Comme pour les autres interaction , nous essayons, lors de cet essai , de voir l'effet (génotype * composition hormonale) sur l'embryogenèse somatique. Les expériences sont conduites uniquement avec les meilleurs explants qui sont les hypocotyles.

Les résultats de cet essai (tableau 24) mettent en évidence, l'existence réelle d'un effet interaction (génotype * composition hormonale). Ainsi , nous remarquons que les réactions, à l'égard de l'embryogenèse, varient d'un génotype à un autre et pour un même génotype, elles varient d'un milieu à un autre.

Tableau 24 : Effet de l'interaction (génotype * composition hormonale) sur l'embryogenèse somatique. Les expériences sont conduites avec les explants d'hypocotyles. Les résultats sont obtenus après 4 semaines de la mise en culture des explants . NMES/E : Nombre moyen d'embryons somatiques par explant; PE : Pourcentage embryogène et R : Rendement

Composition hormonale du milieu

Génotype

D3B0,1

D0,1B0,5

A20K0.1

A20B1

NMES/E

V12

V13

B8

15.18+5.31

11.43 + 5.58

9.94 + 4.67

2.70 + 4.00

4.41 + 1.58

3.09 + 0.00

42.02

33.15

26.65

28.15

29.93

34.95

6.38

3.79

2.65

0.77

1.32

1.08

10.71+ 4.96

9.06 + 3.03

7.02 + 5.69

22.31

20.97

2.39

1.90

2.62

11.78+ 5.3

11.41 + 5.7

10.21 + 4.6

32.17

27.78

24.87

3.79

3.17

2.54

11.25 +4.61

6.64 + 4.72

0.78 +6.02

34.66

16.88

36.92

3.90

1.82

3.98

De manière générale, nous constatons que les génotypes appartenant à l'espèce Vermiculatus paraissent plus souples ou plus disposer à produire des embryons somatiques et sur une large gamme de milieu, que les autres espèces. On peut citer à titre d'exemple un ensemble de milieu comme le D3B0,1 , le D0,1B0,5 ; le A20K0.1 et le A20B1 où les espèces Vermiculatus., se sont favorablement exprimées. Ce n'etait pas le cas avec des génotypes comme le B1 , le B6 ou le B8 où le nombre de milieu ayant permis leur expression était limité au D3B0,1 seulement.

S'agissant des corrélations existante entre le pourcentage d'explant embryogène et le nombre moyen d'embryons par explant, elles peuvent être, avec certains génotypes, très positives comme c'est le cas du V6 (R=0.96) ou négative comme le V13 (R= - 0.51).

2.4.2.4.4- Effet de l'interaction (composition hormonale * génotype * de l'explant )

Nous avons décidé, de finir cette série d'expérience en essayant de voir, par le biais d'une analyse de variance, l'influence de l'interaction des trois principaux paramètres, préalablement testés à savoir : l'explant, le génotype et la composition hormonale du milieu, sur l'embryogenèse somatique.

Les résultats du tableau 25 indiquent que le nombre moyen d'embryons par explant et le pourcentage d'explant embryogène, obtenus, en particulier, avec les hypocotyles et les cotylédons des génotypes, version Vermiculatus, et sur milieux D3B0,1 et A20K0.1, sont les meilleurs. Ainsi, les bonnes performances, vis à vis de l'embryogenèse, manifestées d'une part par les hypocotyles et à degré moindre par les cotylédons et d'autres part par les génotypes affiliés à l'espèce Vermiculatus, se confirment une fois de plus.

Tableau 25: Effet de l'interaction (explant * génotype * composition hormonale du milieu) sur l'embryogenèse somatique. Les résultats sont récoltés après 4 semaines de culture.

