les deux cas sous forme de colonies lenticulaires poussant en
masse.
2.2.4. Dénombrement
Il s'agit de dénombrer toutes les colonies, en
tenant compte deux remarques suivantes :
· Ne dénombrer que les boites contenant entre
15 et 300 colonies.
· Le résultat sera exprimé par ml
d'eau à analyser à 22°C et à
37°C. (Tony HART, Paul SHEARS)
Schéma 03
1 ml
Dénombrer les colonies lenticulaires
en masse
22°C
A
Ajouter environ 20 ml de gélose TGEA,
laissé solidifier sur paillasse, ajouter une double couche (5
ml)
Incuber pendant 72 h
Eaux à analyser
37°C
1 ml
B
15
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