IV.2 Test d'aptitude des isolats bactériens
à solubiliser le phosphate en microcosme
La capacité des isolats bactériens à
solubiliser le phosphate a été testée en microcosme dans
les tubes à centrifugeuses stériles en polypropylène de
50ml avec du tricalcium phosphate (Ca3PO4-) ou la roche
phosphatée du Maroc (RP), préalablement stérilisé
à l'UV, comme source de phosphore. Ainsi, 40
25
ml du milieu PVK stérile sont placés dans les
tubes contenant soit 2g du tricalcium phosphate (Ca3PO4-) soit 3g de
la roche phosphatée du Maroc (pour avoir 1g.l-1 de P dans le
milieu) et également 0,4 g de glucose (pour avoir 10 g.l-1 de
glucose dans le milieu) a été ajouté dans le milieu PVK
comme la source de carbone. Les tubes contenant les différents milieux
de culture de PVK sont ensemencés par 1 ml d'inoculum bactérien
isolé (108 bactéries.ml-1 de suspension).
Les tubes sont agités, emballés dans du papier aluminium puis mis
en incubation à l'obscurité pendant dix (10) jours.
Après 10 jours d'incubation, 5 ml des
différentes solutions sont prélevés dans chaque tubes,
centrifugées à 4000 tours pendant 15 minutes, puis le surnageant
obtenu est utilisé pour la détermination des paramètres
(pH, P et nombre de bactéries) du milieu de culture.
Le phosphore est dosé par colorimétrie au
spectrophotomètre à 790nm. Le nombre de bactéries a
été mesuré au spectrophotomètre par la
densité optique à 620nm.
IV.3 Mise en place de l'expérimentation en
Batch
IV.3.1 Incubation des pots en "Batch"
Pour compléter l'étude sur la capacité de
la souche bactérienne sélectionnée à solubiliser
efficacement le phosphate, une expérimentation en pots
a été menée au laboratoire.
30g de sol de plateau stérile ou non stérile ont
été introduits dans chaque pot de 400 cm2 de
superficie. Ensuite 0,6g de paille de riz comme source de carbone, pour avoir
0,15 tonne de paille à l'hectare, puis 1,2g des amendements
phosphatés composés de différentes proportions de roche
phosphatée (RP) et/ou le triple super phosphate (TSP) pour avoir 0,144g
P /pot et enfin 300 ml d'eau distillée stérilisée pour
avoir un taux d'humidité de 80 % ont été ajoutés,
puis homogénéisés. Les traitements inoculés,
reçoivent 250ul de l'isolat bactérien correspondant à
108 bactéries apportées par pot.
Les pots sont agités et mis en incubation pendant
soixante jours (60) jours.
Après 0 ; 10 ; 20 ; 30 ; 40 ; 50 et 60 jours
d'incubation, 5 ml des différentes solutions sont
prélevées dans chaque pot, centrifugées à 4000
tours pendant 15 minutes, puis le surnageant obtenu est utilisé pour la
détermination de l'évolution des paramètres (pH, P, le
carbone organique dissous et le nombre de bactéries) du milieu de
culture.
Le phosphore est dosé par colorimétrie au
spectrophotomètre à 790nm. Le nombre de bactéries a
été mesuré au spectrophotomètre par la
densité optique à 620nm.
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