Composition hormonale du milieu	Génotype	Explants	Nombre moyen d'embryons /explant (A)	Pourcentage d'explant embryogène (B)	Rendement (AxB)
D3B0.1	V12	Hypocotyle	17.67 + 3.54	61.33	10.67
		Cotylédon	12.77 + 7.93	36.02	4.60
		Racine	15.12 + 4.84	25.66	3.88
	V13	Hypocotyle	6.67 + 6.16	17.84	1.19
		Cotylédon	15.82 + 4.49	27.11	4.29
		Racine	7.34 + 4.27	23.70	1.74
	V6	Hypocotyle	16.14 + 5.9	34.57	5.58
		Cotylédon	11.26+ 5.5	29.57	3.35
		Racine	6.89 + 6.56	35.55	2.45
	B 1	Cotylédon	8.11 + 7.48	28.60	2.32
	B6	Cotylédon	9.28 + 8.69	34.80	3.23
	B8	Cotylédon	13.23 +2.95	29.93	3.96
A20K0.1	V12	Hypocotyle	18.48 +5.51	33.06	6.11
		Cotylédon	9.59 + 6.85	35.97	3.45
		Racine	7.26 +4.5	25.06	1.82
	V13	Hypocotyle	11.47 + 5.23	28.68	3.29
		Cotylédon	7.07 + 6.49	23.90	1.69
		Racine	12.08 + 2.29	21.93	2.65
	V6	Hypocotyle	15.04 + 4.5	28.59	4.30
		Cotylédon	8.38 + 6.74	28.75	241
		Racine	10.80 + 7.11	26.01	2.81

Tableau 25: Effet de l'interaction (explant * génotype * composition hormonale du milieu) sur l'embryogenèse somatique. Les résultats sont récoltés après 4 semaines de culture.

Composition hormonale du milieu	Génotype	Explants	Nombre moyen d'embryon par explant (A)	Pourcentage d'explant embryogène (B)	Rendement (AxB)
D0,1B0,5	V12	Hypocotyle	12.45 +8.41	23.69	2.95
		Cotylédon	16.58 + 3.00	14.17	2.35
		Racine	9.50 + 2.51	19.68	1.87
	V13	Hypocotyle	3.97 + 2.26	31.13	2.17
		Cotylédon	10.09 + 5.23	35.67	3.60
		Racine	7.01 + 4.2	29.95	2.10
	V6	Hypocotyle	13.65 + 3.91	33.77	4.61
		Cotylédon	9.43 + 2.30	21.31	2.01
		Racine	4.10 + 3.89	19.02	0.78
A20B 1	V12	Hypocotyle	12.60 +8.08	43.80	5.52
		Cotylédon	13.12 + 2.61	27.82	3.65
		Racine	8.04 + 1.4	31.34	2.52
	V13	Hypocotyle	16.23 + 9.66	39.86	6.47
		Cotylédon	8.30 + 5.38	31.44	2.61
		Racine	7.81 + 2.12	36.74	2.87
	V6	Hypocotyle	13.04 + 7.76	29.52	3.85
		Cotylédon	1.82 + 1.16	21.42	0.39
		Racine	5.07 + 4.05	24.06	1.22

L'analyse de variance est réalisée à partir du rendement obtenu par boite de pétri. Elle correspond à un modèle complètement aléatoire à 5 répétitions et à 3 facteurs croisés :

Les résultats de cette analyse (tableau 26) montrent qu'il existe , dans certains cas, des différences très hautement significatives comme, c'est le cas avec les facteurs : explant ; génotype ; composition hormonale du milieu ; de l'interaction (composition hormonale * explant) ; (génotype * explant) ou (composition hormonale * génotype), dans d'autres, elles sont hautement significatives comme avec l'interaction (milieu * génotype * explant).

De cette analyse de variance , il y a lieu de retenir surtout que le génotype constitue le facteur essentiel, autrement dit le facteur qui influence le plus le processus de l'embryogenèse somatique. En effet, cela se confirment par le fait qu'environ 34.55 % de la variation totale est liée au facteur génotypique.

2.4.2.5-Influence de la source carbonée.

Compte tenu de l'importance capitale que revêt la source carbonée dans les recherches entreprises sur l'embryogenèse somatique, nous avons décidé de tester l'effet de la nature des sucres sur ce processus morphogénétique. Les expériences sont conduites avec des explants d'hypocotyles, de cotylédons et de racines, du génotype V12. Le milieu de culture choisi contient 3 mg/l de 2,4-D et 0,1 mg/l de BA. ( composition hormonale ayant conduit à l'obtention de meilleures réponses à l'embryogenèse). La gamme des sucres utilisés est la même que celle préalablement testée en caulogenèse.

