ANNEXES
Annexe 1 :Fiche de demande
d'examen PCR
Région : ........................................
District sanitaire :..................... Formation Sanitaire
:.....................Demandeur (Nom/Prénoms):..................
Renseignements sur l'enfant :
Nom et prénom de l'enfant :
......................................................
Date de naissance : /_____/_____/_________ Age : .........Sexe
: M /__/ F /__/
Porte d'entrée : PTME/_ / CREN :/_ / CC :/_ /
HOSPITALISATION : /_ / AUTRES : /_ / (préciser)
..................................
Code de l'enfant : .............................. (si PTME,
code PTME suivi de BB) ProphylaxieARV :oui /__/ non /__/ Si oui NVP /__/
ou AZT /__/
Mode d'alimentation : Allaitement sécurisé /__ /
Substituts du lait /__ / Mixte /__/ Enfant sevré : Oui /__/ Non /__/
date : (.................................)
Renseignements sur la mère :
Vivante : oui /__/ non /__/ Age
:.....Gestité:.........Parité :...Contacts :..........
Mode d'accouchement : Voie Basse /__/ Césarienne
/__/
Code PTME de la mère : .............
Date de découverte de la séropositivité :
/_______/_______/_________
Type de VIH : VIH-1 /__ / VIH-2 /__ / VIH-1+VIH-2
/__/ Inconnu /__/ Traitement ARV : oui /__/ non /__/
Date de début du traitement/_____/____/_______
Protocole d'ARV : ...................................
Prophylaxie ARV : oui /__/ non /__/ Date de début du
traitement /__/___/___
Combinaison ARV :
Prélèvement : Date
/_______/_______/_________ Heure :............
Préleveur (Nom/Prénoms)
:..........................................Signature :
Réception au Labo PCR : Date
/____/____/_______ Nom .........................
Signature :
Annexe 2 :mode opératoire de
CAP/CTM
La procédure de travail est automatisée à
l'aide de l'appareil COBAS®AmpliPrep et de l'analyseur COBAS®
TaqMan® ou COBAS® TaqMan® 48. En suivant le protocole fournis
par le fabriquant, nous avons procéder comme suit :
v Démarrage de l'automate
· Allumer le CTM et le CAP ;
· Allumer l'ordinateur ;
· Ouvrir l'Amplilink (User ID : .......... Et Password :
............)
· Vérifier le niveau du réactif de lavage
et les indications de maintenance du CAP et du CTM ;
· Remplacer le réactif de lavage et
exécuter la maintenance si nécessaire.
v Chargement des réactifs
· Sortir les réactifs du
Réfrigérateur et les charger immédiatement ;
· Charger la Cassettes Réactifs CS1 dans un
portoir Réactif et insérer dans la position A ;
· Charger les Cassettes Réactifs CS2, CS3 et CS4
dans un autre portoir Réactif et insérer le dans une des
positions B à E.
v Traitement des échantillons pour le
diagnostic sur DBS :
· Introduire les cercles dans les S-tubes ouverts
préalablement déposés sur le thermomixer ;
· Refermer les S-tubes ;
· Ouvrir les S-tubes individuellement, introduire 1100
ul de diluent et refermer immédiatement ;
· Prendre 2 S-Tubes et introduire dans le 1er tube 1000
ul de témoin négatif et dans le 2ème 1000 ul de
témoin Positif (Vortexer 20 seconde les témoins avant
l'utilisation) ;
· Incuber les S-tubes contenant contrôles et
échantillons dans le thermomixer à 1000 rpm à une
température de 56°C pendant 10 min.
v Demande pour chaque échantillon et
contrôle
· Pour créer les demandes des échantillons
à analyser, cliquer sur l'icône de demande d'examens ensuite sur
Sample. Pour chaque échantillon cliquer New puis Order et entrer
l'identité du patient puis faire OK. Sélectionner la liste et
choisir le test. A la fin cliquer sur SAVE ;
· Pour saisir le Rack des échantillons du test
à réaliser, cliquer sur Sample rack puis New, noter le
numéro du portoir échantillon dans la case Sample rack ID et
identifier le RUN dans Bach ID ;
· Cliquer sur le test à faire au bas de la
feuille ;
· Cliquer dans la case S pour sélectionner le NC
;
· Déplacer le curseur sur les cases :
ü LPC et HPC, pour la charge virale plasmatique suivantes
et procéder de même pour le (pour les tests quantitatifs)
ü PC, pour le diagnostic moléculaire ;
· Pour les échantillons, sur la ligne en dessous
des contrôles, dans la case Sample ID faire double clique, une liste
apparait. Choisir l'identité du premier échantillon et faire OK ;
· Procéder de la même manière pour
les suivants. On peut sélectionner toute la liste et faire OK si les
identités sont dans l'ordre de la liste de paillasse ;
· Cliquer sur Save.
v Chargement des consommables et échantillons
· Insérer les SPU dans le portoir des SPU. Appuyer
de part et d'autre pour bien les insérer ;
· Charger le portoir SPU dans une des positions J, K ou
L ;
· Charger les K-Tips de M à P ;
· Charger le portoir Echantillon dans une des positions
F, G
ü Association K-Carrier au portoir K-carrier
· Placer le K-carrier sur le portoir ;
· Cliquer sur le System puis sur Sample ;
· Scanner le Barcode du portoir du K-carrier (une
fenêtre apparait) ;
· Scanner immédiatement le Barcode du K-Carrier
(délai 5 secondes) ;
· Cliquer sur OK (délai 5 secondes) ;
· Insérer le portoir K-carrier dans une des
positions de M à P.
NB : Créer toujours le Rack échantillon et le
charger avant d'associer un K-carrier
v Lancement du COBAS AmpliPrep
· Vérifier le chargement des cassettes,
échantillon et system ;
· Cliquer sur Start (sur l'ordinateur) ;
· Noter le temps auquel l'extraction prend fin ;
· A la fin sortir le K-carrier du CAP ;
· Décontaminer le CAP en cliquant faire service
all ;
· Ensuite faire light décontamination
(durée = 30 secondes) ;
· Eteindre le CAP ou faire la maintenance
journalière.
v Lancement du COBAS TaqMan
· Sélectionner TaqMan dans le system ;
· Cliquer Open ;
· A l'aide du K-carrier transporté déposer
le K-carrier dans le thermocycler et fermer le couvercle ;
· Cliquer sur Start pour démarrer l'amplification
et la détection ;
· A la fin visualiser les résultats ;
· Sortir le K-carrier pour valider les résultats.
NB : Pour réutiliser le K-carrier et Sample Rack venant
du Run précédent il faut obligatoirement valider les
résultats.
Matériel et consommables nécessaires
à l'Appareil CAP /CTM : Kit contenant code barre clip
pour les contrôles ; bidon de tampon de lavage ; Tubes SPU ;
K-tubes ; K-tips ; K -carrier + code barre ; Code Barre
clip pour échantillons ;portoir des S-tube et K-tube + Code
Barre ; portoir des tubes SPU ;portoir réactifs + Code Barre
;portoir k-carrier + Code Barre ;Porteur K-carrier ; Porteur
K-tube ; lecteur code barre.
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