De façon générale, l'embryogenèse s'est manifestée sur l'ensemble des sucres testés. Néanmoins, les sucres disaccharides semblent plus stimulant à ce processus que les monosaccharides. Des résultats, du même ordre, ont été signalé au cours de la caulogenèse. Cela confirme, une fois de plus, l'efficacité des sucres disaccharides, en l'occurrence le maltose et le saccharose, par rapport aux monosaccharides.

Source de variation

D.D.L

Somme des carrés

Carré moyen

F. calculé

Var . totale

Var. Milieux

Var. Génotype

Var. Explant

Var. Milieux * Génotype

Var. Milieux * Explant

Var. Génotype * Explant

VAR.Milieux * Génotype * Explant

Var . Résiduelle

359

288

2347.22

111.67

871.00

89.20

115.83

69.66

173.16

146.26

770.45

6.54

37.22

174.20

44.60

7.72

11.61

17.32

4.88

2.68

13.91***

65.12***

16.67***

2.89***

4.34***

6.47***

1.82**

Tableau 27 : Influence de la source carbonée, sur l'embryogenèse somatique des explants du génotypeV12.L'expérience est conduite sur milieu contenant 3 mg/l du 2,4-D et 0,1 de BA. Les résultats sont prélevés après 4 semaines de culture.

% EC : Pourcentage d'explant caulogène, NMB/E : Nombre moyen de bourgeons par explant et R : Rendement. A,B,C,et D:Désignent les groupes homogènes séparé par le test de NEWMAN et KEULS au seuil de 5% .

Nature du Sucre	Nombre moyen d'embryons explant (A)	Pourcentage embryogène (B)	Rendement (AxB)
Maltose	19.30 + 1.01	34.04	6.57 A
Saccharose	15.19 + 2.74	40.35	6.13 B
Fructose	6.84 + 0.96	30.40	2.08 C
Glucose	3.92 + 3.44	20.40	0.8 D

L'analyse statistique confirme la supériorité des disaccharides, en terme d'efficacité, comparativement aux monosaccharides. Les rendements obtenus en présence du maltose sont statistiquement supérieur à la moyenne générale du rendement relative à l'essai qu'est de l'ordre de 3.89. Les rendements les plus faibles sont obtenus sur les milieux à glucose. La comparaison des rendements moyens de l'essai par le test de NEWMAN & KEULS a permis de classer les sucres par ordre décroissant comme suit :

Les explants eux aussi réagissent différemment selon la nature des sucres employés. Ainsi, nous constatons que les explants d'hypocotyles s'expriment mieux en présence de saccharose qu'en maltose et c'est le contraire qui se reproduit, avec les explants de cotylédons et de racines (tableau 28).

Tableau 28 : Influence de la source carbonée, sur l'aptitude embryogène des explants du génotype V12. L'expérience est conduite sur milieu D3B0,1. Les résultats sont prélevés après 4 semaines de cultures.

NMES/E : Nombre moyen d'embryons somatiques par explant, % EE : Pourcentage embryogène et R : Rendement

SUCRE	Hypocotyle			Cotylédon			Racine
SUCRE	NMES/E	%EE	R	NMES/E	%EE	R	NMES/E	%EE	R
Maltose	25.40+2.52	35.99	9.141	19.26+4.65	33.33	6.161	13.23+1.58	33.33	4.40
Saccharose	17.67+3.54	61.33	10.83	12.77+7.92	29.33	3.74	15.12+4.84	25.33	3.82
Glucose	5.12+4.66	18.66	0.955	4.90+3.66	18.59	0.910	1.76+0.34	30.66	0.54
Fructose	8.8+2.54	30.66	2.698	8.24+2.39	33.33	2.746	3.50 +1.45	22.66	0.793

Régénération via l'organogénèse ou l'embryogénèse somatique chez le Scorpiurus

2.4.2.4.3- Effet de l'interaction (génotype * composition hormonale)

D3B0,1

B8

2.4.2.5-Influence de la source carbonée.